检索结果-南通市图书馆

检索条件"主题词=等温量热滴定法"

共 3 条记录，以下是1-10 订阅

全选清除本页清除全部题录导出标记到"检索档案"

详细简洁

排序：

双酚类化合物的核酸适配体筛选及特性考察

双酚类化合物的核酸适配体筛选及特性考察

引用

作者：陈慧芳湖南大学

学位级别：硕士

双酚类化合物的毒性作用对环境和人类健康构成了潜在的风险,因此需要开发更稳定和强大的识别元件用于建立高效的检测分析方法。核酸适配体有着稳定性高、合成成本低、可编程性与易于修饰等优势,是环境和食品样品分析的理想元件。然而,... 详细信息

双酚类化合物的毒性作用对环境和人类健康构成了潜在的风险,因此需要开发更稳定和强大的识别元件用于建立高效的检测分析方法。核酸适配体有着稳定性高、合成成本低、可编程性与易于修饰等优势,是环境和食品样品分析的理想元件。然而,现有的双酚类化合物核酸适配体库存不能满足传感需求,迫切需要开发更多优质的双酚类化合物核酸适配体。核酸适配体通常通过被称为“指数富集配体系统进化(SELEX)”的体外选择过程产生,但SELEX过程的诸多困难会导致非特异性核酸适配体的富集和真正有效的核酸适配体的丢失。针对不同的目标分子的不同核酸适配体筛选需要综合考虑各种因素,可能不存在标准的SELEX流程。因此,需要在双酚类化合物核酸适配体的筛选研究和特性考察上积累更多的经验,针对性地开发有效的筛选平台。为了填补高质量的双酚类化合物核酸适配体的缺口,本文建立了一种切实可行的双酚类化合物核酸适配体的筛选方案,并基于多种序列分析方法和特性考察方法,对得到的核酸适配体进行了特性考察。具体的研究内容包括以下几个方面:(1)双酚类化合物核酸适配体筛选平台的建立。以双酚A为筛选模型,通过对SELEX过程的关键步骤进行分析和改进,建立了一种切实可行的双酚类化合物核酸适配体筛选平台。主要包括以下:小分子核酸适配体筛选存在分子难以固定、难以修饰等难点,引入Capture-SELEX技术来进行文库固定;PCR扩增偏差会给核酸适配体筛选带来负面影响,使用乳液PCR技术来替代普通PCR并进行文库扩增与富集;对于筛选终点的到来,使用简单、低成本的荧光实时定量PCR扩增反应来跟踪,以避免额外的PCR扩增和气溶胶污染。同时,根据荧光实时定量PCR扩增反应展示的实际情况决定随后一轮筛选的筛选压力。利用改进的筛选方案,我们仅通过7轮SELEX过程便到达了筛选终点,并对最后两轮的文库进行高通量测序。(2)双酚类化合物核酸适配体的特性考察与初步序列优化。结合多种方法对筛选得到的候选序列进行了特性考察,并对其进行序列优化,得到了能够有效结合目标分子的核酸适配体。首先,为确保序列挑选的可靠性,从高通量测序结果入手,结合富集度分析、家族同源性分析和二级结构分类的多种方法对筛选结果进行了序列分析和挑选,并选择了等温量热滴定法对挑选得到的候选适配体序列进行了亲和力测定,获得了高亲和力的apt7.2和apt7.10,其解离常数分别为1.3μM和19.9μM。然后,为提高核酸适配体的应用价值,对全长的核酸适配体进行序列截短和优化,获得了一批表现优异的双酚A核酸适配体,其中长度仅30 nt的2/10-stem的解离常数为3.0μM。最后,结合紫外-可见吸收光谱和圆二色光谱方法,证明了这些表现较佳的BPA核酸适配体的结构转换能力。本研究为开发双酚类化合物传感策略提供了技术基础,具有较高的应用潜力。

关键词：核酸适配体双酚类化合物 SELEX 等温量热滴定法

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

南方水稻黑条矮缩病毒P9蛋白与抗病毒小分子的相互作用研究

南方水稻黑条矮缩病毒P9蛋白与抗病毒小分子的相互作用研究

引用

作者：杨霞贵州大学

学位级别：硕士

近年来,南方水稻黑条矮缩病(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)严重危害着我们国家长江以南稻区的粮食安全。目前对该病害的基础研究还较为薄弱,主要采用“控虫防病”的措施来保证水稻的正常生产。如何有效地筛选抗SRB... 详细信息

近年来,南方水稻黑条矮缩病(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)严重危害着我们国家长江以南稻区的粮食安全。目前对该病害的基础研究还较为薄弱,主要采用“控虫防病”的措施来保证水稻的正常生产。如何有效地筛选抗SRBSDV药物是防治SRBSDV的关键问题,因此建立一个基于SRBSDV关键蛋白为潜在靶标的药物筛选模型,寻找到高活性的抗SEBSDV药物,对防治SRBSDV具有重要意义。本论文以原核表达纯化的P9-1蛋白为靶标,利用紫外光谱法、荧光光谱法、等温量热滴定法和微量热泳动法研究P9-1与抗病毒小分子之间的相互作用。以药物与P9-1蛋白的作用力为指标,进行离体水平的抗SRBSDV药物筛选,建立了基于P9-1为潜在靶标的药物筛选模型。研究结果表明,毒氟磷、宁南霉素、香菇多糖及氨基寡糖与P9-1均有一定的相互作用,其结合常数大小依次为毒氟磷(1.51×105)>宁南霉素(5.60×104)>香菇多糖(4.78×104)>氨基寡糖(5.60×103),而盐酸吗啉胍、嘧肽霉素、病毒唑与SRBSDV P9-1没有相互作用;继而研究了毒氟磷衍生物与SRBSDV P9-1的相互作用,结果显示GUJHZX-013和GUJHZX-025与SRBSDV P9-1均有较强的相互作用,其结合常数分别为:9.12×104和1.41×105,而GUJHZX-005、GUJHZX-031、GUJHZX-035及GUJHZX-041与SRBSDV P9-1没有相互作用。

关键词：南方水稻黑条矮缩病毒P9-1 抗病毒小分子紫外光谱法荧光光谱法等温量热滴定法微量热泳动法

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

基于植物病毒外壳蛋白靶标的药剂筛选与作用机理研究

基于植物病毒外壳蛋白靶标的药剂筛选与作用机理研究

引用

作者：高迪贵州大学

学位级别：硕士

近年来,植物病毒病害在农业生产过程中给农产品质量和数量带来了巨大损失,其中以马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)引起的病毒病害尤为严重。虽然目前对该病害的基础研究有所进展,市面上也有少数几种药剂能有效地治理该种病害,但其具体... 详细信息

近年来,植物病毒病害在农业生产过程中给农产品质量和数量带来了巨大损失,其中以马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)引起的病毒病害尤为严重。虽然目前对该病害的基础研究有所进展,市面上也有少数几种药剂能有效地治理该种病害,但其具体的作用机理尚不清楚,导致研发针对该病原体的特效性药剂难度极大。如何有效地筛选抗PVY药物是防治马铃薯病毒病害的关键问题,因此建立一个以PVY关键蛋白为潜在靶标的药物筛选模型,寻找高活性的抗PVY药物,对防治马铃薯病毒病具有重要意义。本论文以原核表达纯化的马铃薯Y病毒外壳蛋白(Coat protein,CP)为靶标,利用等温量热滴定法、微量热泳动法、农杆菌介导法和蛋白免疫印迹法研究PVY-CP与抗病毒小分子之间的相互作用,测得PVY-CP与抗病毒小分子之间的结合常数、结合位点数及主要作用形式。以药物与PVY-CP的作用力为指标,进行离体水平的抗PVY药物筛选。后续通过突变体蛋白和活体植株的两种验证实验初步探究药剂的作用机理,建立了基于PVY-CP为潜在靶标的药物筛选模型。研究结果表明,在体外,病毒唑、盐酸吗啉胍与PVY-CP均有不同程度的结合力,其结离常数大小为病毒唑(4.56μM)<盐酸吗啉胍(77.6μM),而氨基寡糖、苯并噻二唑与PVY-CP没有相互结合;继而研究了杨梅素衍生物与PVY-CP的相互作用,结果表明LP4、LP6、LP9和LP17与PVY-CP均有不同程度的结合力,其中LP6和LP9与PVY-CP的结合力比LP4和LP17与PVY-CP的结合力强。通过突变体蛋白的验证实验明确了病毒唑与PVY-CP的结合位点为精氨酸(R)153、精氨酸(R)179、天冬氨酸(D)197和赖氨酸(K)217。通过活体验证实验表明了病毒唑对PVY-CP在活体植株内的表达有抑制作用。

关键词：马铃薯Y病毒外壳蛋白相互作用等温量热滴定法微量热泳动法农杆菌介导法

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

全选清除本页清除全部题录导出标记到“检索档案”

共1页 << < 1 > >>

回到顶部

执行限定条件

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：