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等位基因特异pcr结合熔解曲线分析快速检测线粒体DNA A1555G突变

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临床检验杂志 2009年第1期27卷 17-19页

作者：程祖建杨滨江凌陈静杨上英欧启水福建医科大学附属第一医院检验科

目的建立一种线粒体DNA A1555G突变的快速检测方法。方法以45例线粒体耳聋患者为研究对象,采用等位基因特异pcr结合熔解曲线分析对线粒体DNA A1555G突变位点进行检测,根据得到的熔解曲线分析线粒体DNA A1555G突变。并与pcr产物直接测序... 详细信息

目的建立一种线粒体DNA A1555G突变的快速检测方法。方法以45例线粒体耳聋患者为研究对象,采用等位基因特异pcr结合熔解曲线分析对线粒体DNA A1555G突变位点进行检测,根据得到的熔解曲线分析线粒体DNA A1555G突变。并与pcr产物直接测序法结果进行比较。结果线粒体DNA A1555G同质性突变时只出现一个峰且峰尖所对应的Tm为(82±0.5)℃;线粒体DNA A1555G未发生突变时只出现一个峰且峰尖所对应的Tm为(79±0.5)℃;线粒体DNA A1555G异质性突变时出现2个峰且各自峰尖所对应的Tm为(82±0.5)℃和(79±0.5)℃。45例样本的检测结果与pcr产物直接测序法的结果符合率达100%。结论等位基因特异pcr结合熔解曲线分析具有操作简便、结果准确、快速等特点,可作为线粒体DNA A1555G突变检测的常规方法。

关键词：等位基因特异pcr 熔解曲线分析线粒体DNA 突变

利用等位基因特异pcr鉴别虎掌南星及其部分混淆品

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中国中药杂志 2008年第10期33卷 1109-1111页

作者：崔光红唐晓晶黄璐琦钱忠直中国中医科学院中药研究所北京100700 国家药典委员会北京100061

目的:建立中药材虎掌南星的分子鉴定方法,为天南星药材质量控制提供依据。方法:GenBank中下载半夏属、天南星属、犁头尖属物种的叶绿体rpl20基因序列,利用DNAMAN进行比对分析,发现半夏属和虎掌南星的SNP位点,并设计鉴别引物Ptrpl94F,Ptr... 详细信息

目的:建立中药材虎掌南星的分子鉴定方法,为天南星药材质量控制提供依据。方法:GenBank中下载半夏属、天南星属、犁头尖属物种的叶绿体rpl20基因序列,利用DNAMAN进行比对分析,发现半夏属和虎掌南星的SNP位点,并设计鉴别引物Ptrpl94F,Ptrpl708R和Pprpl148F,Pprpl484R,采用等位基因特异pcr方法对虎掌南星、半夏、水半夏3个物种的10个样品进行扩增。结果:引物Pprpl148F和Pprpl484R仅对虎掌南星扩增333 bp条带,半夏、水半夏均无扩增,能准确鉴别虎掌南星。引物Ptrpl94F和Ptrpl708R对半夏、虎掌南星均扩增611 bp条带,水半夏无扩增。结论:本实验建立的等位基因特异pcr方法能准确区别出虎掌南星和半夏、水半夏,为虎掌南星及半夏的正确用药提供了保障。

关键词：虎掌南星半夏水半夏等位基因特异pcr

一种检测细胞微量点突变的方法——等位基因特异的pcr

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生物化学与生物物理进展 2000年第5期27卷 553-555页

作者：殷文璇刘德培李竹红梁植权中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

为了灵敏、方便地检测出细胞群体中含量极低的点突变 ,利用一 β珠蛋白基因簇Gγ 2 0 2C→G突变的杂合细胞株 ,优化传统的等位基因特异pcr的反应条件 ,以定量的pcr产物为模板 ,在含 5 %甲酰胺的体系中用半巢式的等位基因特异引物进行扩... 详细信息

为了灵敏、方便地检测出细胞群体中含量极低的点突变 ,利用一 β珠蛋白基因簇Gγ 2 0 2C→G突变的杂合细胞株 ,优化传统的等位基因特异pcr的反应条件 ,以定量的pcr产物为模板 ,在含 5 %甲酰胺的体系中用半巢式的等位基因特异引物进行扩增 .结果表明 ,该方法灵敏可靠 ,可快速检测到细胞群体中低于 0 0 2 5

关键词：等位基因特异pcr 细胞群体微量点突变检测

油菜抗咪唑啉酮类除草剂基因BnALS1R等位基因特异pcr标记的开发与应用

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作物学报 2013年第10期39卷 1711-1719页

作者：胡茂龙龙卫华高建芹付三雄陈锋周晓婴彭琦张维浦惠明戚存扣张洁夫陈松江苏省农业科学院经济作物研究所/国家油料作物改良中心南京分中心/农业部长江下游棉花与油菜重点实验室江苏南京210014

油菜抗咪唑啉酮类除草剂基因BnALS1R是从抗性突变体M9中克隆获得,抗性基因BnALS1R与野生型基因BnALS1存在1处SNP,即乙酰乳酸合酶第638位丝氨酸残基被天冬酰胺酸替代。为获得油菜抗除草剂基因BnALS1R的分子标记,根据该处点突变,结合获得... 详细信息

油菜抗咪唑啉酮类除草剂基因BnALS1R是从抗性突变体M9中克隆获得,抗性基因BnALS1R与野生型基因BnALS1存在1处SNP,即乙酰乳酸合酶第638位丝氨酸残基被天冬酰胺酸替代。为获得油菜抗除草剂基因BnALS1R的分子标记,根据该处点突变,结合获得的BnALS3与BnALS1序列,开发30条等位基因特异pcr(allele-specific pcr,AS-pcr)引物,采用筛选出的3条AS-pcr引物在F2、BC1和BC2群体中进行pcr扩增。结果表明,该标记有效检测出群体中存在的3种基因型,其分离比分别为1∶2∶1、1∶1、1∶1,均遵循单基因遗传规律。应用该标记对获得的抗性恢复系进行pcr扩增,结果发现所有抗性恢复系均能扩增出抗性基因BnALS1R目的条带,表明3条标记引物可应用于抗性基因的检测。AS-pcr标记的获得将促进以抗性基因进行油菜抗除草剂分子标记辅助选择育种。

关键词：油菜咪唑啉酮类除草剂 BnALS1R 乙酰乳酸合成酶等位基因特异pcr

用等位基因特异pcr检测普通小麦(Triticum aestivum L.)的单核苷酸多态性

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中国农业科学 2006年第7期39卷 1313-1320页

作者：卫波景蕊莲王成社昌小平西北农林科技大学农学院国家基因资源与遗传改良重大科学工程/农业部作物种质资源与生物技术重点实验室/中国农业科学院作物科学研究所

【目的】以2份六倍体小麦Opata85和W7984及其重组近交系(RIL)的111个株系和3份小麦二倍体野生近缘种为材料,研究用等位基因特异pcr检测普通小麦中单核苷酸多态性的方法。【方法】利用直接测序的方法检测2份六倍体小麦和3份小麦二倍体野... 详细信息

【目的】以2份六倍体小麦Opata85和W7984及其重组近交系(RIL)的111个株系和3份小麦二倍体野生近缘种为材料,研究用等位基因特异pcr检测普通小麦中单核苷酸多态性的方法。【方法】利用直接测序的方法检测2份六倍体小麦和3份小麦二倍体野生近缘种TaDREB1基因的DNA序列,在B基因组上发现了2个SNPs。以其为3′端,设计等位基因特异引物及其互补引物,对SNP进行分型,同时研究了特异引物3′端碱基错配对等位基因特异pcr的影响,优化了pcr反应体系。【结果】等位基因特异引物3′端不同位置的碱基错配及不同类型的碱基错配对pcr结果影响较大;在等位基因特异pcr中,Mg2+、dNTP及TaqDNA聚合酶的用量均大于普通pcr。【结论】只要在等位基因特异引物3′端加上合适的错配碱基,并且优化其pcr反应体系,用等位基因特异pcr方法检测六倍体小麦中的单核苷酸多态性是可行的。

关键词：六倍体小麦单核苷酸多态性等位基因特异pcr 碱基错配

基于等位基因特异性pcr原理建立鸡白痢沙门氏菌pcr方法

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中国畜牧兽医 2011年第5期38卷 93-96页

作者：涂玉蓉陈建红任涛张济培司兴奎牛森佛山科学技术学院动物医学系广东佛山528231 华南农业大学兽医学院广东广州510642

根据鸡白痢沙门氏菌与鸡伤寒沙门氏菌的rfbS基因在第237和598位碱基的不同,设计和合成等位基因特异性pcr引物,建立快速检测鸡白痢沙门氏菌的pcr方法,并应用该法对鸡白痢沙门氏菌临床分离样品进行了pcr鉴定。结果显示,该pcr方法能特异性... 详细信息

根据鸡白痢沙门氏菌与鸡伤寒沙门氏菌的rfbS基因在第237和598位碱基的不同,设计和合成等位基因特异性pcr引物,建立快速检测鸡白痢沙门氏菌的pcr方法,并应用该法对鸡白痢沙门氏菌临床分离样品进行了pcr鉴定。结果显示,该pcr方法能特异性地鉴定鸡白痢沙门氏菌,检测灵敏度达18 pg/μL DNA,4.7×104CFU/mL菌液,表明建立的等位基因特异性pcr方法能准确而快速地鉴定鸡白痢沙门氏菌。

关键词：等位基因特异pcr 鸡白痢沙门氏菌 rfbS基因

等位基因特异pcr检测N-乙酰化转移酶遗传多态性研究

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癌变．畸变．突变 2001年第2期13卷 105-108页

作者：杨明晶郑伟娟奚清丽金振国江苏省职业病防治研究所生化免疫研究室江苏南京210028 南京大学生物化学系江苏南京210008

目的与方法 :改良一种适用于流行病学研究的N 乙酰化转移酶 (NAT2 )基因型的等位基因特异pcr(AS pcr)检测方法 ,分析了 3个NAT2基因突变点 :481T、5 90A、85 7A ,并用此法对 76例南京地区健康人群的NAT2基因型多态性进行了研究。从而也... 详细信息

目的与方法 :改良一种适用于流行病学研究的N 乙酰化转移酶 (NAT2 )基因型的等位基因特异pcr(AS pcr)检测方法 ,分析了 3个NAT2基因突变点 :481T、5 90A、85 7A ,并用此法对 76例南京地区健康人群的NAT2基因型多态性进行了研究。从而也检验了该方法。结果 :该人群中各基因频率 :Wt(野生型 )为 0 .5 72 3:481T为 0 .0 395 ;5 90A为 0 .2 36 8;85 7A为 0 .15 13。与白种人比较差异有显著性 ,而与文献报道的亚州人群频率分布特征基本一致。结论 :南京地区健康人群中与快反应相关的NAT2基因型占多数 (82 .9% ) ;本文改良的AS pcr检测方法经验证为NAT2基因多态性研究的有效实验手段。

关键词：等位基因特异pcr 遗传多态性 N-乙酰化转移酶

等位基因特异性pcr检测ABCG2基因421位单核苷酸C>A多态性

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等位基因特异性PCR检测ABCG2基因421位单核苷酸C>A多态性

CYP17基因多态性等位基因特异性pcr检测方法的建立

中国转化医学和整合医学学术交流会（上海站）

作者：孙红王果许标波彭艳李泰霖曾樱蔡加琴朱院山中南大学临床药理研究所湘雅医学院临床药理研究室湖南省重点实验室

目的:应用等位基因特异性pcr(allele specific pcr,简称AS-pcr)法检测ABCG2基因421位C>A变异,以建立一种快速检测该位点多态性的方法。方法:应用焦磷酸测序法(pyrosequencing)和AS-pcr法同时检测150例研究对象ABCG2基因421位C>A变异的... 详细信息

目的:应用等位基因特异性pcr(allele specific pcr,简称AS-pcr)法检测ABCG2基因421位C>A变异,以建立一种快速检测该位点多态性的方法。方法:应用焦磷酸测序法(pyrosequencing)和AS-pcr法同时检测150例研究对象ABCG2基因421位C>A变异的多态性,并对二者的结果进行比较研究。结果:用焦磷酸测序法检测结果与AS-pcr法检测ABCG2基因421位单核苷酸C>A多态性结果一致。ABCG2421CC,421CA和421AA型频率分别为53%、40%、7%。结论:AS-pcr在单点突变多态性的检测中,具有时间短、速度快和成本低等特点,在满足引物模板间碱基错配能阻止引物延伸的条件下,可优先选用此法。

关键词：等位基因特异pcr ABCG2 单核苷酸多态性

来源： cnki会议评论

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现代中西医结合杂志 2011年第4期20卷 485-486页

作者：陈巧云李皓徐红美冷加燕江苏大学附属人民医院江苏镇江212001

目的建立快速准确检测CYP17基因单核苷酸多态性的新方法。方法用等位基因特异pcr(AS-pcr)方法对53例外周血标本CYP17基因单核苷酸多态性位点rs743572进行基因分型。结果 AS-pcr测定结果与聚合酶链式反应-限制性片断长度多态性方法(pcr-R... 详细信息

目的建立快速准确检测CYP17基因单核苷酸多态性的新方法。方法用等位基因特异pcr(AS-pcr)方法对53例外周血标本CYP17基因单核苷酸多态性位点rs743572进行基因分型。结果 AS-pcr测定结果与聚合酶链式反应-限制性片断长度多态性方法(pcr-RFLP)的测定结果一致。结论采用AS-pcr检测CYP17基因多态性准确、快速。

关键词：等位基因特异pcr CYP17 多态性