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第一鳃弓外胚间充质细胞体外培养模型的构建

中国组织工程研究与临床康复 2010年第32期14卷 5983-5987页

作者：闫征斌侯景秋闫雪丹王天祥刘屹松大庆油田总医院口腔科黑龙江省大庆市163001 佳木斯大学口腔医学院黑龙江省佳木斯市154004 大庆油田总医院康复科黑龙江省大庆市163001

背景:在牙颌面的发育形成过程中,第一鳃弓作为过渡结构,发挥着不可替代的重要作用。目前,国内外对于第一鳃弓外胚间充质细胞的研究资料相对较少。目的:分离培养小鼠第一鳃弓外胚间充质细胞。方法:显微解剖E9.5胎鼠第一鳃弓,采用组织块... 详细信息

背景:在牙颌面的发育形成过程中,第一鳃弓作为过渡结构,发挥着不可替代的重要作用。目前,国内外对于第一鳃弓外胚间充质细胞的研究资料相对较少。目的:分离培养小鼠第一鳃弓外胚间充质细胞。方法:显微解剖E9.5胎鼠第一鳃弓,采用组织块法和酶消化法对其进行原代培养,通过细胞形态观察、细胞生长曲线描记、计算细胞倍增时间和特异性标记物检测对其细胞生物学特性进行研究。结果与结论:组织块法原代培养细胞的时间7～10d,上皮细胞成分较多,酶消化法原代培养细胞时间两三天,上皮细胞成分较少,两组细胞传代后细胞形态、细胞生长曲线、群体倍增时间无明显差异。特异性标记物CD57/HNK1、波形丝蛋白免疫细胞化学染色呈均一表达。提示采用酶消化法可以在短时间内获得数量充足、纯度较高、满足实验要求的细胞。

关键词：第一鳃弓分化发育外胚间充质细胞牙再生

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第一鳃弓外胚间充质细胞定向脂肪细胞的分化

中国组织工程研究与临床康复 2011年第19期15卷 3559-3562页

作者：侯景秋闫征斌杨旭大庆油田总医院口腔科黑龙江省大庆市163001 佳木斯大学口腔医学院黑龙江省佳木斯市154004

背景:第一鳃弓作为过渡结构,在牙颌面的发育形成过程中,发挥着重要作用。目的:观察第一鳃弓外胚间充质细胞自我更新能力,以及体外诱导分化成为脂肪细胞的可能性。方法:分离培养E9.5Balb/c胎鼠第一鳃弓外胚间充质细胞,以端粒酶原位杂交和... 详细信息

背景:第一鳃弓作为过渡结构,在牙颌面的发育形成过程中,发挥着重要作用。目的:观察第一鳃弓外胚间充质细胞自我更新能力,以及体外诱导分化成为脂肪细胞的可能性。方法:分离培养E9.5Balb/c胎鼠第一鳃弓外胚间充质细胞,以端粒酶原位杂交和BrdU渗入实验检测外胚间充质细胞的增殖能力。相差显微镜下观察细胞形态变化和生长规律,免疫细胞化学染色鉴定细胞表面标志,cDNA探针原位杂交、免疫荧光化学染色观察细胞增殖能力,油红O染色、RT-PCR产物凝胶电泳观察细胞成脂诱导结果。结果与结论:端粒酶原位杂交和BrdU摄取实验阳性,诱导后细胞表现出典型的脂肪细胞形态,大部分细胞油红O染色阳性,RT-PCR结果显示诱导后细胞表达了脂蛋白脂酶。提示第一鳃弓外胚间充质细胞具有较高的自我更新能力,并可定向诱导分化成为脂肪细胞。

关键词：第一鳃弓间充质细胞诱导分化脂肪细胞

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小鼠第一鳃弓的颅神经嵴细胞谱系追踪及特异性分子标记的筛选

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小鼠第一鳃弓的颅神经嵴细胞谱系追踪及特异性分子标记的筛选

作者：陈美玲福建师范大学

学位级别：硕士

在哺乳动物颅面部发育过程中,神经嵴细胞从神经管背壁分离出,向侧腹方迁移至鳃弓,广泛迁移和增殖形成不同衍生物,最终形成颅面部器官,人类胚胎中神经嵴细胞的迁移异常会导致颅面部发育异常。因此解析颅神经嵴细胞（cranial neural crest... 详细信息

在哺乳动物颅面部发育过程中,神经嵴细胞从神经管背壁分离出,向侧腹方迁移至鳃弓,广泛迁移和增殖形成不同衍生物,最终形成颅面部器官,人类胚胎中神经嵴细胞的迁移异常会导致颅面部发育异常。因此解析颅神经嵴细胞（cranial neural crest cell,CNCC）谱系和迁移分化的分子调控机制极其重要。我们的前期研究发现Pax2-Cre小鼠能够特异性标记颅神经嵴细胞迁移到第一鳃弓的过程,我们进一步利用该小鼠开展细胞谱系的精细追踪,同时进行单细胞RNA-Seq的分析,寻找参与颅神经嵴细胞的迁移分化的关键转录因子。首先,我们收取E8.0至E10.5时期的Pax2-Cre;R26R小鼠胚胎,精细观察颅神经嵴细胞迁移过程。结果显示,颅神经嵴细胞自E8.0神经板时期迁移出来,随后不断增殖和迁移至第一鳃弓组织中。我们进一步利用E15.5时期的Pax2-Cre;R26R小鼠,通过透明化成像和石蜡切片免疫荧光的方法,解析第一鳃弓来源的颅神经嵴细胞分化形成哪些颅面部器官。结果显示,第一鳃弓来源的颅神经嵴细胞分化形成了颅面部的间充质细胞,参与颅面部中切牙、磨牙、舌、腭、咀嚼肌结缔组织和梅克尔软骨的发育。其次,为了解析颅神经嵴细胞迁移到第一鳃弓后分化的特异性分子标记,我们对E10.5时期的Pax2-Cre;R26R小鼠第一鳃弓组织进行了单细胞转录组测序,得到的数据经聚类分群,一共得到4个细胞亚群,其中以间充质细胞为主,还有部分上皮细胞、肌细胞及内皮细胞。进一步,我们整合E10.5、E13.5和E14.5三个不同发育时期颅面部组织的单细胞转录组数据,通过数据降维聚类分析,得到11种主要细胞类型,分别为成骨细胞、增殖细胞、颅面部间充质细胞、软骨细胞、上皮细胞、红细胞、牙源性间充质细胞、巨噬细胞、神经胶质细胞、内皮细胞和肌细胞。我们对于整合的单细胞数据进行了发育轨迹分析,发现第一鳃弓的颅神经嵴细胞随着胚胎发育,在基因表达层面上,沿着五个走向分化为成软骨、成骨、牙源性间充质、颅面间充质和肌细胞谱系,与我们上一部分的组织学观察结果相符合。因此,我们通过不同时期的颅面部单细胞数据整合分析表明,E10.5时颅神经嵴细胞迁移到第一鳃弓中开始了细胞的分化。随后,我们对E10.5时期的Pax2-Cre;R26R小鼠第一鳃弓组织进行了详细分析,发现第一鳃弓间充质细胞群并不是完全由颅神经嵴细胞谱系构成,说明第一鳃弓的间充质组织中存在异质性,即第一鳃弓间充质组织并非完全来源于颅神经嵴细胞。将第一鳃弓的间充质细胞群进行进一步细胞分群,发现能够细分为4个图案化形式的细胞亚群。其中2个细胞亚群由颅神经嵴细胞组成,而另外2个细胞亚群主要由成纤维细胞组成。因此我们的研究首次从分子层面提出成纤维细胞与神经嵴来源的细胞共同组成第一鳃弓组织的新理论。为了分析第一鳃弓中颅神经嵴细胞分化表达的特异性基因,我们收取E10.5的Pax2-Cre;R26R小鼠的第一、二鳃弓组织进行单细胞测序,通过数据对比,我们筛选到5个在第一鳃弓组织中特异性高表达,在第二鳃弓组织中低表达的基因:Lhx6、Lhx8、Tbx3、Gbx2和Osr2。Wnt1-Cre小鼠也是常见的用于颅神经嵴细胞谱系追踪的小鼠,我们进一步将Pax2-Cre小鼠与Wnt1-Cre小鼠对比,对二者所标记的颅神经嵴细胞从迁移和分化轨迹以及基因表达差异层面进行精细解析。结果显示,二者迁移模式相似,皆起源神经板,迁移至鳃弓后逐渐向颅面部分化;不同之处在于Pax2-Cre小鼠仅标记迁移到第一鳃弓的颅神经嵴细胞,而Wnt1-Cre同时标记了迁移到第一鳃弓和第二鳃弓的颅神经嵴细胞。在分化轨迹层面,E15.5的Wnt1-Cre;R26R与Pax2-Cre;R26R所标记的颅神经嵴细胞分化轨迹大致相同,二者皆标记了分化为切牙和磨牙间充质、舌、上腭板、咀嚼肌结缔组织及梅克尔软骨的颅神经嵴细胞,但Wnt1-Cre在上腭板和舌中标记颅神经嵴细胞更多。在单细胞转录组层面,整合分析E10.5的Wnt1-Cre;R26R及Pax2-Cre;R26R小鼠第一鳃弓单细胞测序数据,分析第一鳃弓中Wnt1-Cre与Pax2-Cre所标记的颅神经嵴细胞在基因表达的差异性,在第一鳃弓间充质中,Pax2-Cre所标记的颅神经嵴细胞特异性表达的基因主要参与成骨作用,而Wnt1-Cre所标记的颅神经嵴细胞特异性表达的基因主要参与了肢体发育、细胞迁移、及成骨作用生物学功能中。综上所述,本研究利用Pax2-Cre小鼠特异性标记第一鳃弓中的颅神经嵴细胞谱系,发现其能分化成为软骨、成骨、牙源性间充质、颅面间充质和肌细胞谱系。另外,还首次发现了小鼠的第一鳃弓组织是由颅神经嵴来源细胞和成纤维细胞共同组成,进一步比较第一鳃弓与第二鳃弓之间的基因表达差异性,筛选出Lhx6、Lhx8、Tbx3、Gbx2和O

关键词：第一鳃弓颅神经嵴细胞单细胞测序谱系分化

第一鳃弓外胚间充质细胞牙向分化上调基因组抑制消减文库的建立

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第一鳃弓外胚间充质细胞牙向分化上调基因组抑制消减文库的建立

第一鳃弓外胚间充质细胞牙向分化上调基因组抑制消减文库的建立

第四届中国国际暨第七次全国口腔颌面外科学术会议

作者：闫征斌刘磊郑晓辉田卫东林云锋李志勇四川大学华西口腔医学院口腔颌面外科四川大学华西口腔医学院口腔颌面外科四川大学华西口腔医学院口腔颌面外科四川大学华西口腔医学院口腔颌面外科四川大学华西口腔医学院口腔颌面外科四川大学华西口腔医学院口腔颌面外科

目的建立第一鳃弓外胚间充质细胞牙向分化上调基因抑制消减文库。方法在相同的条件下,体外培养E9.5、E16.5第一鳃弓外胚间充质细胞和牙乳头细胞,采用抑制消减杂交技术（SSH）,以第一鳃弓外胚间充质细胞为驱赶子（Driver）,建立其牙向分... 详细信息

目的建立第一鳃弓外胚间充质细胞牙向分化上调基因抑制消减文库。方法在相同的条件下,体外培养E9.5、E16.5第一鳃弓外胚间充质细胞和牙乳头细胞,采用抑制消减杂交技术（SSH）,以第一鳃弓外胚间充质细胞为驱赶子（Driver）,建立其牙向分化上调基因消减文库,并检测接头连接效率、消减效率等指标。结果经过SSH 和克隆,获得了包含132个克隆的消减文库。结论成功地构建了高质量的第一鳃弓外胚间充质细胞牙向分化上调基因消减文库。

关键词：第一鳃弓消减杂交分化文库

来源： cnki会议评论

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第一鳃弓外胚间充质细胞牙向分化上调基因组抑制消减文库的建立

第一鳃弓外胚间充质细胞牙向分化下调基因组抑制消减文库的建立

2007年第七次全国牙体牙髓病学学术会议

作者：闫征斌刘磊田卫东林云锋李志勇口腔生物医学工程教育部重点实验室口腔生物医学工程教育部重点实验室口腔生物医学工程教育部重点实验室口腔生物医学工程教育部重点实验室口腔生物医学工程教育部重点实验室

目的:建立第一鳃弓外胚间充质细胞牙向分化上调基因抑制消减文库。方法:在相同的条件下,体外培养E9．5、E16．5第一鳃弓外胚间充质细胞和牙乳头细胞,采用抑制消减杂交技术（SSH）,以第一鳃弓外胚间充质细胞为驱赶子（driver）,建立其牙... 详细信息

目的:建立第一鳃弓外胚间充质细胞牙向分化上调基因抑制消减文库。方法:在相同的条件下,体外培养E9．5、E16．5第一鳃弓外胚间充质细胞和牙乳头细胞,采用抑制消减杂交技术（SSH）,以第一鳃弓外胚间充质细胞为驱赶子（driver）,建立其牙向分化上调基因消减文库,并检测接头连接效率、消减效率等指标。结果:经过SSH和克隆,获得了包含132个克降的消减文库。结论:成功地构建了高质量的第一鳃弓外胚间充质细胞牙向分化上调基因消减文库。

关键词：第一鳃弓消减杂交分化文库

来源： cnki会议评论

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第一鳃弓外胚间充质细胞牙向分化下调基因组抑制消减文库的建立

第四届中国国际暨第七次全国口腔颌面外科学术会议

作者：闫征斌刘磊田卫东林云峰李志勇四川大学华西口腔医学院口腔颌面外科四川大学华西口腔医学院口腔颌面外科四川大学华西口腔医学院口腔颌面外科四川大学华西口腔医学院口腔颌面外科四川大学华西口腔医学院口腔颌面外科

目的建立第一鳃弓外胚间充质细胞牙向分化下调基因抑制消减文库。方法在相同的条件下,体外培养E9.5、E16.5第一鳃弓外胚间充质细胞和牙乳头细胞,采用抑制消减杂交技术（SSH）,以第一鳃弓外胚间充质细胞为检测子（Tester）,建立其牙向分... 详细信息

目的建立第一鳃弓外胚间充质细胞牙向分化下调基因抑制消减文库。方法在相同的条件下,体外培养E9.5、E16.5第一鳃弓外胚间充质细胞和牙乳头细胞,采用抑制消减杂交技术（SSH）,以第一鳃弓外胚间充质细胞为检测子（Tester）,建立其牙向分化下调基因消减文库,并检测接头连接效率、消减效率等指标。结果经过SSH 和克隆,获得了包含184个克隆的消减文库。结论成功地构建了高质量的第一鳃弓外胚间充质细胞牙向分化下调基因消减文库。

关键词：第一鳃弓消减杂交分化文库

来源： cnki会议评论

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耳鼻咽喉的发生学

中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 1995年第5期30卷 311-313页

作者：王荣光姜泗长顾瑞北京解放军总医院解放军耳鼻咽喉科研究所

耳鼻咽喉的发生学王荣光，姜泗长，顾瑞胚胎学或称为发生学，是研究从生命的开始人体各结构从无到有，从简单到复杂的发生、发展过程。作为临床医生，熟悉胚胎学知识，有助于正确诊断和治疗各种先天性疾病。一、耳的发生１．外耳的发生... 详细信息

耳鼻咽喉的发生学王荣光，姜泗长，顾瑞胚胎学或称为发生学，是研究从生命的开始人体各结构从无到有，从简单到复杂的发生、发展过程。作为临床医生，熟悉胚胎学知识，有助于正确诊断和治疗各种先天性疾病。一、耳的发生１．外耳的发生：耳廓是由第一鳃沟周围的６个小丘样...

关键词：外胚层第一鳃沟外耳耳屏第一鳃弓先天性胆脂瘤中耳上胚层咽囊发生学生物学结节形成耳廓软骨性鼻内胚层下胚层鼻甲上皮板耳鼻咽喉

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第一鳃弓综合征1例

山东大学耳鼻喉眼学报 1998年第3期12卷 164-164页

作者：马玉起巨野县人民医院

患者男,10岁。1997年8月21日因右耳听力减退而就诊。患儿出生后父母发现右颜面短小畸形,神态哭声正常。同时发现无肛门,即行肛门成形术。检查:颜面短小,双睑裂小,瞳孔正中,右颊部凹陷,颧弓存在,双侧下颌骨对称性发育不全,双外耳道正常,... 详细信息

患者男,10岁。1997年8月21日因右耳听力减退而就诊。患儿出生后父母发现右颜面短小畸形,神态哭声正常。同时发现无肛门,即行肛门成形术。检查:颜面短小,双睑裂小,瞳孔正中,右颊部凹陷,颧弓存在,双侧下颌骨对称性发育不全,双外耳道正常,鼓膜内陷,标志不清,x线片示双下颌骨髁突发育差,下颌骨升支短且细,乳突为硬化型。纯音测听示右耳混合性聋,右耳气导平均损失50dB,左耳大致正常。脑干诱发电位检查示右耳听阈增高,Ⅰ～Ⅴ波潜伏期延长,波幅降低,波形差,提示:右耳听神经异

关键词：混合性聋综合征综合病症第一鳃弓下领骨

北方狭口蛙个体发育的研究——Ⅰ.鳃和肺的发生、发展与变化

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Current Zoology 1958年第1期 35-52+104-109页

作者：江先羣,李汝祺北京大学生物学系北京大学生物学系

本论文敍述了北方狭口蛙Kaloula borealis(Barbour)鳃和肺的发生,发展及在变态过程中的变化。这里所研究的间题可以说是著者在1934年工作的继续。当时李汝祺氏曾对这种蛙的早期发育做了观察,发现它的交配和产卵,在时间和空间上都与本地... 详细信息

本论文敍述了北方狭口蛙Kaloula borealis(Barbour)鳃和肺的发生,发展及在变态过程中的变化。这里所研究的间题可以说是著者在1934年工作的继续。当时李汝祺氏曾对这种蛙的早期发育做了观察,发现它的交配和产卵,在时间和空间上都与本地的一般其他蛙类有所不同;它的繁殖季节是从6月中旬开始,到了8月底即告结束。这个时期正是北京及其附近地区的雨季,雨水的积存使地面上形成很多比较浅的水洼;就是原有乾的沟渠也为积水所填满。狭口蛙就产卵在这些水洼和沟渠里面。这样的自然环境当然

关键词：内鳃腹部腹侧躯干外鳃第一鳃弓北方狭口蛙