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端粒酶反转录酶在肿瘤发生和发展中的作用机制

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肿瘤 2023年第5期43卷 448-456页

作者：魏志敏李子帅刘文斌曹广文海军军医大学流行病学教研室上海200433

端粒酶反转录酶(telomerase reverse transcriptase,TERT)是端粒酶活性的限制因子,通过维持端粒长度控制细胞的衰老及凋亡。TERT在大多数正常细胞中不表达或仅有少量表达,但在肿瘤细胞中的表达升高,对于维持肿瘤细胞的无限复制能力有重... 详细信息

端粒酶反转录酶(telomerase reverse transcriptase,TERT)是端粒酶活性的限制因子,通过维持端粒长度控制细胞的衰老及凋亡。TERT在大多数正常细胞中不表达或仅有少量表达,但在肿瘤细胞中的表达升高,对于维持肿瘤细胞的无限复制能力有重要作用。本文综述了调控TERT表达的主要转录因子家族、单核苷酸多态性位点以及DNA甲基化、组蛋白修饰和非编码RNA等表观遗传修饰改变;讨论了上述分子事件在肿瘤发生和发展中的作用;总结了重要的TERT单碱基变异及病毒整合变异;在此基础上讨论了其在肿瘤诊断和预后中的应用。

关键词：肿瘤端粒端粒酶反转录酶

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端粒酶反转录酶在长骨造釉细胞瘤中的表达

中国组织工程研究与临床康复 2008年第3期12卷 512-514页

作者：蔡志坚沈阳市第四人民医院辽宁省沈阳市110031

目的:端粒酶反转录酶作为端粒酶蛋白的主要组分,被称为端粒酶活性作用的限速因子,在细胞增生过程中起重要作用。观察长骨造釉细胞瘤中端粒酶反转录酶的表达及其反义寡核苷酸对其表达和细胞增生的抑制作用。方法:实验于2006-02/2007-04... 详细信息

目的:端粒酶反转录酶作为端粒酶蛋白的主要组分,被称为端粒酶活性作用的限速因子,在细胞增生过程中起重要作用。观察长骨造釉细胞瘤中端粒酶反转录酶的表达及其反义寡核苷酸对其表达和细胞增生的抑制作用。方法:实验于2006-02/2007-04在沈阳市第四人民医院完成。体外培养长骨造釉细胞瘤细胞,在24,48,72h后采用链酶亲合素-生物素-过氧化物酶复合物法作端粒酶反转录酶免疫组织化学检测;将2.5,5.0μmol/L和10.0μmol/L不同浓度的端粒酶反转录酶反义寡核苷酸和正义寡核苷酸分别作用于体外培养的长骨造釉细胞瘤细胞,无寡核苷酸混合液的DMEM液作空白对照,采用免疫组织化学方法检测端粒酶反转录酶的表达;四甲基偶氮唑盐比色法检测在不同浓度的端粒酶反转录酶反义寡核苷酸和正义寡核苷酸作用下,长骨造釉细胞瘤细胞生长活性及其生长抑制率。结果:①体外培养的长骨造釉细胞瘤细胞可表达端粒酶反转录酶,在5.0,10.0μmol/L反义寡核苷酸作用下,端粒酶反转录酶的表达明显受抑制,与空白对照组比较,差异有显著性意义(P端粒酶反转录酶反义寡核苷酸能明显抑制长骨造釉细胞瘤细胞增生活性,并呈剂量依赖性。结论:一定浓度端粒酶反转录酶反义寡核苷酸能序列特异性地抑制长骨造釉细胞瘤细胞端粒酶反转录酶表达和增生活性。

关键词：长骨造釉细胞瘤寡核苷酸类反义端粒酶反转录酶

端粒酶反转录酶基因表达与星形胶质细胞活化的相关性

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中华创伤杂志 2013年第11期29卷 1101-1105页

作者：杨明坤张旭刘川吴继生李德毅盛伟斌巴中市中心医院骨科 636000 新疆医科大学第一附属医院脊柱外科

目的探讨端粒酶反转录酶（telomerase reverse transcriptase，TERT）基因的表达与星形胶质细胞活化的相关性。方法20只雄性SD大鼠（新生3d）培养的星形胶质细胞，按随机数字表法分为4组：A组为活化未转染星形胶质细胞，B组为活化转染... 详细信息

目的探讨端粒酶反转录酶（telomerase reverse transcriptase，TERT）基因的表达与星形胶质细胞活化的相关性。方法20只雄性SD大鼠（新生3d）培养的星形胶质细胞，按随机数字表法分为4组：A组为活化未转染星形胶质细胞，B组为活化转染星形胶质细胞，C组为未活化星形胶质细胞，D组为活化空白质粒转染星形胶质细胞，每组5只。通过细胞增殖试剂盒（cellcountingkit-8，CCK-8）检测各组细胞的增殖率；免疫细胞化学法检测TERT的表达；RT—PCR法检测各组细胞TERT、胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）基因的表达。结果B组星形胶质细胞增殖能力显著低于A、D、c组（F=43．418，P〈0．01）。TERTmRNA和GFAPmRNA在A、D组中的表达明显高于B、c组，A、D组比较差异无统计学意义；在A、D组中二者呈线性关系（r=0．701，0．704，P〈0．01）；B、C组中二者未见明显相关线性关系（r：0．260，P〉0．05）。TERT蛋白和GFAP蛋白在A、D组中的表达明显高于B、C组，A、D组比较差异无统计学意义。结论TERT基因参与了星形胶质细胞的活化，有促进星形胶质细胞活化的作用。

关键词：脊髓损伤小神经胶质细胞瘢痕端粒酶反转录酶

端粒酶反转录酶启动子突变在甲状腺癌中的研究进展

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肿瘤研究与临床 2024年第4期36卷 307-309页

作者：王鑫宇宋文晓周旭阳史亚飞济宁医学院临床医学院济宁272002 济宁医学院附属医院甲状腺外科济宁272000

端粒酶反转录酶(TERT)启动子突变在甲状腺癌中首次发现后,甲状腺癌的术前诊断及预后的分子标志物研究进入了新的阶段。虽然TERT启动子突变在甲状腺良性肿瘤中未发现,且在甲状腺乳头状微小癌中占比较低,但在甲状腺低分化癌和甲状腺间变... 详细信息

端粒酶反转录酶(TERT)启动子突变在甲状腺癌中首次发现后,甲状腺癌的术前诊断及预后的分子标志物研究进入了新的阶段。虽然TERT启动子突变在甲状腺良性肿瘤中未发现,且在甲状腺乳头状微小癌中占比较低,但在甲状腺低分化癌和甲状腺间变性癌中的发病率较高。特别是当BRAF V600E与TERT启动子双突变共存时与疾病的特异性死亡率增加显著相关。TERT启动子突变作为甲状腺癌中的一个新癌基因,显现出极大的研究价值,文章就TERT启动子突变在甲状腺癌中的研究及临床意义进行综述。

关键词：端粒酶反转录酶甲状腺肿瘤端粒酶反转录酶启动子突变诊断预后

端粒酶反转录酶基因对大鼠内皮祖细胞增殖的影响

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中华实验外科杂志 2016年第2期33卷 439-443页

作者：张岩陈智李瑞栾阳阮亚俊蔡阳李浩王涛刘继红叶章群华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院老年科武汉430030

目的观察外源性端粒酶反转录酶（hTERT）基因对大鼠内皮祖细胞（EPCs）增殖能力的影响。方法慢病毒转染大鼠EPCs，实验分为3组：（1）过表达hTERT组（EPCs-hTERT组）；（2）阴性对照组（EPCs-control组）；（3）空白对照组（EPCs组）。... 详细信息

目的观察外源性端粒酶反转录酶（hTERT）基因对大鼠内皮祖细胞（EPCs）增殖能力的影响。方法慢病毒转染大鼠EPCs，实验分为3组：（1）过表达hTERT组（EPCs-hTERT组）；（2）阴性对照组（EPCs-control组）；（3）空白对照组（EPCs组）。实时定量聚合酶链反应（Real-timePCR）和Western blot检测hTERT基因的表达，细胞计数试剂盒（CCK-8）检测空病毒对EPCs的毒性和细胞增殖活性，流式细胞仪检测细胞周期。结果随感染复数（MOI）值增加，hTERT基因在RNA及蛋白水平的表达逐渐增加（P〈0．05），达到MOI=50后增加不明显；病毒的细胞毒性在达到MOI：50后逐渐增加（P〈0．05）。选择MOI=50作为最佳MOI值。EPCs-hTERT组的S期比例[（37．99±2．48）％]显著高于EPCs组[（24．37±4．26）％]及EPCs-control组[（22．43±1．55）％]（P〈0．05）。与EPCs组和EPCs—control组比较，EPC-hTERT增殖活性显著升高，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论外源性hTERT基因可显著提高大鼠EPCs增殖能力。

关键词：端粒酶反转录酶内皮祖细胞增殖

载体介导的靶向人端粒酶反转录酶基因RNA干扰对白血病HL-60细胞增殖和凋亡的影响

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肿瘤 2011年第5期31卷 424-427页

作者：高吉照徐鑫薛天阳许伟万才水徐州医学院附属医院儿科徐州221002 江西省人民医院血液科南昌330000

目的:探讨载体介导的靶向人端粒酶反转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)对白血病HL-60细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用靶向hTERT基因的RNAi重组质粒pSilencer1.0-U6/hTERT转染HL-60细胞,以空载体质粒pSilencer1.0-U6转染组、转染试剂及空白组作为对照,蛋白质印迹法检测转染后HL-60细胞hTERT蛋白的表达,MTT法检测细胞的增殖抑制率,FCM法检测HL-60细胞的凋亡情况。结果:转染pSilencer1.0-U6/hTERT质粒24、72和120h后,HL-60细胞hTERT蛋白的表达水平低于各对照组(P0.05),在3个对照组间也无明显差异(P>0.05)。结论:载体介导的靶向hTERT基因的RNAi在体外能抑制白血病HL-60细胞hTERT蛋白的表达,抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡。

关键词：白血病,实验性 RNA干扰细胞增殖细胞凋亡端粒酶反转录酶细胞,HL-60

人端粒酶反转录酶基因修饰脐带间充质干细胞移植治疗急性肾损伤

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中国组织工程研究 2015年第23期19卷 3686-3691页

作者：王天生张建军天津市第五中心医院肾内科天津市300451 天津市第四中心医院神经外科天津市300451

背景:人端粒酶反转录酶(hTERT)是调控增殖及定向分化的首选生长因子之一,具有多重生物学效应,为建立基因工程的永生化干细胞系奠定了基础。目的:探讨人端粒酶反转录酶基因修饰脐带间充质干细胞移植对大鼠缺血再灌注诱导的急性肾损伤的... 详细信息

背景:人端粒酶反转录酶(hTERT)是调控增殖及定向分化的首选生长因子之一,具有多重生物学效应,为建立基因工程的永生化干细胞系奠定了基础。目的:探讨人端粒酶反转录酶基因修饰脐带间充质干细胞移植对大鼠缺血再灌注诱导的急性肾损伤的治疗作用。方法:体外培养人脐带间充质干细胞,构建缺血再灌注诱导的大鼠急性肾损伤模型,建模后将大鼠随机分为3组:对照组尾静脉注射1 mL L-DMEM培养液;空载病毒组:尾静脉注射1 m L经空载病毒转染人脐带间充质干细胞悬液;hT ERT转染组尾静脉注射1 mL经PLXSN-hT ERT转染的人脐带间充质干细胞悬液。结果与结论:移植后第3,28天苏木精-伊红染色检查示hT ERT转染组的肾小管损伤评分空载病毒组>对照组(P<0.05)。移植细胞后第1,3,14,28天血肌酐、尿素氮水平均为hT ERT转染组<空载病毒组<对照组(P<0.05)。结果证实,hT ERT基因修饰脐带间充质干细胞移植对大鼠急性肾损伤具有明显的修复作用。

关键词：组织工程干细胞脐带间充质干细胞大鼠肾损伤移植人端粒酶反转录酶脐带脐血干细胞基因修饰急性肾损伤修复端粒酶反转录酶干细胞移植

人端粒酶反转录酶基因电转染优化培养大鼠前软骨干细胞

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中国组织工程研究 2016年第14期20卷 2110-2116页

作者：彭义曲家富曹立海赵国志杜晓健唐山市第二医院足踝外科河北省唐山市063000

背景:将人端粒酶反转录酶转染至目的细胞中,可以提高其端粒酶活性,保持端粒的长度,在调控增殖和分化方面有重要作用。目的:探讨人端粒酶反转录酶基因转染对体外培养大鼠前软骨干细胞端粒酶活性及生物学特性的影响。方法:体外培养Wistar... 详细信息

背景:将人端粒酶反转录酶转染至目的细胞中,可以提高其端粒酶活性,保持端粒的长度,在调控增殖和分化方面有重要作用。目的:探讨人端粒酶反转录酶基因转染对体外培养大鼠前软骨干细胞端粒酶活性及生物学特性的影响。方法:体外培养Wistar大鼠前软骨干细胞,以反转录病毒PLXSN为载体介导人端粒酶反转录酶基因转染,同时设置对照组、阴性对照序列组、转染组。用TRAP-ELISA法检测前软骨干细胞端粒酶活性,RT-PCR、Western blot检测前软骨干细胞人端粒酶反转录酶基因和蛋白的表达,CCK-8法、细胞生长曲线检测细胞生长增殖情况,流式细胞仪测定细胞周期分布的变化。结果与结论:(1)人端粒酶反转录酶基因转染前软骨干细胞48 h,端粒酶活性明显升高;(2)与对照组、阴性对照序列组相比,转染组人端粒酶反转录酶基因和蛋白水平表达明显,细胞的生长速度明显增快,G0/G1期细胞数减少,S期细胞数增多,差异有显著性意义(P反转录病毒PLXSN为载体介导人端粒酶反转录酶基因转染使前软骨干细胞端粒酶活性明显升高,能够促进大鼠前软骨干细胞增殖。

关键词：端粒末端转移酶转染软骨细胞组织工程干细胞培养端粒酶反转录酶基因电转染大鼠前软骨干细胞

人端粒酶反转录酶和绿色荧光蛋白融合基因慢病毒表达载体的构建

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中国组织工程研究与临床康复 2009年第15期13卷 2931-2936页

作者：梁旭竞陈小佳金玲李丽玲汤绍辉陈友鹏杨冬华暨南大学附属第一医院消化科广东省广州市510632 暨南大学生物工程研究所广东省广州市510632 暨南大学附属第一医院眼科广东省广州市510632 暨南大学附属第一医院感染科广东省广州市510632

背景:外源性端粒酶反转录酶的表达可重建端粒酶活性,诱导细胞永生化。目的:采用慢病毒载体作为基因转移载体,克隆人端粒酶反转录酶的编码区全序列,同时选用绿色荧光蛋白作为目的基因表达标志物,构建人端粒酶反转录酶慢病毒表达载体。设... 详细信息

背景:外源性端粒酶反转录酶的表达可重建端粒酶活性,诱导细胞永生化。目的:采用慢病毒载体作为基因转移载体,克隆人端粒酶反转录酶的编码区全序列,同时选用绿色荧光蛋白作为目的基因表达标志物,构建人端粒酶反转录酶慢病毒表达载体。设计、时间及地点:开放性实验,单一样本观察,于2007-06/2008-03在暨南大学生物工程研究所及暨南大学附属第一医院中心实验室完成。材料:pBABE-puro-hTERT质粒由Robert Weinberg教授惠赠,质粒pDONR221,pLenti6/V5-DEST,ccdBSurvival,Stbl3及293FT细胞由暨南大学生物工程研究所提供。方法:以pBABE-puro-hTERT质粒为模板聚合酶链反应法获取目的基因人端粒酶反转录酶(包含酶切位点BglⅡ、HindⅢ),通过BP反应克隆至pDONR221,以质粒pEGFP-N1为模板,以聚合酶链反应法获取目的基因增强型绿色荧光蛋白(包含酶切位点HindⅢ,BgⅢ),通过酶切及连接反应形成pDONR221-hTERT-EGFP。采用LR重组酶将pDONR221-hTERT-EGFP和pLenti6/V5-DEST进行重组反应,形成pLenti6/V5-DEST-hTERT-EGFP。将pLenti6/V5-DEST-hTERT-EGFP与包装质粒混合,利用脂质体共转染293FT细胞。主要观察指标:通过酶切、聚合酶链式反应及测序验证重组质粒pDONR221-hTERT-EGFP和pLenti6/V5-DEST-hTERT-EGFP是否构建成功。包装重组慢病毒,应用荧光显微镜观察报告基因绿色荧光蛋白在293FT细胞中的表达情况。结果:测序发现慢病毒入门载体pDONR221包含目的基因hTERT1547位点存在点突变(原碱基A变成G),通过定点突变技术成功诱变并鉴定慢病毒表达载体pLenti6/V5-DEST-hTERT-EGFP成功构建。转染后的293FT细胞在荧光显微镜下观察可见强绿色荧光。结论:实验成功构建了人端粒酶反转录酶和绿色荧光蛋白融合基因的慢病毒表达载体,为人端粒酶反转录酶稳定转染提供快速、简洁的方法。

关键词：端粒酶反转录酶绿色荧光蛋白慢病毒载体