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芪莲益髓清毒颗粒联合化疗治疗急性白血病的临床观察及对白血病细胞株NB4端粒相关蛋白的影响

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芪莲益髓清毒颗粒联合化疗治疗急性白血病的临床观察及对白血病细...

作者：张婷山东中医药大学

学位级别：硕士

目的:本研究旨在观察芪莲益髓清毒颗粒联合化疗治疗急性白血病的临床症状改善情况,评价芪莲益髓清毒颗粒联合化疗治疗急性白血病的临床有效性和安全性,同时并探讨芪莲益髓清毒颗粒对急性白血病NB4细胞端粒相关蛋白的影响及作用机制,为... 详细信息

目的:本研究旨在观察芪莲益髓清毒颗粒联合化疗治疗急性白血病的临床症状改善情况,评价芪莲益髓清毒颗粒联合化疗治疗急性白血病的临床有效性和安全性,同时并探讨芪莲益髓清毒颗粒对急性白血病NB4细胞端粒相关蛋白的影响及作用机制,为其更好的用于白血病的治疗寻求实验学支持,以期为提高白血病的临床疗效提供新的思路和方法。方法:1.临床试验:选择2015年9月—2017年12月就诊于山东省中医院血液科的急性白血病初治患者30例,年龄在15-75岁之间,随机分为中药组和对照组,每组15例,中药组给予常规化疗方案加芪莲益髓清毒颗粒,每次3袋,每日三次辅助治疗;对照组给予常规化疗方案。两个疗程后,分析两组患者中医症候积分、疗效与临床血象。2.体外实验:(1)培养急性白血病NB4细胞株。(2)CCK-8法检测不同浓度、不同时间点芪莲益髓清毒颗粒对NB4细胞体外生长的抑制作用,由此确定芪莲益髓清毒颗粒的I50值。(3)Western-blot检测用药组RAP1、TRF1、TRF2、TZAP的蛋白表达水平。(4)实时定量PCR(RT-PCR)检测用药组RAP1、TRF1、TRF2、TZAP m RNA的表达水平。结果:1.临床试验:中医症候总积分比较:两周期化疗后,采用芪莲益髓清毒颗粒联合化疗的中药组的中医症候总积分明显低于采用单纯化疗的对照组,差异具有统计学意义(P蛋白、血小板等血象变化显示,中药组的血象恢复程度明显优于对照组,差异具有统计学意义(P相关性。芪莲益髓清毒颗粒作用于NB4细胞48h的IC50为62mg/m L。因此我们选取中剂量浓度进行实验,芪莲益髓清毒颗粒浓度为60mg/m L(低于IC50值)。(2)Western-blot法检测TZAP、TRF1、TRF2、RAP1蛋白的表达,结果表明,中药组与对照组比较可出现NB4细胞中TRF1蛋白表达增加;TRF2、RAP1、TZAP蛋白表达减少,有显著性差异(P相关系数进行相关性分析,结果显示:TRF2蛋白表达与TRF1、TZAP蛋白表达呈显著负相关(r1=-0.863、r2=-0.843);TRF1蛋白表达与TZAP表达呈显著正相关(r=0.922)。(3)RT-PCR检测基因表达结果与Western-blot蛋白表达结果改变基本相同,提示芪莲益髓清毒颗粒可能通过基因转录水平影响蛋白表达。结论:我们选取的芪莲益髓清毒颗粒对化疗具有增效减毒的作用,在临床辅助治疗急性白血病方面具有一定的有效性与安全性。在体外实验研究中芪莲益髓清毒颗粒表现出一定程度的抗癌活性,其作用机制可能与上调TRF1、TZAP、RAP1蛋白表达水平;下调TRF2蛋白表达水平,以诱导白血病细胞凋亡加速有关,为芪莲益髓清毒颗粒在临床上的应用提供实验理论依据。

关键词：芪莲益髓清毒颗粒急性白血病端粒相关蛋白凋亡

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银杏端粒相关蛋白TRB1的端粒功能研究

银杏端粒相关蛋白TRB1的端粒功能研究

作者：邹伊荣北京林业大学

学位级别：硕士

端粒是真核生物染色体物理末端的非转录重复序列[TTAGGG]_n及一些结合蛋白组成的特殊结构,在染色体复制、末端保护和细胞寿命等方面具有重要作用。TRB1（telomere repeat binding factor 1）是一类端粒双链DNA结合蛋白。本研究以植物界... 详细信息

端粒是真核生物染色体物理末端的非转录重复序列[TTAGGG]_n及一些结合蛋白组成的特殊结构,在染色体复制、末端保护和细胞寿命等方面具有重要作用。TRB1（telomere repeat binding factor 1）是一类端粒双链DNA结合蛋白。本研究以植物界的“活化石”裸子植物银杏（Ginkgo biloba L.）为材料,使用分子生物学手段探究其TRB1蛋白对端粒保护的功能。本文主要研究内容如下:（1）根据拟南芥（Arabidopsis thaliana）TRB1的CDS序列,克隆得到银杏端粒相关蛋白TRB1。通过测序分析可知银杏TRB1基因CDS全长867bp,编码288个氨基酸。进行序列比对后表明,银杏TRB1蛋白与不同物种间的TRB1蛋白在Myb结构域、组蛋白H1/5结构域和C端螺旋这个三关键结构域上具有较高的同源性。（2）通过分析和比较不同实验条件下原核表达的结果,我们得到了银杏TRB1蛋白最适表达条件为IPTG浓度0.5m M,温度28℃,200 rpm,诱导3 h。为了研究银杏端粒相关蛋白TBR1与植物端粒序列的结合能力,研究使用EMSA（凝胶阻滞迁移）实验来验证银杏TRB1蛋白在体外与植物端粒序列的结合能力。通过设计不同类型的探针进行EMSA实验,发现银杏TRB1不仅可以结合端粒双链序列,还可以结合端粒单链C链或G链序列,暗示银杏TRB1具有独特的DNA结合能力。（3）为了进一步研究银杏TRB1与端粒结合的分子机制,我们将银杏TRB1分为不同的肽段。银杏TRB1-N段为只包含Myb结构域的肽段、NH段为包含Myb结构域和组蛋白H1/5结构域的肽段。EMSA实验结果表明,N段与NH段均能与植物端粒双链四次重复序列结合,这与拟南芥TRB1-N段结合端粒序列的模式具有一定相似性。（4）实验室前期研究表明银杏HSP90是一种端粒双链结合蛋白,对端粒的调控具有一定作用。为了探究银杏TRB1能否与银杏HSP90蛋白相互作用,通过Y2H（酵母双杂交）实验进行研究。结果表明,这两个银杏端粒双链结合蛋白在Y2H实验中没有蛋白互作现象。（5）为了对银杏TRB1蛋白在植物体内的功能机制进行探究,我们进行了银杏悬浮细胞培养的初步探索和浸染研究。我们利用花序浸染法将银杏TRB1基因整合至野生型拟南芥植株中,经过抗性筛选与分子检测得到银杏TRB1蛋白过表达拟南芥植株。为接下来的银杏TRB1研究奠定了实验基础。本研究对木本植物银杏端粒相关蛋白TRB1的端粒功能进行了研究,并探索了银杏TRB1与端粒DNA的结合模式,对木本植物端粒蛋白的功能研究具有重要意义。

关键词： TRB1 银杏 EMSA 端粒相关蛋白

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作者：杜英俊山东中医药大学

学位级别：硕士

目的:探究端粒相关蛋白dyskerin、MRE11和Ku80基因表达水平与慢性再生障碍性贫血(chronic aplastic anemia CAA)中医辩证型间相关性,并探析再生障碍性贫血的发病机制。方法:分别抽取CAA患者和正常人的骨髓,应用实时荧光定量PCR技术,检... 详细信息

目的:探究端粒相关蛋白dyskerin、MRE11和Ku80基因表达水平与慢性再生障碍性贫血(chronic aplastic anemia CAA)中医辩证型间相关性,并探析再生障碍性贫血的发病机制。方法:分别抽取CAA患者和正常人的骨髓,应用实时荧光定量PCR技术,检测骨髓中单个核细胞的端粒相关蛋白dyskerin、MRE11、Ku80基因mRNA表达水平;探讨dyskerin、MRE11、Ku80基因mRNA表达水平与对照组之间的关系;分析CAA患者各型之间的基因表达的差异性。结果:1、dyskerin基因:对照组与CAA组比较,dyskerin基因mRNA表达情况存在差异(P0.05),不具有统计学意义,组间比较无差异性,其基因表达量无明显差异。2、MRE11基因:对照组与CAA组比较,MRE11基因mRNA表达情况存在差异(P0.05)与对照组比较无明显差异;CAA中医证型组间比较,肾阴虚组与肾阴阳虚组比较,其基因表达量皆下降(P0.05),CAA组的Ku80基因mRNA表达量与对照组比较无统计学意义;肾阴虚组、肾阴阳虚组和肾阳虚组三组与对照组比较,前两者基因表达量较对照组明显下降(P端粒相关蛋白dyskerin、MRE11基因mRNA表达水平明显降低,mRNA表达水平的降低,说明端粒结构稳定性的降低和端粒酶活性的异常,这也许是CAA的发病机理之一;三种相关蛋白的基因表达水平来看,在肾阴虚证型中三者的表达量都呈不同程度的降低,这也为中医中“阳虚易治,阴虚难调”的理论提供了分子学的证据。

关键词：慢性再生障碍性贫血中医证型端粒相关蛋白 mRNA表达

端粒长度和端粒相关蛋白在AD患者外周血单个核细胞的表达及其意义

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端粒长度和端粒相关蛋白在AD患者外周血单个核细胞的表达及其意义

作者：吴奇郑州大学

学位级别：硕士

背景和目的阿尔茨海默病(AD)作为人类最常见的衰老性疾病,是发生在老年期及老年前期的一种原发性退行性脑病,是一种持续性高级神经功能活动障碍。流行病学调查结果显示,我国年龄≥65岁的老年人中AD患病率为3%%,并且随年龄的增长,患病率... 详细信息

背景和目的阿尔茨海默病(AD)作为人类最常见的衰老性疾病,是发生在老年期及老年前期的一种原发性退行性脑病,是一种持续性高级神经功能活动障碍。流行病学调查结果显示,我国年龄≥65岁的老年人中AD患病率为3%%,并且随年龄的增长,患病率逐年上升。因此,有必要对其发病机制和诊断方法进行深入研究。虽然,病理学上,在AD患者的脑中观察到突触和神经元的丧失,细胞外有老年斑和细胞内有神经原纤维缠结(NFT)。这些特征与Aβ(淀粉样蛋白β)40,Aβ42,总tau和磷酸化tau(p-tau)的变化相关,它们是严重AD状态的明确脑脊液生物标志物。然而,缺乏实用于临床,简便可行的能有效诊断AD以指导治疗策略的生物标志物。端粒与衰老性疾病密切相关正在AD中受到越来越多的关注。端粒是染色体的重要结构,它在维持染色体稳定性方面发挥了重要作用。端粒长度、端粒酶及端粒相关蛋白组成端粒系统,共同维持着端粒稳定。细胞衰老都有不同程度的端粒丢失或端粒不稳定现象。研究发现端粒缩短是认知障碍的线性因素,白细胞端粒长度可能与健康女性的认知能力有关,提示其可能是AD发病前认知老化的女性的生物标志物。在本研究中,通过分子生物学手段对外周血单个核细胞端粒长度与端粒相关蛋白活性进行检测以探讨外周血端粒长度变化、端粒相关蛋白活性变化与AD的相关性。方法提取42例阿尔茨海默病(AD)患者(轻、中、重度AD患者分别有10人、17人、15人)外周血单个核细胞基因组DNA,利用RT-PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)的方法检测基因组DNA的端粒长度及端粒相关蛋白TRF1、TRF2、POT1的mRNA表达水平,检测AD患者与50例正常健康人的端粒长度变化情况及相关蛋白表达水平,从而探究阿尔茨海默病对人类外周血单个核细胞端粒长度及相关蛋白的影响;探讨阿尔茨海默病患者不同严重程度与外周血单个核细胞端粒长度变化及相关蛋白表达水平相关性;探究阿尔茨海默病患者外周血单个核细胞端粒长度、端粒相关蛋白TRF1、TRF2、POT1之间的相关性。结果AD患者外周血单个核细胞端粒长度小于健康对照(NC)组(P端粒相关蛋白TRF1、TRF2、POT1的mRNA表达水平较NC组升高(P端粒长度均较NC组小(P端粒长度更低;三组严重程度AD患者端粒相关蛋白TRF1、TRF2、POT1的mRNA表达水平均高于NC组(P端粒相关蛋白表达水平也随之升高;端粒长度、TRF1、TRF2、POT1诊断AD的ROC曲线下面积分别为0.716、0.726、0.75、0.717,四种指标联合诊断AD的ROC曲线下面积为0.813;端粒长度与端粒相关蛋白TRF1、TRF2 mRNA的表达水平存在相关性,Spearman相关系数分别为R=-0.562,R=-0.434,P端粒相关蛋白POT1和TRF1的mRNA表达水平间同样存在相关性,相关系数为R=0.388,P端粒长度明显短于正常人,并且随着AD患者严重程度增加其端粒长度显著缩短。端粒相关蛋白TRF1、TRF2、POT1可能参与端粒长度变化的过程而参与了阿尔茨海默病的发生发展过程。端粒长度与端粒相关蛋白TRF1、TRF2 mRNA的表达水平呈负相关,而POT1与TRF1表达水平间呈现正相关,结果显示端粒相关蛋白TRF1、TRF2参与端粒缩短的过程,POT1则可能通过TRF1途径而间接参与端粒损耗,端粒长度缩短与阿尔茨海默病的发生发展密切相关,检测外周血端粒长度、端粒相关蛋白TRF1、TRF2、POT1可作为评估阿尔茨海默病风险和预后的重要的检查指标。

关键词：阿尔茨海默病端粒端粒相关蛋白诊断标志物

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端粒相关蛋白编码基因的克隆及功能分析

胃肠病学 2002年第B11期7卷 21-22页

作者：周平房殿春等第三军医大学西南医院全军消化专科中心400038

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端粒相关蛋白TIN2

医学分子生物学杂志 2007年第1期4卷 33-35页

作者：胡华梁晓秋南华大学肿瘤研究所湖南省衡阳市421001

TIN2(TRF1相互作用核蛋白2)是一重要的端粒相关蛋白。人TIN2蛋白包括N端,TRF1交互作用区(TRF1-Int)和C端3个结构域。它在TRF1复合物、TRF2复合物和Shelterin的功能中扮演关键角色,协同其它端粒蛋白维持端粒长度、结构和功能。TIN2与个... 详细信息

TIN2(TRF1相互作用核蛋白2)是一重要的端粒相关蛋白。人TIN2蛋白包括N端,TRF1交互作用区(TRF1-Int)和C端3个结构域。它在TRF1复合物、TRF2复合物和Shelterin的功能中扮演关键角色,协同其它端粒蛋白维持端粒长度、结构和功能。TIN2与个体发育、细胞分化和肿瘤发生密切相关。

关键词： TIN2 端粒端粒相关蛋白

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MDS患者端粒相关蛋白TRF1基因的表达

中国血液流变学杂志 2007年第1期17卷 1-3页

作者：焦雪丽陈子兴岑建农何军刘丹丹陈文明苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所江苏苏州215006

目的探讨骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)患者骨髓端粒相关蛋白TRF1 mRNA的表达水平,以研究其在MDS发生发展中的作用。方法以实时定量RT-PCR方法,检测24例MDS患者和8例对照骨髓TRF1 mRNA表达水平,以SPSS11.5软件进行... 详细信息

目的探讨骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)患者骨髓端粒相关蛋白TRF1 mRNA的表达水平,以研究其在MDS发生发展中的作用。方法以实时定量RT-PCR方法,检测24例MDS患者和8例对照骨髓TRF1 mRNA表达水平,以SPSS11.5软件进行统计分析。结果MDS患者骨髓均表达TRF1,初诊低危组和高危组TRF1 mRNA的表达均升高(P端粒长度的负性调节因子,是揭示MDS预后的不良因素之一。

关键词： TRFI 端粒相关蛋白骨髓增生异常综合征基因实时定量RT—PCR

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人端粒相关蛋白

医学分子生物学杂志 2005年第2期2卷 115-118页

作者：师迎旭郑晓飞军事医学科学院放射医学研究所北京市100850

端粒是染色体末端的特殊结构,由端粒DNA与端粒蛋白构成,维持染色体的稳定。端粒相关蛋白直接影响端粒的功能,调节端粒DNA的长度,与细胞的衰老和癌变密切相关。端粒蛋白包括端粒双链DNA结合蛋白、端粒单链DNA结合蛋白、其它端粒相关蛋白... 详细信息

端粒是染色体末端的特殊结构,由端粒DNA与端粒蛋白构成,维持染色体的稳定。端粒相关蛋白直接影响端粒的功能,调节端粒DNA的长度,与细胞的衰老和癌变密切相关。端粒蛋白包括端粒双链DNA结合蛋白、端粒单链DNA结合蛋白、其它端粒相关蛋白。端粒结合蛋白直接保护端粒DNA,端粒相关蛋白通过与端粒结合蛋白的相互作用间接影响端粒的功能。本文对这些端粒相关蛋白的细胞生物学功能的研究进展进行概述。

关键词：端粒相关蛋白端粒结合蛋白端粒保护蛋白

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胎儿心肌细胞端粒相关蛋白的表达

胎儿心肌细胞端粒相关蛋白的表达