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康氏木霉与立枯丝核菌的寄生关系

中国生物防治 1997年第4期13卷 182-183页

作者：路炳声焦琮山西农业大学植保系

康氏木霉与立枯丝核菌的寄生关系路炳声焦琮（山西农业大学植保系，太谷０３０８０１）ＳＴＵＤＩＥＳＯＮＴＨＥＰＡＲＡＳＩＴＩＣＲＥＬＡＴＩＯＮＳＨＩＰＢＥＴＷＥＥＮＴＲＩＣＨＯＤＥＲＭＡＫＯＮＩＮＧＩＩＡＮＤＲＨＩＺＯＣ... 详细信息

康氏木霉与立枯丝核菌的寄生关系路炳声焦琮（山西农业大学植保系，太谷０３０８０１）ＳＴＵＤＩＥＳＯＮＴＨＥＰＡＲＡＳＩＴＩＣＲＥＬＡＴＩＯＮＳＨＩＰＢＥＴＷＥＥＮＴＲＩＣＨＯＤＥＲＭＡＫＯＮＩＮＧＩＩＡＮＤＲＨＩＺＯＣＴＯＮＩＡＳＯＬＡＮＩＬＵＢｉｎｇ...

关键词：康氏木霉立枯丝核菌寄生关系

马铃薯立枯丝核菌毒素对植株细胞膜伤害机理的研究

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马铃薯立枯丝核菌毒素对植株细胞膜伤害机理的研究

作者：贾蕊鸿甘肃农业大学

学位级别：硕士

甘肃省是我国马铃薯主产区之一,也是我国主要的商品薯生产基地和淀粉加工基地。然而,近年来由立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)引起的马铃薯立枯丝核菌病(黑痣病)已成为限制甘肃省马铃薯产业健康发展的主要土传病害。立枯丝核菌病的致病... 详细信息

甘肃省是我国马铃薯主产区之一,也是我国主要的商品薯生产基地和淀粉加工基地。然而,近年来由立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)引起的马铃薯立枯丝核菌病(黑痣病)已成为限制甘肃省马铃薯产业健康发展的主要土传病害。立枯丝核菌病的致病机理非常复杂,其产生的毒素是可能的主要致病原因之一。为此,我们通过培养试验,研究了立枯丝核菌毒素对马铃薯幼苗(组培苗)茎和叶组织细胞的膜伤害过程,包括对细胞膜透性、活性氧代谢、抗逆酶活性以及质膜过氧化程度的影响;同时,通过柱层析法将立枯丝核菌毒素分离为六个组分,研究了不同组分对马铃薯幼苗茎和叶组织细胞膜透性的影响,旨在为揭示马铃薯立枯丝核菌毒素致病机理提供依据。主要试验结果如下:1.立枯丝核菌毒素可引起马铃薯幼苗茎和叶组织细胞膜透性的改变,细胞浸提液相对电导率增高红墨水吸收试验显示,立枯丝核菌毒素处理会导致膜的选择透性丧失,与对照(CK)相比,毒素处理的马铃薯幼苗根系吸收了大量红墨水并运输到了叶片;红墨水吸收量的测定结果显示,毒素处理的马铃薯幼苗茎和叶片中积累的红墨水显著多于对照处理;经毒素处理后,马铃薯幼苗茎和叶组织细胞浸提液的相对电导率(REC)显著高于对照,在毒素处理后96h时差异最为显著,高浓度T3处理茎组织细胞浸提液的REC较对照增加了75.5%,叶片的增加了137.0%。叶和茎组织对毒素处理的敏感程度显著不同,毒素的伤害作用首先在叶片中表现,并在较高水平持续较长时间,表现为叶片组织的膜损伤率远大于茎组织,分别为41.7%和23.5%,相差18个百分点;膜损伤程度随毒素处理时间的延长而加剧,随毒素浓度的增大而增加。2.立枯丝核菌毒素可导致马铃薯幼苗体内活性氧代谢异常,造成膜伤害毒素处理使马铃薯幼苗茎和叶组织中超氧阴离子(O2-)的产生速率增加,增加的幅度随毒素浓度的增大而增加。马铃薯幼苗茎和叶组织中O2-产生速率的变化对毒素处理的响应不同,茎组织中O2-的产生速率快于叶组织,而且较叶片提前24h达到最大产生速率,当O2-的产生速率达到最大时,高浓度T3处理茎和叶组织较CK分别增大了6倍和1倍。立枯丝核菌毒素也会导致马铃薯幼苗体内过氧化氢(H2O2)含量的升高,随毒素浓度的增大,马铃薯幼苗体内H2O2含量逐渐增大。毒素处理96h后,高浓度T3处理茎和叶片组织中H2O2含量均达到最大值,分别较CK增加了156.1%和256.2%。试验结果说明立枯丝核菌毒素能引起马铃薯幼苗活性氧代谢异常,O2-产生速率增大,H2O2含量升高,导致大量活性氧马铃薯幼苗茎和叶片组织中积累,对细胞膜造成伤害。3.立枯丝核菌毒素会使马铃薯幼苗体内抗逆酶活性升高,质膜过氧化程度加剧毒素处理后的马铃薯幼苗体内抗逆酶-超氧化物岐化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活性显著高于对照处理。毒素处理144h后,高浓度T3马铃薯幼苗茎和叶组织中SOD的活性分别比CK处理增加了31.0%和50.6%,CAT活性分别较CK处理增大了2倍和2.6倍。说明毒素对铃薯幼苗茎和叶片组织细胞膜造成了伤害,引起抗逆酶活性升高。毒素处理马铃薯幼苗后,叶片和茎部组织的丙二醛(MDA)含量均显著升高,在毒素处理后144h后达到最高值,高浓度T3处理茎和叶片组织的MDA含量分别较T1增加了92.6%和96.7%。说明毒素通过加剧细胞质膜的过氧化程度对马铃薯幼苗细胞膜造成伤害。质膜过氧化程度随毒素浓度的增大而加剧。马铃薯幼苗不同器官受毒素影响的程度不同,叶片组织对毒素的敏感性较高,其质膜过氧化程度较大。4.立枯丝核菌毒素的不同组分对马铃薯幼苗组织细胞的膜伤害程度不同试验结果表明,不同组分对马铃薯幼苗茎和叶片组织细胞伤害的程度不同。六个组分除组分3(TF3)外,均会导致马铃薯幼苗茎部组织细胞浸提液REC增大,但处理间差异并不显著;但是对毒素较为敏感的叶片组织,组分1(TF1)和组分5(TF5)显著提高了细胞浸提液的REC。

关键词：马铃薯立枯丝核菌毒素膜伤害相对电导率活性氧代谢

Ⅰ四川水稻立枯丝核菌的遗传分化与致病力研究 Ⅱ水稻立枯丝核菌G蛋白β亚基基因的克隆、表达与序列分析

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Ⅰ四川水稻立枯丝核菌的遗传分化与致病力研究 Ⅱ水稻立枯丝核菌G...

作者：肖勇四川农业大学

学位级别：硕士

水稻立枯丝核菌（***）是丝核菌属（Rhizoctonia）的一个种,为半知菌亚门真菌,其分布广、寄主范围大,不产生无性孢子,常以菌核形态习居土壤,是玉米、水稻、草坪草、马铃薯等农作物和纹枯病的致病菌。根据菌丝融合与否,立枯丝核菌可划分... 详细信息

水稻立枯丝核菌（***）是丝核菌属（Rhizoctonia）的一个种,为半知菌亚门真菌,其分布广、寄主范围大,不产生无性孢子,常以菌核形态习居土壤,是玉米、水稻、草坪草、马铃薯等农作物和纹枯病的致病菌。根据菌丝融合与否,立枯丝核菌可划分为14个融合群（AG-1—AG-13和AG-BI）。1987年。Ogoshi等根据培养性状、寄主以及生理生化等特性分成不同的种内类群（Intraspecificgroup,ISG）,其中的一个融合群AG-1划分AG-1IA、AG-1IB、AG-1IC三个亚群。立枯丝核菌的AG-1IA亚群是水稻和玉米纹枯病的优势致病菌群,纹枯病在我国长江流域高温、高湿条件下年年发生,是水稻和玉米等农作物年年减产的主要因素之一。在四川,立枯丝核菌也造成水稻、玉米严重减产。因此,充分认识我省水稻立枯丝核菌（***）生理小种变化的特点,进行综合防治立枯丝核菌,提高抗病育种水平显得尤其重要。 G蛋白是膜协同、异三聚体蛋白,由α、β、γ3个亚单位组成。G蛋白及其受体（GPCRs）组成了真核生物细胞里最流行的信号系统、感官多样调节系统、细胞生长和激素调节系统。G蛋白β亚基呈现出一种桶形β折叠结构,并包含WD40重复序列,其前端具有N端α螺旋,是G蛋白功能GTP连接转换器。Gilman等研究表明,在真核生物中G蛋白β亚基基因参与信号传导途径,导致基因表达、细胞功能受到影响。在很多能对植物致病的病原真菌,如Dictyosteliumdiscoideum、Ustilagomaydis和Fusarium oxysporum中,G蛋白在整个代谢生长过程中都起着举足轻重的作用,涉及细胞生长、分化和毒性等。Kasahara等对Cryphonectria parasitica的研究发现,G蛋白β亚基基因功能丧失转基因菌株的菌丝缺乏明显分叉,对植物侵染和致病力明显降低。本研究从四川不同生态区分离到水稻立枯丝核致病菌55株,研究其遗传分化、致病力分化和聚类分析,并利用同源克隆方法分离水稻立枯丝核菌G蛋白β亚基基因,对其功能做了些初步的研究,为研究水稻立枯丝核菌致病机理和对应防治方法奠定基础。实验主要结果如下: 1.通过水琼脂分离法共得到水稻立枯丝核菌菌株55株。 2.水稻立枯丝核菌菌丝融合:所有分离全部菌株中除D42都与标准菌株AG-1IA发生菌丝融合。部分菌株不仅仅能与其中的一种标准菌株发生菌丝融合,而且还能同时与其它一种或者多种标准菌株发生菌丝融合,这说明在细胞学水平上,这些立枯丝核菌具有多个菌群归属性,因此这类立枯丝核菌为桥梁菌群。 3.水稻立枯丝核菌致病力鉴定:室内采用离体叶片接种法,分别接种X400、蜀恢527R、蜀恢881R。结果表明,各菌株间致病力差异显著。田间采用始穗期嵌入接种法,结果表明,各菌株间致病力差异显著。同时发现,相同菌株同时接种三种材料时,室内离体鉴定方法的致病力对不同材料差异较小,而活体接种方法表现出很大的材料间差异。 ***分子标记聚类分析:结果显示,在相似系数0.91处,除D42、D54以外的所有分离菌株与AG-1IA可聚为一类,而外群对照菌株A-1和另外9个国际标准菌株分别归属一类。以相似系数0.941为标准,可以把55个水稻立枯丝核菌菌株为8类:D1、D35、D6等40个为第1类;D36、D39、D40、D46、D41为第2类;D7和D20第3类;D37和D50为第4类:D2和D3为第5类;D47和D55为第6类;D42为第7类;D54为第8类。 5.水稻立枯丝核菌G蛋白β亚基基因的同源克隆:利用衍生自***蛋白β亚基基因序列的特异引物,对水稻立枯丝核菌菌株DNA进行PCR扩增。产物经1%琼脂糖凝胶电泳,可以观察到一条约1.9 kb大小的扩增带,与预期的G蛋白β亚基基因大小相吻合。经测序表明该片段为水稻立枯丝核菌G蛋白β亚基基因的扩增产物。softberry软件分析证实,该序列包含一个约1.7kb的完整开放阅读框,编码366个氨基酸。 6.G蛋白beta亚基基因多态性及进化分析:对11个水稻立枯丝核菌菌株的G蛋白β亚基基因氨基酸序列作同源性比较。结果发现,他们之间同源性较高,但是,在某些区间发生变异。进化分析发现该序列与大量物种G蛋白β亚基基因明显同源,一致性介于88.14-57.34%。 7.基因的表达模式分析:通过半定量RT-PCR法对水稻立枯丝核菌AG-1IA G蛋白β亚基基因在不同时期的表达量分析显示,水稻立枯丝核菌G蛋白β亚基基因在前2 d几乎不表达,从第3天到第5天基因的表达量逐渐增大,在第5天时达到最大,第6天后表达量陡然降低到几乎不表达。因此,水稻立枯丝核菌G蛋白β亚基基因在

关键词：立枯丝核菌菌丝融合群 RAPD 聚类分析致病力 G蛋白β亚基基因克隆表达

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包菜立枯丝核菌球腐病的病原学研究

包菜立枯丝核菌球腐病的病原学研究

作者：张丽华中农业大学

学位级别：硕士

球腐病是在包菜上发生的一种重要病害,能引起整个包菜叶球的腐烂,严重影响包菜的产量与品质。该病多年来由于流行范围不广,造成的经济损失不大,一直未引起研究者对此病的关注,国内外也仅有关于此病的病原初报。近年来在湖北长阳高山蔬... 详细信息

球腐病是在包菜上发生的一种重要病害,能引起整个包菜叶球的腐烂,严重影响包菜的产量与品质。该病多年来由于流行范围不广,造成的经济损失不大,一直未引起研究者对此病的关注,国内外也仅有关于此病的病原初报。近年来在湖北长阳高山蔬菜生产基地频繁发生该病,并造成了严重的经济损失。本研究旨在确定引起包菜球腐病的病原,了解病菌的寄主范围、生物学特性以及进行杀菌剂的初步筛选和测定部分栽培品种的抗性,并观察了病菌对包菜叶片的侵入过程及在此过程中包菜叶片内胞壁降解酶活性的变化。研究结果如下:从包菜病株上分离得到的菌株在PDA平板上培养3天后菌落直径为9cm左右。菌丝初为无色,成熟后逐渐变为褐色。菌丝直径4.90-7.98μm,直角或锐角分枝,分枝处明显缢缩,距分枝不远处有一隔膜,菌丝细胞多核。菌核颗粒状、褐色,内外颜色一致。用分离菌株接种离体包菜叶片后叶片上出现黑褐色圆形至不规则形病斑,与田间发病症状相同,从接种发病的叶片上分离到的菌株与接种所用菌株的培养性状和形态特征相同,证实该菌株为致病菌。rDNA-ITS测序结果与GeneBank中的序列进行同源性比较发现菌株与Thanatephorus cucumeris和Rhizoctonia solani序列的同源性高达99%,且融合群为AG 2-1。根据形态学特征和分子鉴定结果,确认该病原菌为Rhizoctonia solani AG 2-1。病原菌生物学特性研究结果表明,病菌在有无光照的条件下均可生长和形成菌核,光照和光暗交替最有利于菌丝的生长,黑暗条件下有利于菌核形成。该菌株在5-30℃的范围内均能生长和产孢,25℃为菌丝生长最适温度。病菌在pH值为4-10的PDA培养基上菌丝均能正常生长,其中以pH6-7生长最快。病菌能够有效利用多种碳源和氮源,分别以淀粉为碳源以及以酵母膏为氮源时生长最好。试验证明45℃的温水处理10min可杀死菌丝体、50℃的温水处理10min可抑制菌核萌发。PDA平板抑菌实验结果表明,供试六种药剂在设置的不同浓度下对病原菌的生长都有一定的抑制作用,其中10%爱苗乳油和50%多菌灵可湿性粉剂对菌丝生长有很好的抑制效果,10%世高可分散粒剂抑制效果最差。寄主范围测定结果表明,病菌能侵染5种十字花科植物,包括包菜、大白菜、小白菜、萝卜、油菜,还能侵染豌豆、蚕豆、番茄、棉花、黄瓜和玉米。对14种栽培品种的抗性测试结果表明,两关、永明、冠军较为抗病,12089和7001较为感病。用菌丝块接种离体包菜叶片,接种后不同时间点取样,对样品进行组织脱色、染色,观察病原菌对寄主植物的侵染过程。结果表明,接种9h后病原菌开始侵入寄主,病菌能通过表皮和气孔两种方式侵染叶片,后期气孔侵入的比率逐渐增加。侵染过程中病原菌可产生侵染菌丝直接侵入,也可形成球形附着胞、分枝状附着胞和侵染垫后再侵入。接种24h后寄主的叶肉细胞被大量降解。测定各接种时间点包菜叶片内病原菌产生的胞壁降解酶活性,结果表明,接种后叶片内4种胞壁降解酶(纤维素酶、多聚半乳糖醛酸酶、果胶裂解酶、果胶酯酶)的活性较接种前显著增强。接种12h后4种酶的酶活均呈现出加速上升的趋势,纤维素酶和多聚半乳糖醛酸酶在24h时酶活均为对照叶片的2倍多。各酶均在36h到48h达到酶活的高峰,随后酶活逐渐下降。其中48h时纤维素酶的活性是对照叶片的2.64倍,36h时多聚半乳糖醛酸酶的活性是对照叶片的2.62倍,48h时果胶酯酶和果胶裂解酶的酶活为对照叶片的1.65和1.59倍。叶片接种96h后,测定病斑周围黄褐色区域和中间黑色区域的胞壁降解酶活性,分析结果显示,在两个区域中纤维素酶和多聚半乳糖醛酸酶的酶活都显著高于果胶酯酶和果胶裂解酶。病斑的黄褐色部位酶活最高,纤维素酶和多聚半乳糖醛酸酶的活性分别是对照叶片的3.18倍和3.39倍,是黑色部位酶活的2.12被和2.28倍。因此纤维素酶和多聚半乳糖醛酸酶在*** AG 2-1成功侵染包菜叶片、破坏寄主细胞的过程中起着重要的作用。

关键词：立枯丝核菌包菜病原鉴定生物学特性侵染过程胞壁降解酶

利用SIGS技术进行立枯丝核菌致病基因功能与病害防控研究

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利用SIGS技术进行立枯丝核菌致病基因功能与病害防控研究

作者：唐滔扬州大学

学位级别：硕士

立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）为无性型真菌,属丝孢纲无孢目,是一种寄主范围广、腐生性强、分布广泛的土传病原真菌,可危害禾本科、豆科、茄科和锦葵科等40多科260多种植物,并造成严重损失。立枯丝核菌还没有完善的遗传转化体系,其... 详细信息

立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）为无性型真菌,属丝孢纲无孢目,是一种寄主范围广、腐生性强、分布广泛的土传病原真菌,可危害禾本科、豆科、茄科和锦葵科等40多科260多种植物,并造成严重损失。立枯丝核菌还没有完善的遗传转化体系,其基因功能研究进展缓慢,尽管根据基因组、转录组、蛋白组和代谢组等组学数据,有少部分与立枯丝核菌致病相关基因被研究,但大部分基因功能仍有待验证。另外,由于立枯丝核菌具有强腐生性,且病害的发生受环境影响较大,因此运用抗病品种、农业措施、物理措施和生物措施等对其防效并不理想,目前生产上对其造成的病害防治主要依赖化学药剂。但过量过频的使用化学药剂,易造成非靶标性杀灭以及抗药性、再增猖獗和农药残留等“3R”问题。因此,研发新的基因功能研究方法和防治策略是当前立枯丝核菌病害研究的主要任务。RNA干扰（RNA interference,RNAi）是真核生物中普遍存在的机制,其已成为病原真菌基因功能研究和作物病害防治的重要手段。但以往基于RNAi的技术均是建立在转基因基础之上,而许多植物和病原真菌很难被遗传操作,如立枯丝核菌,再加上世界各国对转基因农产品的接受度低,因此这些方法的安全性和广适性也一直受到质疑。喷施诱导的基因沉默（Spray-induced gene silencing,SIGS）通过外源喷施dsRNA诱导病原物靶标基因沉默,不需要建立病菌遗传转化体系,也不需要形成转基因作物,因此,在立枯丝核菌基因功能和病害防治研究方面具有重要意义。在此基础上,我们研究了立枯丝核菌相关基因功能,并初步获得可用于立枯丝核菌病害防治的dsRNA纳米农药,结果如下:1、将荧光素标记的EGFP-dsRNA与立枯丝核菌菌丝共孵育24 h,可观察到菌丝内有强烈荧光,将带荧光的菌丝制备成原生质体仍能检测到荧光,表明立枯丝核菌可以吸收环境中的dsRNA进入细胞内。2、根据基因组和转录组数据,克隆了立枯丝核菌多聚半乳糖醛酸酶基因RsPG1、过氧化氢酶基因RsCAT和钙调神经磷酸酶敏感的锌指蛋白基因RsCRZ1,并体外转录合成分别靶向3个基因的dsRNA片段。将dsRNA与立枯丝核菌共孵育24 h后进行qRT-PCR,结果显示,外源dsRNA可使靶基因沉默,沉默效应为57.4%～68.7%。除RsCAT基因沉默影响立枯丝核菌菌核形成外,各基因沉默几乎不影响立枯丝核菌的生物学性状。3、将分别靶向RsPG1、RsCAT和RsCRZ1基因的dsRNA喷施于玉米叶片表面,接种立枯丝核菌3d后,处理叶片中立枯丝核菌相关基因的表达水平下降了 64.5%、59.6%和68.7%,菌株生物量分别降低了 65.5%、59.6%和68.1%,病斑面积减少了 67.9%、52.5%和70.8%,说明这些基因均在立枯丝核菌致病过程中起重要作用。另外,立枯丝核菌RsCAT基因的沉默可导致其侵染寄主时,寄主的ROS反应加剧,RCCRZ1基因沉默导致其下游基因RsNCS转录水平下调。4、将荧光素标记的EGFP-dsRNA喷施于玉米叶片表面,共聚焦显微镜观察结果显示,荧光信号主要聚集在叶片维管束附近,沿维管束从喷施部位向远端延伸,且受伤叶片中荧光信号远强于完整叶片。说明作为立枯丝核菌的寄主作物,玉米可以吸收外源喷施的dsRNA,且可将吸收的dsRNA通过维管束系统输送至其他部位。5、将dsRNA与双层氢氧化物纳米材料LDH进行共孵育,当其质量比为1:2时,2h才能完全加载;当质量比为1:16时,仅需孵育30 min即可完成加载。叶面喷施荧光素标记的EGFP-dsRNA-LDH,与未加载至LDH的EGFP-dsRNA相比,叶片内荧光信号显著增强。在玉米叶片表面喷施RsCRZ1-dsRNA-LDH并接种立枯丝核菌,20 d后病斑仍维持较小水平,且喷施后20 d叶片中仍可检测到RsCRZ1-dsRNA;而仅喷施RsCRZ1-dsRNA,叶片中的dsRNA仅可存留3 d左右。说明LDH加载dsRNA形成dsRNA-LDH复合物可以提高dsRNA进入寄主细胞的效率,且提供更长的保护时间。6、另外,为获得更加廉价的dsRNA,控制成本,我们构建了表达dsRNA的L4440载体,将之转入大肠杆菌HT115感受态获得稳定表达dsRNA菌株,这将为后续dsRNA在田间的应用奠定基础。

关键词：喷施诱导的基因沉默双链RNA LDH纳米材料立枯丝核菌

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茄科蔬菜立枯丝核菌的遗传分化及分子检测

茄科蔬菜立枯丝核菌的遗传分化及分子检测

作者：伍恩宇山东农业大学

学位级别：硕士

2005-2006年,从山东泰安、寿光及陕西周至、太白等地采集辣椒和番茄立枯病、茎腐病和根腐病病株及病株周围土壤标本65份,分离、纯化得到39个立枯丝核菌菌株。菌丝融合群鉴定和5.8S rDNA-ITS区序列分析结果表明:36个菌株(占菌株总数的92.... 详细信息

2005-2006年,从山东泰安、寿光及陕西周至、太白等地采集辣椒和番茄立枯病、茎腐病和根腐病病株及病株周围土壤标本65份,分离、纯化得到39个立枯丝核菌菌株。菌丝融合群鉴定和5.8S rDNA-ITS区序列分析结果表明:36个菌株(占菌株总数的92.3%)属于立枯丝核菌的AG-4融合群,仅有3个菌株属于AG-5融合群(占分离菌株总数的7.7%);隶属AG-4融合群的菌株又进一步分为AG-4-HG-I和AG-4-HG-III融合亚群,隶属此两个亚群的供试菌株与此两个亚群的标准菌株相比,其5.8S rDNA-ITS区序列一致性达99%-100%。本研究还进一步证明AG-4-HG-I群的菌株为茄科蔬菜根部病害的优势致病群,占分离菌株总数的79.5%;AG-4-HG-III群菌株占分离菌株总数的12.8%,居分离菌株总数的第二位。此亚群为国内首次在茄科蔬菜上分离得到。利用10个随机引物,对21个代表菌株进行RAPD分析,结果表明,10个引物共获得179个DNA多态性片段,多态性检测率为100%;以遗传距离0.43为阈值时,将供试的21个菌株分为2个RAPD组,以遗传距离0.34为阈值时,属于AG-4融合群的菌株又可以分为2个RAPD组;隶属同一融合亚群的不同菌株间也存在丰富的遗传分化。说明RAPD分析结果能够反映茄科蔬菜丝核菌不同菌株间丰富的遗传分化现象。利用番茄对分离得到的39个丝核菌菌株进行了致病性测定,结果表明:隶属不同融合群的不同菌株其致病性强弱存在明显差异。同属于AG-4融合群的36个菌株也具有明显的致病力分化现象。总体看来,属于AG-4-HG-I融合亚群的菌株致病力较强,属于AG-4-HG-III融合亚群的菌株的致病力相对较弱。将AG-4-HG-I融合亚群各供试菌株的致病力分化结果与RAPD分析结果进行对比分析发现,菌株的RAPD分组(RG)与致病性分组(VG)无明显相关性。由此可见,RAPD分析虽然能够比较全面的反映供试立枯丝核菌菌株间的遗传分化,但是,对于探寻菌株间致病力的分化并不是一个有效手段。依据供试菌株rDNA-ITS区序列分析结果,针对AG-4融合群设计一对特异性引物,该引物特异性检测结果表明,只有属于AG-4融合群的丝核菌菌株扩增到一个约500bp的片段,属于其它融合群的丝核菌菌株及其它土传真菌病原如茄腐镰刀菌和终极腐霉菌都没有扩增到任何片段;利用该对引物从番茄立枯病罹病植株的发病部位成功检测到一个约500bp的片段,而从健康植株中没有检测到任何片段。此特异性引物为茄科蔬菜丝核菌病害的早期、快速诊断奠定了良好的基础。

关键词：立枯丝核菌茄科蔬菜遗传多样性 AG-4-HG-III rDNA-ITS 分子检测

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立枯丝核菌研究进展

黑龙江农业科学 2019年第2期 140-143页

作者：宁晓雪苏跃马玥宁晓宇张俊华东北农业大学农学院黑龙江哈尔滨150030 山东科塞基农控股有限公司山东济南250101 黑龙江八一农垦大学黑龙江大庆163319

为深入研究立枯丝核菌致病机理及其有效防治方法,综述了立枯丝核菌的研究进展情况,着重在立枯丝核菌的菌丝融合群、生物学特性、致病机理、生物防治、遗传多样性等方面进行总结分析,提出研究设想和建议。

关键词：立枯丝核菌生物学特性菌丝融合群致病机理遗传多样性

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木霉拮抗立枯丝核菌株的筛选

林业科技 1999年第6期24卷 23-25页

作者：于文喜王伟王瑛黑龙江省森林保护研究所东北农业大学黑龙江省森工总局

木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）是一种有利用价值的拮抗性真菌，对多种植物土传病原菌具有拮抗作用。为挑选优良菌株用于林业苗木立枯丝核菌的生物防治，１９９５～１９９６年在黑龙江省内广泛采集土样，对分离到的３４８个菌株反复测... 详细信息

木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）是一种有利用价值的拮抗性真菌，对多种植物土传病原菌具有拮抗作用。为挑选优良菌株用于林业苗木立枯丝核菌的生物防治，１９９５～１９９６年在黑龙江省内广泛采集土样，对分离到的３４８个菌株反复测定其拮抗作用，严格筛选。同时，为了扩大使用范围和获得较好的商业前景，还进一步测定了菌株对多种植物病原菌的寄生作用。１　材料和方法１－１　土样采集和分离于春秋两季在黑龙江省内具有代表性的地点采集不同类型和不同植物根际的土壤。采土深度５～１５ｃｍ，用诱捕法分离。１－２　筛选方法分粗筛和复筛两步。对初筛表现较好的菌株进行复筛。１－２－１　粗筛在９０ｍｍ直径的ＰＤＡ平板上用对峙法接种木霉和立枯丝核菌（均为３日龄，菌块直径８ｍｍ），使其分布在同一直径上各距培养皿边缘５ｍｍ处，置２６℃培养箱内，测试项目及记载标准如下。竞争和寄生能力　分别在接种后第４日和第１０日测量木霉的菌丝直线生长距离Ｔ１和Ｔ２，以及第４日立枯丝核菌的菌丝直线生长距离Ｓ０，Ｔ１代表竞争能力，Ｔ２－Ｔ１代表寄生能力。抗生作用　观察木霉和立枯丝核菌两菌落间色带的有无、颜色的深浅和宽窄，按０～５级划分。０级两菌落交界处无色带；５级两菌落间棕色带宽...

关键词：立枯丝核菌菌块竞争能力植物病源真菌竞争力木霉菌株木霉拮抗

新疆南疆棉花立枯丝核菌融合群及其遗传进化关系的研究

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新疆南疆棉花立枯丝核菌融合群及其遗传进化关系的研究

作者：玉山江·买买提新疆农业大学

学位级别：硕士

从采自南疆主要植棉区的4地18县市的棉花立枯病病株上分离得到455个病原分离物,从中鉴定出345个立枯丝核菌(Rhizotonia solani Kühn )菌株。根据菌丝融合性判定方法判明345个立枯丝核菌菌株分属于AG-1、AG-4和AG-5三个菌丝融合群,其出... 详细信息

从采自南疆主要植棉区的4地18县市的棉花立枯病病株上分离得到455个病原分离物,从中鉴定出345个立枯丝核菌(Rhizotonia solani Kühn )菌株。根据菌丝融合性判定方法判明345个立枯丝核菌菌株分属于AG-1、AG-4和AG-5三个菌丝融合群,其出现频率分别为3.76%、91.88%、4.35%。其中AG-4在所有立枯丝核菌菌株中出现频率最高(91.88%),是南疆棉花立枯丝核菌的优势菌群。按8个菌株一组,接种于麦芽蛋白胨(MDA)培养基,经营养体亲和性判别表明各菌丝融合群均有营养体亲和群分化,其中判定为AG-4的317个菌株分属于3个营养体亲和群,判定为AG-1的13个菌株和判定为AG-5的15个菌株各自分属于2个营养体亲和群。此结论充分说明新疆南疆地区棉田立枯丝核菌各菌丝融合群内确有不同程度的分化。培养性状观察结果表明:各菌丝融合群间在菌落的颜色、形状、气生菌丝量的多少和菌核的颜色、形状、结构、大小、多少、分布方面及培养基颜色等培养性状上呈现显著差异。不同菌丝融合群及其各营养亲和群代表菌株在9种不同主栽棉花品种上进行温室盆栽致病力测定结果显示:各融合群对棉苗有不同程度致病性,以AG-4对棉花的致病力最强,AG-1和AG-5致病力较弱。DNA提取方法的比较表明采用CTAB改进方法较传统提取方法更能够获得比较纯净的菌丝细胞DNA。通过8个引物进行的指纹扩增及电泳分析图谱表明:不同菌丝融合群菌株间PCR扩增电泳图谱中的条带数目、条带位置有比较明显的差异,而同一营养体亲合群菌株之间差异较小,显示了营养体亲合群群内菌株间较大的遗传相似性。采用Ntsys-pc2.1统计软件对数据进行系统聚类分析所得到的各AG、VCG菌株的遗传相似性树状图中可以看到:在相似度为68%左右时分为3个遗传聚类组,各AG群分立一组;在相似度为77%时分为6个遗传聚类组,各VCG分立一组,各VCG群内菌株的相似度在76%--89%之间,充分说明各AG、VCG群内菌株具有较高的遗传同源性,同时也存在明显遗传分化。从而证明根据菌丝体细胞融合性与融合亲和性生理来进行AG群分类及VCG划分与棉花立枯病菌的自身的遗传分化有很好的对应,能反应其遗传本质。同时证明通过指纹图谱扩增技术能够较好地分析棉花立枯病菌种内分化情况。采自新疆南疆各地县的同群菌株(AG4-VA)的遗传相似性树状图中可以看到:在相似度为0.78时分为4个遗传聚类组,同一地区的群株较多地集中在同一遗传聚类组内,证明不同地区间不同的地理气候环境以及品种种类对该菌的遗传进化有一定的影响,同群株间还存在一定的地理分化。

关键词：棉花立枯丝核菌菌丝融合群营养体亲和群 PCR 指纹图谱扩增