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MAPREC技术在Sabin株脊髓灰质炎疫苗神经毒力检测中的应用

MAPREC技术在Sabin株脊髓灰质炎疫苗神经毒力检测中的应用

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作者：姬光北京协和医学院

学位级别：硕士

随着全球消灭脊灰进程的推进,为了避免脊灰疫苗衍生病毒(Vaccine-derived Poliovirus,VDPV)和脊灰疫苗相关麻痹病例(vaccine-associated paralytic poliomyelitis,VAPP)的产生,WHO建议使用脊髓灰质炎灭活疫苗(Inactivated Poliovirus Vaccine,IPV)逐渐替代OPV进行免疫,这也是《全球消灭脊灰战略终结计划》的要求。在sIPV的生产过程中,要求毒种和疫苗都必须保持减毒株的特性,严格控制其神经毒力。猴体神经毒力实验(Monkeys Neurovirulence Test,MNVT)被认为是Sabin株病毒和Sabin株疫苗神经毒力评价的重要指标和标准方法,但猴子资源有限,成本较高而且关系到伦理问题。MAPREC技术(Mutant Analysis by PCR and Restriction Enzyme Cleavage,MAPREC)是指用聚合酶链反应(PCR)和限制性内切酶裂解技术分析突变的方法,可以降低成本减少试验动物的使用量,主要用于神经毒力试验前的筛选。目前国外实验室对MAPREC方法的研究较多,国内虽有研究但未见文献报道,随着全球消灭脊灰计划的进展,大批量的疫苗需要进行神经毒力检测,WHO鼓励进行MAPREC方法的研究。目的:采用MAPREC实验检测Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(inactivated poliomyelitis vaccine,Sabin strain,sIPV)生产时,病毒收获液中病毒神经毒力决定位点的基因突变情况,以评估疫苗神经毒力的回升情况,对疫苗的安全性进行评价。方法:①利用MAPREC技术检测疫苗株病毒Sabin Ⅰ型(480-A、525-C)位点,Sabin Ⅱ型(481-C)位点以及Pfizer Ⅲ型(472-C)位点在生物反应器中培养时的突变率。②在培养瓶中改变培养温度、感染系数(multiplicity of infection,MOI)、传代次数后,观察突变率的变化情况。结果:MAPREC技术能够检测出sIPV的病毒上述位点在正常培养条件下较低的突变率,当培养条件发生改变后,该方法检测出的这些位点的突变也随之改变。结论:MAPREC实验可以快速有效的检测脊髓灰质炎疫苗病毒收获液的基因突变率,从而确定疫苗的神经毒力是否通过标准,确保生产出安全有效的疫苗。

关键词：脊髓灰质炎灭活疫苗 MAPREC实验神经毒力决定位点突变比率

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