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胃癌中VEGF及突变型p53基因表达及临床意义研究

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国际消化病杂志 2009年第3期29卷 213-215页

作者：穆桂芳孙光喜董崇海孔令亭郑京华魏虹孙爱涛威海市立二院消化内科 264200 烟台市烟台山医院消化内科 264000

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)及突变型p53(mtp53)基因表达水平与胃癌病理生理学特征之间的关系。方法采用免疫组化方法(二步法),检测86例胃癌组织及30例癌旁组织及切缘"正常"组织中的VEGF、mtp53表达水平。结果胃癌组织中VEGF、mtp5... 详细信息

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)及突变型p53(mtp53)基因表达水平与胃癌病理生理学特征之间的关系。方法采用免疫组化方法(二步法),检测86例胃癌组织及30例癌旁组织及切缘"正常"组织中的VEGF、mtp53表达水平。结果胃癌组织中VEGF、mtp53基因的表达水平显著高于癌旁组织和切缘"正常"组织(pp53基因表达水平与胃癌患者性别、年龄、组织学类型、细胞分化程度均无明显关系(p>0.05),与浸润程度、淋巴结转移、远处转移状态、p-TNM分期均有密切关系(pp53基因表达水平与VEGF表达水平呈正相关(pp53基因可能参与了胃癌的发生、进展进程,可以作为胃癌生物学行为恶化的一项指标。

关键词：胃癌血管内皮生长因子突变型p53基因免疫组织化学

肺癌中血管内皮生长因子及突变型p53基因表达及其临床意义研究

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中国肺癌杂志 2001年第5期4卷 371-374页

作者：李印车国卫周清华许金良河南省肿瘤医院胸外科郑州450052 四川大学华西医院(原华西医科大学附属第一医院)胸心外科

目的　探讨血管内皮生长因子 (VEGF)、突变型p5 3(mtp5 3)基因表达水平与肺癌病理生理学特征之间的关系。方法　采用免疫组化方法 (LSAB法 ) ,检测 12 0例肺癌组织及相应癌旁组织 ,40例肺良性病变组织中的VEGF、mtp5 3表达水平。结果　... 详细信息

目的　探讨血管内皮生长因子 (VEGF)、突变型p5 3(mtp5 3)基因表达水平与肺癌病理生理学特征之间的关系。方法　采用免疫组化方法 (LSAB法 ) ,检测 12 0例肺癌组织及相应癌旁组织 ,40例肺良性病变组织中的VEGF、mtp5 3表达水平。结果　肺癌组织中VEGF、mtp5 3基因的表达水平显著高于癌旁肺组织和肺良性病变组织 (p p5 3基因表达水平与肺癌患者性别、年龄、吸烟史、组织学类型均无明显关系 (p >0 .0 5 ) ,与原发肿瘤大小、细胞分化程度、淋巴结转移状态、p_TNM分期均有密切关系 (p p5 3基因表达水平与VEGF表达水平呈显著正相关 (p p5 3基因可能参与了肺癌的发生、发展进程 ,可以作为肺癌生物学行为恶化的一项指标。

关键词：肺肿瘤血管内皮生长因子突变型p53基因基因表达

鼠体突变型p53外源基因的垂直传递和转位观察

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Developmental and Reproductive Biology 1998年第1期7卷 11-16页

作者：李宝林史元元等 Departmentofpathology YaleUniversitySchoolofMedicinneNewHavenCT06510USA 中国人民解放军牧生物工程实

外源基因用于制作转基因鼠并能成功地传递到子代已是不争的事实。但是，有关研究转基因的大小以及对其功能的影响却鲜见报导。本实验对体突变型p53基因－作为外源基因在172^Arg-Leu－体突变型p53基因的双转基因鼠家系中的遗传行为进行... 详细信息

外源基因用于制作转基因鼠并能成功地传递到子代已是不争的事实。但是，有关研究转基因的大小以及对其功能的影响却鲜见报导。本实验对体突变型p53基因－作为外源基因在172^Arg-Leu－体突变型p53基因的双转基因鼠家系中的遗传行为进行了研究。以体突变型p53基因的XhoI-ApaLI片段为探针，对雌性双转基因鼠＃4491及其子代进行Southern blot分析（Fig.2)。通过Betagen Meter测定，比较杂交膜上探针的吸附量得知：子鼠＃5074等体内的外源p53基因的拷贝数是其亲本34491的3倍。Fig.1为＃4491与雄性FVB鼠杂交后代的家系谱。杂交F1的子代中，那些外源p53基因拷贝数是其亲代（F1）3倍的鼠（如＃5071和＃668）、其后代中继续出现这种基因拷贝数的变化。取待测鼠＃5074的脾细胞制备染色体，经G染色，以WAp－双转基因－SV40连结p（A）的结构为探针，进行原位荧光测定。Fig.3表明：b所指的外源p53基因从所在的染色体上发生跳跃（jump in)，出现在c和d所指的位置上。可能，整合在＃4491染色体上的外源p53基因有两组，一组是稳定整合的，传代时，可以被传递到所有子代上；另一组是非稳定整合的，由于一些未知因素，在传递过程中被扩增、并发生了跳跃现象。也许，特定位点上转基因的拷贝数有一个限量，适量则稳定；反之、则不稳定。

关键词：转基因鼠突变型p53基因外源基因垂直传递转位传代

含突变型p53和LMp1双基因重组质粒的构建与鉴定

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湖南中医学院学报 2005年第3期25卷 1-3页

作者：何迎春田道法湖南中医学院湖南长沙410007

目的构建一种双基因真核表达载体,使之表达人突变型p53蛋白(p53mt)和EB病毒潜伏膜蛋白1(LMp1),为研究这两个蛋白在鼻咽癌变中的交互作用奠定基础。方法通过基因重组技术,构建含突变型p53基因和EB病毒LMp1基因的真核表达载体pLMp1—p53mt... 详细信息

目的构建一种双基因真核表达载体,使之表达人突变型p53蛋白(p53mt)和EB病毒潜伏膜蛋白1(LMp1),为研究这两个蛋白在鼻咽癌变中的交互作用奠定基础。方法通过基因重组技术,构建含突变型p53基因和EB病毒LMp1基因的真核表达载体pLMp1—p53mt;采用脂质体lipofectAMINETM2000将此载体转入体外培养的HeLa细胞中,转染后48h,采用免疫细胞化学方法分析突变型p53基因和EB病毒LMp1基因的表达。结果对重组载体进行限制性内切酶酶切及pCR鉴定分析,结果与预期相符合;转染试验观察到转染细胞中突变型p53基因和LMp1基因的阳性表达。结论成功构建了表达人突变型p53蛋白和EB病毒LMp1的真核载体pLMp1—p53mt,其研究思路可以为中医体质病机研究提供借鉴。

关键词：突变型p53基因 LMp1基因基因重组鉴定

人突变型p53和EB病毒LMp1转基因小鼠的建立

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第四军医大学学报 2006年第1期27卷 6-9页

作者：何迎春田道法卢芳国毛积芳湖南中医学院基础部湖南长沙410007 上海南方模式生物研究中心上海201203

目的:建立含突变型p53和EB病毒LMp1基因的双转基因小鼠模型,为研究突变型p53和EB病毒LMp1基因在鼻咽癌前病变中的交互作用提供有力的工具.方法:通过分子克隆技术构建含突变型p53基因和EB病毒LMp1基因的真核表达载体pLMp1-p53mt;采用显... 详细信息

目的:建立含突变型p53和EB病毒LMp1基因的双转基因小鼠模型,为研究突变型p53和EB病毒LMp1基因在鼻咽癌前病变中的交互作用提供有力的工具.方法:通过分子克隆技术构建含突变型p53基因和EB病毒LMp1基因的真核表达载体pLMp1-p53mt;采用显微注射法将线性化的表达载体注射至小鼠受精卵的雄性原核中,然后将注射存活的受精卵植入假孕母鼠的输卵管;取其产3wk龄子代鼠进行pCR初选,再通过Southern杂交进一步确证;利用HE染色法观察4mo龄转基因小鼠不同组织病理变化.结果:将转基因载体进行了707枚小鼠受精卵的显微注射,然后植入30只假孕母鼠的输卵管中,其中26只母鼠怀孕,移植成功率为86.67%;共出生子代鼠179只;pCR检测显示179只子代小鼠中有9只整合了p53mt和LMp1基因,转基因阳性小鼠比例为5.03%(9/179),Southern杂交结果进一步证实了9只基因组整合了外源基因的首建者小鼠;随机抽取其中的1只转基因阳性小鼠鼻腔黏膜、鼻咽、食管表现炎症,鼻咽黏膜上皮灶性增生.结论:成功建立整合人突变型p53和LMp1的转基因小鼠,且表现鼻咽黏膜上皮灶性增生,可为鼻咽癌前病变机制的研究提供手段.

关键词：突变型p53基因 LMp1基因鼻咽癌前病变转基因小鼠

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突变型p_(53)基因与肝细胞癌

医学综述 1996年第12期2卷 644-646页

作者：林华解放军476医院 50002

野生型p_(53)基因作为一种抗癌基因已日益受到学者关注.近年来p_(53)基因及其蛋白在正常细胞中的功能和它在肿瘤发生发展过程中的作用,已成为肿瘤研究的热点之一.癌基因的激活与抗癌基因的失活,是肿瘤发生发展过程分子机制的重要基础.p_... 详细信息

野生型p_(53)基因作为一种抗癌基因已日益受到学者关注.近年来p_(53)基因及其蛋白在正常细胞中的功能和它在肿瘤发生发展过程中的作用,已成为肿瘤研究的热点之一.癌基因的激活与抗癌基因的失活,是肿瘤发生发展过程分子机制的重要基础.p_(53)基因的突变或缺失可能干扰或阻断野生型p_(53)负性调节功能引发人类包括肝细胞癌(HCC)在内的多种肿瘤.本文就p_(53)与HCC之间若干内容加以综述.

关键词：肝癌肝细胞癌抗癌基因突变型p53基因

抗癌扶正方对人肝癌细胞SMMC-7721的p^(53)基因表达的调控作用

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辽宁中医杂志 2010年第11期37卷 2215-2217页

作者：叶丽红皮文霞程海波俞晶华张旭章永红南京中医药大学第一临床医学院江苏南京210029

目的:探讨国医大师经验方"抗癌扶正方"的抗肝癌作用及机制。方法:提取抗癌扶正方,针对人肝癌细胞SMMC-7721,经过细胞培养、MTT法、流式细胞仪检该方对肝癌细胞生长抑制率的影响及对突变型p53基因表达的调控作用。结果:抗癌扶正方具有良... 详细信息

目的:探讨国医大师经验方"抗癌扶正方"的抗肝癌作用及机制。方法:提取抗癌扶正方,针对人肝癌细胞SMMC-7721,经过细胞培养、MTT法、流式细胞仪检该方对肝癌细胞生长抑制率的影响及对突变型p53基因表达的调控作用。结果:抗癌扶正方具有良好的抑制肝癌细胞生长作用,尤其以1mg/mL,10mg/mL剂量组的效果最佳,作用程度与化疗药物类似。此方可以下调凋亡抑制基因突变型p53的表达。结论:抗癌扶正方能够抑制人肝癌细胞SMMC-7721活性。其机理在于降低肝癌凋亡抑制基因的表达,促进细胞凋亡的产生。

关键词：抗癌扶正方人肝癌细胞SMMC-721 生长抑制率突变型p53基因

环磷酰胺诱发的染色体损伤与p53基因表达的关系

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癌变．畸变．突变 2003年第4期15卷 228-230页

作者：王明艳许冬青徐力张旭赵凤鸣姜海英南京中医药大学基础医学院生物教研室江苏南京210029 南京中医药大学学报编辑部江苏南京210029

目的 :探讨环磷酰胺(cyclophosphamide,Cp)对染色体损伤与p53基因表达间的关系。方法 :以正常人外周血淋巴细胞为材料 ,用流式细胞仪检测环磷酰胺对突变型p53基因表达的影响 ,同时以微核(MN)及姐妹染色单体互换(SCE)为指标 ,进行致突... 详细信息

目的 :探讨环磷酰胺(cyclophosphamide,Cp)对染色体损伤与p53基因表达间的关系。方法 :以正常人外周血淋巴细胞为材料 ,用流式细胞仪检测环磷酰胺对突变型p53基因表达的影响 ,同时以微核(MN)及姐妹染色单体互换(SCE)为指标 ,进行致突变研究。结果 :环磷酰胺用药组突变型p53基因表达率为30.81 % ,微核率为8‰ ,姐妹染色单体互换率为9.21±1.08 ,与对照组比较均有显著差异。结论

关键词：环磷酰胺致突变突变型p53基因微核姐妹染色单体互换

基于碘离子协同纳米模拟酶催化在比色传感中的应用及苝二酰亚胺检测多种microRNA

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基于碘离子协同纳米模拟酶催化在比色传感中的应用及苝二酰亚胺检...

作者：刘嘉丽云南师范大学

学位级别：硕士

纳米模拟酶与天然酶相比具有合成所需费用廉价、催化活性可调控、生物相容性良好、苛刻条件下的超高稳定性以及可大规模生产等优点,使其在生物传感领域中展现出巨大的潜在应用前景。多孔材料由于具有自身固有的多孔结构、超高的比表面... 详细信息

纳米模拟酶与天然酶相比具有合成所需费用廉价、催化活性可调控、生物相容性良好、苛刻条件下的超高稳定性以及可大规模生产等优点,使其在生物传感领域中展现出巨大的潜在应用前景。多孔材料由于具有自身固有的多孔结构、超高的比表面积、超高的孔隙率、孔隙可调性并具有过氧化物纳米模拟酶催化活性等优点,可用于生物催化领域。本论文合成Zn-共价三嗪骨架(Zn-Covalent triazine framework,Zn-CTF)材料,并充分应用其超高的比表面积、易于制备、较大的孔隙率、较好的稳定性、良好的生物相容性等的特点;合成G-四链体/Hemin DNA酶(G4/Hemin)并使用Zn-CTF和G4/Hemin两者构建无标记可视化比色传感。此外,还合成了具有广谱和无标记优势的猝灭剂苝二酰亚胺(pDI)用于多目标检测。本文的工作具体分为以下四个部分:(1)以具有类似过氧化物纳米模拟酶性质的Zn-CTF作为催化活性物质,构建一种无标记型可视化的生物比色传感体系用于HO和乙酰胆碱脂酶活性(ACh E)的定量检测。当碘离子(I)嵌入Zn-CTF后,Zn-CTF的催化能力显著提升。I可协同Zn-CTF催化3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB),使体系颜色先由无色被氧化变为为蓝色,提高传感器的灵敏度。采用紫外可见分光光度计(UV-Vis)检测氧化态TMB(Ox TMB)在652 nm波长处的吸光度变化情况。TMB在氧化状态下的产物Ox TMB因具有良好的光热效应,可作为光热探针进行光热能量之间的转换,通过体系的温度变化进行分析检测。吸光度值和温度变化值随HO浓度在1nmol/L～2 mmol/L范围内的增大而增大。建立信号减小型的比色传感方法检测ACh E,巯基乙酰胆碱(ATch)水解产生的巯基胆碱可抑制TMB显色,在0.01U/L～60 U/L范围内,吸光度随ACh E浓度增大而降低,检测限为2 m U/L(S/N=3)。(2)合成富含鸟嘌呤碱基(G碱基)序列的赭曲霉素(OTA)适配体,当加入目标物OTA时,适配体可自组装成反平行G-四链体(G4)结构,将氯化血红素(Hemin)标记在G4上可形成过氧化物模拟酶G4/Hemin,I也可增强Hemin过氧化物纳米模拟酶活性,由此构建了一种信号放大型可视化比色传感体系用于OTA的定量检测。I协同G4/Hemin催化HO产生大量羟基自由基(·OH),氧化TMB由无色变成蓝色。采用紫外可见分光光度计(UV-Vis)检测Ox TMB在652 nm处的吸光度变化,吸光度值随OTA浓度在0.005 ng/m L～180 ng/m L范围内的增大而增大,获得的检测限为1 pg/m L(S/N=3)。与商业化的酶联免疫试剂盒(ELISA)相比,该生物传感器的检测限降低了2个数量级。(3)基于上一个的工作,G-四链体与Hemin可组装成过氧化物纳米模拟酶,加入I协同G4/Hemin催化HO氧化TMB使其从无色变成蓝色。在本实验中,为了进一步提高G4/Hemin的催化活性,采用酶级联反应将G4/Hemin共同固定在平台上,加入突变型p53基因可启动杂交链式反应(HCR)组装G4并调节Hemin模拟酶活性,由此构建了一种以突变型p53基因为单核苷酸多态性(Single Nucleotide polymophisms,SNp)模型的可视化比色传感器,用于级联信号放大检测,可选择性地检测突变型p53基因片段。采用紫外可见分光光度计(UV-Vis)检测体系在652 nm处的吸光度变化,吸光度值随着目标物突变型p53基因浓度在10 pmol/L～600 nmol/L范围内的增大而增大,获得的检测限为2 pmol/L(S/N=3)。(4)mi RNA的异常表达与许多癌症相关,因此mi RNA的检测在癌症中的诊断占据着极其重要的地位。苝二酰亚胺(pDI)可作为广谱猝灭剂,能猝灭DNA-RNA双链标记的荧光团,从绿色荧光团FAM到红色荧光团Cy5。修饰不同荧光基团的DNA与多种mi RNA特异性杂交形成双链,当双链特异性核酸酶(Duplex-specific nuclease,DSN)加入时可释放出荧光基团,由此构建了一种以pDI为猝灭平台的荧光传感用于多种mi RNA的检测。采用荧光光谱分析仪检测FAM、TAMRA和Cy5的荧光强度变化,当mi RNA-21、mi RNA-141、mi RNA-155这三种mi RNA的浓度不断增大时,荧光强度也会逐渐增大。mi RNA-21检测范围为2 fmol/L～20 pmol/L,检测限为0.67 fmol/L(S/N=3);mi RNA-141检测范围为4fmol/L～25 pmol/L,检测限为1.33 fmol/L(S/N=3);mi RNA-155检测范围为3fmol/L～18 pmol/L,检测限为1 fmol/L(S/N=3)。

关键词：纳米模拟酶 G-四链体/Hemin 3,3’,5,5’-四甲基联苯胺苝二酰亚胺乙酰胆碱酯酶赭曲霉素A 突变型p53基因 microRNA