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穿孔蛋白不仅仅只是一种效应分子

国外医学情报 2001年第6期22卷 15-17页

作者：温建成王延红

宿主的存活依赖于能对感染性病原体产生保护性反应和使宿主具有逃避免疫损害调控机制的免疫系统。穿孔蛋白(Per-forin,穿孔素)通过效应淋巴细胞破坏被感染细胞的作用已被充分确定。最近,缺损穿孔蛋白已被确认为家族性嗜血细胞淋巴组织... 详细信息

宿主的存活依赖于能对感染性病原体产生保护性反应和使宿主具有逃避免疫损害调控机制的免疫系统。穿孔蛋白(Per-forin,穿孔素)通过效应淋巴细胞破坏被感染细胞的作用已被充分确定。最近,缺损穿孔蛋白已被确认为家族性嗜血细胞淋巴组织细胞病(FHL)的一种遗传基础,FHL是一种致命的遗传性人体免疫功能障碍性疾患。

关键词：穿孔蛋白家族性嗜血细胞淋巴组织细胞病 FHL

小鼠TIL、LAK细胞穿孔蛋白mRNA表达与其抗瘤作用的关系

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南通医学院学报 1996年第4期16卷 481-484页

作者：汪晓莺刘运义孙晓雷徐红梅苏丽

用原位杂交法检测小鼠不同培养时期的ＴＩＬ和ＬＡＫ细胞中穿孔蛋白（ＰＦＰ）ｍＲＮＡ的表达，并用显微图象分析系统处理检测ＰＦＰｍＲＮＡ表达水平，结果表明：ＴＩＬ细胞的ＰＦＰｍＲＮＡ表达水平在第１４、２１天时达高峰，２８天... 详细信息

用原位杂交法检测小鼠不同培养时期的ＴＩＬ和ＬＡＫ细胞中穿孔蛋白（ＰＦＰ）ｍＲＮＡ的表达，并用显微图象分析系统处理检测ＰＦＰｍＲＮＡ表达水平，结果表明：ＴＩＬ细胞的ＰＦＰｍＲＮＡ表达水平在第１４、２１天时达高峰，２８天时开始下降；而ＬＡＫ细胞则在第７天时即达到较高水平，２１天时开始下降，但ＴＩＬ细胞的表达水平显著高于ＬＡＫ。将同时期的ＴＩＬ及ＬＡＫ细胞进行体内外抗瘤活性测定，发现两者的ＰＦＰｍＲＮＡ表达水平，均与其体外杀伤活性有明显的相关性，而体内抗瘤活性与体外杀伤活性间则无显著相关性。研究结果提示，ＰＦＰ在小鼠ＴＩＬ，ＬＡＫ细胞介导的溶细胞过程中起着重要作用，而ＴＩＬ和ＬＡＫ细胞的体内抗瘤活性还受体内多种因素的影响。

关键词：穿孔蛋白 TIL LAK 白细胞介素2 抗瘤作用

FTY720对穿孔蛋白和颗粒酶mRNA表达的影响及其与移植物存活的关系

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中华微生物学和免疫学杂志 1998年第5期18卷 44-44页

作者：孙尔维中岛启雄高伟冈隆宏第一军医大学附属珠江医院血液净化肾移植科日本京都府立医科大学第二外科

为探讨新型免疫抑制剂ＦＴＹ７２０对细胞毒性Ｔ细胞（ＣＴＬ）颗粒酶路径的影响及其与移植物存活的关系，我们给予同种异体心脏移植模型（ＢＮ大鼠→Ｌｅｗｉｓ大鼠）的受鼠在术前１天至术后１４天口服不同剂量的ＦＴＹ７２０（每天１... 详细信息

为探讨新型免疫抑制剂ＦＴＹ７２０对细胞毒性Ｔ细胞（ＣＴＬ）颗粒酶路径的影响及其与移植物存活的关系，我们给予同种异体心脏移植模型（ＢＮ大鼠→Ｌｅｗｉｓ大鼠）的受鼠在术前１天至术后１４天口服不同剂量的ＦＴＹ７２０（每天１ｍｇ／ｋｇ，５ｍｇ／ｋｇ和１０ｍｇ...

关键词：同种异体穿孔蛋白颗粒酶 FTY720 mRNA 移植物

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日本克隆化小鼠穿孔蛋白的cDNA成功

生物技术通报 1989年第7期5卷 10-10页

作者：孙国凤

日本顺天堂大学医学部免疫学教授奥村康和真贝洋一、理化学研究所国际研究新领域系统研究员泷尾扩士等合作,首次在世界上精制了 T 杀伤细胞和天然杀伤细胞担负杀伤靶细胞任务的穿孔蛋白(或穿孔素,Perforin),并以此成果为基础,克隆了 cDN... 详细信息

日本顺天堂大学医学部免疫学教授奥村康和真贝洋一、理化学研究所国际研究新领域系统研究员泷尾扩士等合作,首次在世界上精制了 T 杀伤细胞和天然杀伤细胞担负杀伤靶细胞任务的穿孔蛋白(或穿孔素,Perforin),并以此成果为基础,克隆了 cDNA。这项研究是与住友电工公司共同进行的。已由公司申请了专利。这项成果除已在《Na-

关键词：穿孔蛋白克隆化天然杀伤细胞理化学研究所真贝康和靶细胞穿孔素免疫学免疫反应

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嗜吞噬细胞无形体表面蛋白P44研究进展

中国人兽共患病学报 2020年第12期36卷 1038-1043页

作者：张秋宇王峰孙乐陈施华岳磊严敏昆明医科大学基础医学院病原生物学与免疫学系昆明650500 中国医学科学院医学生物学研究所昆明650118

P44是嗜吞噬细胞无形体p44/msp2基因家族编码的膜表面含量最多、研究最广泛的蛋白。其作为一个穿孔蛋白广泛参与病原体感染早期的黏附、入侵、免疫逃逸及新陈代谢等多种复杂生理活动,与嗜吞噬细胞无形体的致病机制密切相关,已成为当下... 详细信息

P44是嗜吞噬细胞无形体p44/msp2基因家族编码的膜表面含量最多、研究最广泛的蛋白。其作为一个穿孔蛋白广泛参与病原体感染早期的黏附、入侵、免疫逃逸及新陈代谢等多种复杂生理活动,与嗜吞噬细胞无形体的致病机制密切相关,已成为当下研究的热点分子。本文就该蛋白分子的主要生理功能、分子生物学特性等方面对其进行全面阐述。

关键词：嗜吞噬细胞无形体 p44/msp2 穿孔蛋白免疫逃逸

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穿孔素蛋白单分子力谱样品的制备与研究

穿孔素蛋白单分子力谱样品的制备与研究

作者：刘华星南京大学

学位级别：硕士

原子力显微镜凭借高的空间分辨率和高灵敏度是目前在生理条件下研究生物样品的重要工具之一。除了作为经典的微纳米级成像工具,原子力显微镜也可被采用为一种单分子力谱技术,广泛的应用到生物样品的力学操作研究中。通过原子力显微镜针... 详细信息

原子力显微镜凭借高的空间分辨率和高灵敏度是目前在生理条件下研究生物样品的重要工具之一。除了作为经典的微纳米级成像工具,原子力显微镜也可被采用为一种单分子力谱技术,广泛的应用到生物样品的力学操作研究中。通过原子力显微镜针尖对单个分子的吸附和拉伸,研究分子本身的力学性质和分子与分子之间的作用力。单分子力谱具有生物相容性好、检测力范围广等优点,可以检测到皮牛(pico Newton,p N)级别的力变化,因此不仅被广泛应用于生物样品,也被应用到研究聚合物和化学键等研究中。采用原子力显微镜研究蛋白样品,利用分子生物学和蛋白质工程制备适用于单分子力谱研究的蛋白样品是其必不可少的第一步。蛋白样品制备的方法和效率直接影响了研究进度和实验结果的准确性。在单分子层面研究蛋白对样品的纯度要求较高,杂蛋白不仅会增加后续工作量,也直接影响了实验效果。因此对蛋白制备方法的优化,是提高单分子研究成功率的的重要步骤。本论文中,我们主要制备了适用于单分子力谱研究的穿孔素(Pore-forming toxins,PFTs)蛋白。穿孔素是细菌攻击宿主细胞的主要武器之一,通过在宿主细胞表面聚集成孔,使宿主细胞内容物外泄,达到杀死宿主细胞的目的。近年来,研究人员在哺乳细胞体内也发现了类似的成孔蛋白,这些成孔蛋白作为免疫系统的一部分,可以杀死入侵细菌或者杀死被侵染的哺乳细胞,激发更强烈的免疫反应,因此研究穿孔素蛋白具有重要的意义。以往通常是在宏观层次观察其溶血活性进行研究。本论文中我们利用原子力显微镜及其单分子力谱技术在单个分子层次直接观察其形态并对其力学稳定性等方面进行研究。论文第一章,我们介绍了原子力显微镜在生物成像、单分子力谱以及与其他设备结合研究蛋白质的应用。介绍了通过分子生物学方法得到目的基因;根据质粒和菌株的不同特性与目的蛋白特性结合,组合成最优的蛋白表达体系;通过大肠杆菌的不同培养方法得到更多目的蛋白;通过基于FPLC的各种手段得到目标蛋白。最终,通过实验条件优化,高效地获取到理想的蛋白样品,为接下来的原子力显微镜成像和单分子力谱实验的奠定基础。第二章中我们利用原子力显微镜成像和单分子力谱技术,对溶血素蛋白(α-Hemolysin)单体、多聚体在水溶液中的形态以及溶血素蛋白多聚体在Dph PC膜中的形态进行了研究,证实了溶血素蛋白多聚体为七聚体。之后对野生型(Wild type)溶血素蛋白七聚体在水溶液和在膜上的解折叠方式进行研究,证明了脂质体膜在溶血素蛋白七聚体稳定性中起到了重要作用。通过在溶血素蛋白七聚体C端连接loop的形式找出了针尖吸附蛋白的位置,并且根据峰与峰之间的ΔLc以及结合膜蛋白顺序性解折叠的特点分析出了蛋白解折叠的方式。我们又通过对溶血素蛋白stem domain的截断,通过研究截断突变体的解折叠方式证明了其在维持溶血素蛋白七聚体稳定性中的重要作用。通过对α-Hemolysin系统性的研究,我们积累了制备适用于单分子力谱研究的穿孔素蛋白的经验。利用这些研究思路,在第三章中我们对另一种穿孔素蛋白,小鼠体内的细胞焦亡素(Gasdermin A3),进行了样品制备的优化和初步的单分子力谱的研究。在使用大肠杆菌表达系统表达哺乳细胞蛋白时,我们通过不同助溶标签、质粒和蛋白纯化方法的不断优化,解决了蛋白产量低、难纯化和易沉淀等难题,实现了单独N端(Gasdermin A3(N))表达和插膜。之后通过单分子力谱修饰的方法,通过Coh-XDoc的相互作用使蛋白得到特异性拉伸,然后对收集的力谱曲线进行叠加,分析解折叠峰之间的ΔLc最终判断出Gasdermin A3(N)单体的蛋白解折叠方式,为后续研究奠定基础。总体来说,本论文主要从分子生物学的构建、表达载体的选择、表达条件和蛋白纯化方法等几个方面进行优化,制备了单分子力谱实验蛋白样品。同时选取了金黄色葡萄球菌分泌的毒性穿孔蛋白α溶血素和小鼠体内免疫反应中的分泌的穿孔蛋白Gasdermin A3作为研究对象。由细菌到哺乳细胞,由浅入深地利用原子力显微镜和单分子力谱技术对穿孔素蛋白的稳定性进行研究,为研究穿孔素这一类蛋白提供帮助。

关键词：穿孔蛋白原子力显微镜成像单分子力谱技术蛋白表达与纯化

鼻咽癌细胞中表达的人白细胞介素18(hIL-18)对鼻咽癌患者外周血CD8^+T细胞细胞毒活性增强作用的研究

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中国免疫学杂志 2002年第1期18卷 36-39页

作者：陶剑平夏云飞张昌卿李满枝林学颜中山医科大学微生物学教研室广州510089 中山医科大学肿瘤医院放疗科广州510089 中山医科大学肿瘤医院中心实验室广州510089 中山医科大学肿瘤研究所广州510089 中山医科大学免疫学教研室广州510089

目的:探讨人白细胞介素18在鼻咽癌细胞中的表达能否提高鼻咽癌病人外周血CD8+T细胞的杀伤活性以及作用途径。方法:构建人白细胞介素18的真核表达载体pcDNA3．1(-)/HIL-18,转染人鼻咽癌细胞株SUNE;以转染的SUNE细胞和未转染的 SUNE细胞... 详细信息

目的:探讨人白细胞介素18在鼻咽癌细胞中的表达能否提高鼻咽癌病人外周血CD8+T细胞的杀伤活性以及作用途径。方法:构建人白细胞介素18的真核表达载体pcDNA3．1(-)/HIL-18,转染人鼻咽癌细胞株SUNE;以转染的SUNE细胞和未转染的 SUNE细胞为靶细胞,以鼻咽癌患者外周血的 CD8+T细胞为效应细胞,混合培养 12h,用 LDH释放法测定 CD8+T细胞的细胞毒活性;用免疫组化法测定混合培养物中 CD8+T细胞上 Perforin、Fas－L、Granzyme B的表达。结果:所构建的真核表达载体在鼻咽癌细胞中能高效表达hIL-18;ELISA法测得转染阳性细胞培养上清液中hIL-18的含量为(85±10)pg/ml,而未转染的SUNE细胞的培养上清液中hIL-18的含量低于5pg/ml。将表达hIL－18的SUNE细胞与鼻咽癌患者外周血CD8+T细胞混合培养12h后,CD8+T细胞的细胞毒活性显著增强(P＜0．111),尤其是当效应细胞/靶细胞为10:1时,CD8+细胞对转染的SUNE细胞的裂解率高达46．7%,而CD8+T细胞对未转染的SUME细胞的裂解率仅为4．6%。免疫组化法表明,这种杀伤活性的增强与CD8+T细胞表达Perforin有关,而与Fas-L和Granzyme B途径无关。结论:hIL-18能显著增强鼻咽癌患者外周血口CD8+T细胞的体外杀伤活性,这种杀伤活性与 CDS8+细胞表达Perforin有关。

关键词：人白细胞介素18 基因转染基因表达 CD8^+T细胞细胞毒穿孔蛋白鼻咽癌

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水母毒素与水母蜇伤

中国海洋药物 2022年第2期41卷 85-94页

作者：李捷姜建芳王倩倩张黎明海军军医大学特色医学中心海洋生物医药与极地医学研究室上海200433 杭州市第三人民医院药学部浙江杭州310000

水母蜇伤是最常见的海洋生物伤,其发生率随着人们与海洋环境的密切接触不断上升。水母形态结构虽然简单,但其毒素组成复杂,可造成机体多个系统不同程度的损伤,因此水母蜇伤后临床症状较为复杂,目前尚没有基于毒素作用机制的特效抗毒药... 详细信息

水母蜇伤是最常见的海洋生物伤,其发生率随着人们与海洋环境的密切接触不断上升。水母形态结构虽然简单,但其毒素组成复杂,可造成机体多个系统不同程度的损伤,因此水母蜇伤后临床症状较为复杂,目前尚没有基于毒素作用机制的特效抗毒药物。从水母毒素、水母蜇伤症状以及蜇伤后综合治疗3个方面进行综述,着重阐述近年来水母毒素组分研究的新进展以及针对毒素组分的拮抗药物的研究动态。

关键词：水母蜇伤水母毒素综合治疗穿孔蛋白基质金属蛋白酶

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CTL细胞毒作用机制的研究进展

国外医学（免疫学分册） 1997年第4期20卷 203-206页

作者：宋建勋第三军医大学免疫学教研室

CTL对靶细胞产生细胞毒作用有两条彼此独立的途径，即穿孔蛋白途径和依赖Fas抗原分子介导的细胞凋亡（PCD）途径。CD8＋CTL主要以穿孔蛋白途径，同时Fas分子介导的PCD途径亦起作用；CD4＋CTL以哪条途径为主尚有争论；rδCTL主要以穿孔... 详细信息

CTL对靶细胞产生细胞毒作用有两条彼此独立的途径，即穿孔蛋白途径和依赖Fas抗原分子介导的细胞凋亡（PCD）途径。CD8＋CTL主要以穿孔蛋白途径，同时Fas分子介导的PCD途径亦起作用；CD4＋CTL以哪条途径为主尚有争论；rδCTL主要以穿孔蛋白途径为主发挥作用。

关键词： CTL 细胞毒穿孔蛋白作用机理