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兔骨髓间充质干细胞穴位移植对梗死区心肌细胞再生及其凋亡的影响

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兔骨髓间充质干细胞穴位移植对梗死区心肌细胞再生及其凋亡的影响

作者：李峥辽宁中医药大学

学位级别：硕士

目的:探讨兔骨髓间充质干细胞(MSCs)穴位移植对缺血心肌细胞的修复重建能力,并进一步研究MSCs穴位注射对梗死区心肌细胞凋亡的影响及凋亡调控蛋白Fas,FasL,Bcl-2表达的影响。方法:将已建立心肌梗死模型的日本大耳白兔随机分为3组,模型... 详细信息

目的:探讨兔骨髓间充质干细胞(MSCs)穴位移植对缺血心肌细胞的修复重建能力,并进一步研究MSCs穴位注射对梗死区心肌细胞凋亡的影响及凋亡调控蛋白Fas,FasL,Bcl-2表达的影响。方法:将已建立心肌梗死模型的日本大耳白兔随机分为3组,模型对照组、穴位注射干细胞组、穴位注射生理盐水组。用开胸结扎冠状动脉前降支的方法建立急性心肌梗死模型,1周后穴位注射干细胞组经穴位注射已经分离,培养,扩增、标记后的MSCs悬液,穴位注射生理盐水组经穴位注射等量的生理盐水。对梗死区进行Brdu免疫组化染色以观察穴位移植MSCs是否迁移至梗死区;对Brdu染色阳性的细胞复染心肌特异性肌钙蛋白T染色以观察迁移的细胞是否分化及分化的性质;采用脱氧核苷酸末端转移酶介导原位缺口标记(TUNEL法)确定细胞凋亡数,免疫组化SABC方法观察心肌细胞中Fas、FasL、Bcl-2的表达。结果:(1)穴位注射MSCs组梗死区组织免疫组化brdu染色阳性;梗死区组织cTnT染色阳性;(2)凋亡细胞的表达,模型对照组和穴位注射生理盐水组均高于正常对照组P穴位注射干细胞组低于模型对照组和穴位注射生理盐水组P穴位注射干细胞组和穴位注射生理盐水组均低于模型对照组P分别穴位注射生理盐水组明显高于穴位注射干细胞组P穴位注射生理盐水组均高于正常对照组P穴位注射干细胞组明显低于模型对照组P穴位注射生理盐水组明显高于穴位注射干细胞组P穴位注射生理盐水组均低于正常对照组P穴位注射干细胞组明显高于模型对照组和穴位注射生理盐水组P穴位移植,可迁移至梗死区,并可以在梗死区分化为心肌样细胞;穴位移植骨髓间充质干细胞可使梗死区心肌细胞凋亡数减少,其机制可能是通过Fas、FasL蛋白的减少、Bcl-2蛋白的增多来调节的。

关键词：骨髓间充质干细胞心肌梗死穴位移植细胞凋亡 Fas、FasL、Bcl-2

干细胞穴位移植诱导痴呆大鼠内源性神经干细胞增殖分化的实验研究

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干细胞穴位移植诱导痴呆大鼠内源性神经干细胞增殖分化的实验研究

作者：李容念湖南中医药大学

学位级别：硕士

目的:研究骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)风府穴穴位移植对痴呆大鼠海马区内源性神经干细胞增殖、分化的影响,为治疗阿尔茨海默病(Alzheimer`s disease,AD)探讨新的技术与方法。方法:SD大鼠50只,随机抽取1... 详细信息

目的:研究骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)风府穴穴位移植对痴呆大鼠海马区内源性神经干细胞增殖、分化的影响,为治疗阿尔茨海默病(Alzheimer`s disease,AD)探讨新的技术与方法。方法:SD大鼠50只,随机抽取10只作为正常对照组,剩余大鼠采用Aβ1-42寡聚体侧脑室灌注建立大鼠AD模型,然后再随机分为模型组、风府穴组、足三里穴组、尾静脉组,每组各10只。水迷宫检测造模成功后进行相应干预,风府穴组及足三里穴组分别以大鼠BMSCs穴位移植,尾静脉组移植等量BMSCs,模型组于风府穴注射等量的生理盐水,正常对照组作为空白对照。4周后,水迷宫实验检测大鼠的学习记忆能力,免疫荧光检测大鼠海马区nestin、β-tubulin-Ⅲ表达完成细胞计数。结果:1.水迷宫检测模型造模后AD模型大鼠逃避潜伏期(escape latency,EL),较正常对照组延长(p穴位移植后风府穴组、足三里组EL值均无明显缩短(p>0.05),穿越平台次数无明显增加(p>0.05),尾静脉组的EL值显著降低(p0.05);与尾静脉比较,风府穴组Nestin细胞数无明显差异(p>0.05)。3.2β-Tubulin-Ⅲ细胞计数结果与模型组比较,风府穴组、足三里组β-Tubulin-Ⅲ细胞数均无明显增加(p>0.05),而尾静脉组β-Tubulin-Ⅲ细胞数显著增加(p穴位移植能诱导AD大鼠海马区内源性神经干细胞增殖,但尚未证实能向神经细胞定向分化。

关键词：阿尔茨海默病骨髓间充质干细胞穴位移植动物实验

兔骨髓间充质干细胞穴位移植与静脉移植对梗死区类心肌细胞新生影响的比较

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辽宁中医杂志 2012年第8期39卷 1610-1611页

作者：张哲杨永菊陈强杨关林辽宁中医药大学附属医院辽宁沈阳110032

目的:探讨急性心肌梗死后0天与7天穴位与静脉分别注射骨髓间充质干细胞(MSCs)在梗死区分化为类心肌细胞的情况。方法:用开胸结扎冠状动脉前降支的方法建立急性心肌梗死模型,将已建立急性心肌梗死模型的日本大耳白兔随机分为5组,抽取健... 详细信息

目的:探讨急性心肌梗死后0天与7天穴位与静脉分别注射骨髓间充质干细胞(MSCs)在梗死区分化为类心肌细胞的情况。方法:用开胸结扎冠状动脉前降支的方法建立急性心肌梗死模型,将已建立急性心肌梗死模型的日本大耳白兔随机分为5组,抽取健康日本大耳白兔骨髓,分离培养MSCs并传代,于急性心肌梗死形成后0天与7天穴位及静脉注射干细胞。免疫组化brdu染色,取有brdu阳性细胞的切片进行免疫组化染色,显微镜下观察心肌特异性肌钙蛋白I染色。结果:模型对照组心肌梗死区未见brdu标记的MSCs;穴位注射干细胞0天组brdu阳性细胞的平均光密度值较静脉注射干细胞0天组增高趋势明显P穴位注射干细胞7天组brdu阳性细胞的平均光密度值较静脉注射干细胞7天组增高无明显差异P>0.05。结论:在0天穴位与静脉注射MSCs迁移至梗死区,在梗死区域内存活并分化为类心肌样细胞;在7天穴位与静脉注射MSCs迁移至梗死区,在梗死区域内分化为类心肌样细胞,穴位注射与静脉注射比较无明显差异。

关键词：骨髓间充质干细胞心肌梗死穴位移植静脉移植

穴位注射骨髓间充质干细胞后心肌梗死大鼠血管细胞黏附因子1及迟发抗原4的表达

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中国组织工程研究 2014年第45期18卷 7290-7293页

作者：陈岩杨关林白雪松张哲关雪峰隋吉峰辽宁省中医院辽宁省沈阳市110032

背景:目前认为骨髓间充质干细胞归巢是由黏附分子和趋化因子介导的,该过程有骨髓内皮细胞、造血干细胞、骨髓造血微环境及其分泌或表达的分子共同参与,黏附分子可能在其中起到重要作用。目的:以血管细胞黏附因子1和迟发抗原4为指标探讨... 详细信息

背景:目前认为骨髓间充质干细胞归巢是由黏附分子和趋化因子介导的,该过程有骨髓内皮细胞、造血干细胞、骨髓造血微环境及其分泌或表达的分子共同参与,黏附分子可能在其中起到重要作用。目的:以血管细胞黏附因子1和迟发抗原4为指标探讨穴位注射骨髓间充质干细胞向心肌迁移、趋化的机制。方法:贴壁法培养骨髓间充质干细胞,以第3代为种子细胞,调整细胞浓度为1×1010L-1。60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、心肌注射骨髓间充质干细胞组(以下简称心肌组),穴位注射骨髓间充质干细胞组(以下简称穴位组),每组15只。采用结扎左冠状动脉前降支方法复制心肌梗死模型,穴位组造模成功72 h后于心俞、至阳、膻中每穴位注入骨髓间充质干细胞0.3 m L,心肌组造模成功72 h后二次开胸,左前降支供血区域及周边心肌分6点均匀地移植骨髓间充质干细胞1.2 m L,4周后颈动脉插管,多道生理记录仪检测血流动力学指标,ELISA法检测血清血管细胞黏附因子1及迟发抗原4表达水平。结果与结论:心肌组、穴位组大鼠心功能得到改善,两组血清血管细胞黏附因子1及迟发抗原4较模型组升高,心肌组和穴位组比较差异无显著性意义。结果说明血管细胞黏附因子1/迟发抗原4轴可能是穴位注射干细胞趋化机制之一。

关键词：干细胞骨髓干细胞穴位移植心肌梗死血管细胞黏附因子1 迟发抗原4 vascular cel adhesion molecule-1

穴位注射骨髓间充质干细胞对急性心肌梗死模型大鼠血流动力学的影响

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中国中西医结合急救杂志 2013年第4期20卷 223-226页

作者：陈岩杨关林白雪松隋吉峰辽宁省中医院辽宁沈阳110032

目的探讨穴位注射骨髓间充质干细胞（BMSCs）对急性心肌梗死（AMI）模型大鼠血流动力学的影响。方法将60只SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、心肌注射BMSCs组（心肌注射组）、穴位注射BMSCs组（穴位注射组），每组15只。采用... 详细信息

目的探讨穴位注射骨髓间充质干细胞（BMSCs）对急性心肌梗死（AMI）模型大鼠血流动力学的影响。方法将60只SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、心肌注射BMSCs组（心肌注射组）、穴位注射BMSCs组（穴位注射组），每组15只。采用结扎左冠状动脉（冠脉）前降支（LAD）的方法复制AMI模型，制模成功72 h后，心肌注射组在LAD供血区域及周边心肌用微量注射器分6点分别均匀地移植BMSCs 0.2 ml（1×1010/L）；穴位注射组于心俞、至阳、膻中穴每穴位注入BMSCs 0.3 ml（1×1010/L）。4周后用多道生理记录仪测量血流动力学情况；同时处死大鼠取心脏，测量心脏质量指数（HMI）和左心室质量指数（LVMI）。结果假手术组死亡大鼠1只，模型组死亡3只，心肌注射组死亡5只，穴位注射组死亡4只。与假手术组比较，模型组左室收缩压（LVSP，mm Hg，1 mm Hg＝0.133 kPa）、左室压力上升最大速率（＋dp/dt max，mm Hg/s）、左室压力下降最大速率（-dp/dt max，mm Hg/s）、左室压力对数值变化速率〔（dp/dt）？P-1max，s-1〕、HMI（mg/g）、LVMI均明显降低，左室舒张期末压（LVEDP，mm Hg）、心率（HR，次/min）明显升高（均P＜0.05）；与模型组比较，心肌注射组、穴位注射组LVSP、＋dp/dt max、-dp/dt max、（dp/dt）？P-1max、HMI、LVMI均升高〔LVSP：130.38±14.96、124.36±14.36比114.36±12.71，＋dp/dt max：4707.52±394.36、4597.14±411.05比3791.43±327.29，-dp/dt max：4075.11±317.89、3938.05±373.76比3116.32±275.04，（dp/dt）？P-1max：215.26±21.29、197.39±18.96比155.93±25.14〕，LVEDP、HR明显降低（LVEDP：5.15±2.39、5.64±1.96比10.58±2.49，HR：400.50±42.58、395.55±44.62比414.51±35.75，均P＜0.05）；而心肌注射组和穴位注射组比较差异无统计学意义（均P＞0.05）。结论穴位注射BMSCs能够改善AMI模型动物的心功能。

关键词：骨髓间充质干细胞穴位移植心肌梗死血流动力学

兔骨髓间充质干细胞穴位与静脉移植对梗死区血管新生的实验研究

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兔骨髓间充质干细胞穴位与静脉移植对梗死区血管新生的实验研究

作者：杨永菊辽宁中医药大学

学位级别：硕士

目的:探讨兔异体骨髓间充质干细胞(MSCs)穴位移植与静脉注射两种移植途径对兔心肌梗死区血管新生的影响。材料与方法:以日本大耳白兔,用开胸结扎冠状动脉前降支的方法建立急性心肌梗死模型,将已建立心肌梗死模型的日本大耳白兔随机分为3... 详细信息

目的:探讨兔异体骨髓间充质干细胞(MSCs)穴位移植与静脉注射两种移植途径对兔心肌梗死区血管新生的影响。材料与方法:以日本大耳白兔,用开胸结扎冠状动脉前降支的方法建立急性心肌梗死模型,将已建立心肌梗死模型的日本大耳白兔随机分为3组,模型对照组、穴位注射干细胞组、静脉注射干细胞组。1周后穴位注射干细胞组经穴位(至阳、膻中、双侧心俞四穴)注射已经分离、培养、扩增、标记后的MSCs悬液1×l06细胞/穴,静脉注射干细胞组经兔耳缘静脉注射MSCs悬液2×l06细胞/静脉。5周后对梗死区进行Brdu免疫组化染色以观察穴位和静脉注射MSCs是否迁移至梗死区;对Brdu染色阳性的细胞复染心肌特异性肌钙蛋T染色以观察迁移的细胞是否分化及分化的性质;采用免疫组化法检测梗死的心肌组织血小板内皮细胞黏附因子-1(CD31),观察穴位及静脉注射的MSCs对梗死区毛细血管新生影响;免疫组化法检测碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),以明确穴位及静脉注射MSCs后梗死区毛细血管新生的机制;并观察3组兔死亡率。结果:1、穴位及静脉注射MSCs组梗死区组织免疫组化brdu染色阳性,梗死区组织cTnT染色阳性;而模型对照组未见Brdu染色阳性,cTnT染色阳性。2、免疫组化法检测梗死心肌组织中CD31平均光密度值,与正常组相比较,模型对照组、穴位注射干细胞组均降低,P0.05;与穴位注射干细胞组相比较,模型对照组降低,P穴位注射干细胞组均升高,P穴位注射干细胞组相比较,模型对照组降低,P穴位及静脉注射骨髓间充质干细胞,可迁移至梗死心肌组织中,并可以在梗死心肌组织中分化为类心肌样细胞。2、穴位注射骨髓间充质干细胞和静脉注射骨髓间充质干细胞可使梗死心肌组织中CD31表达上调,使梗死区中毛细血管新生。3、穴位注射骨髓间充质干细胞梗死心肌组织中毛细血管新生机制是穴位注射骨髓间充质干细胞刺激梗死心肌组织中bFGF表达上调。4、穴位注射骨髓间充质干细胞与静脉注射骨髓间充质干细胞对梗死区血管新生情况没有显著差异。

关键词：骨髓间充质干细胞心肌梗死穴位移植血管新生

心肌和穴位注射骨髓间充质干细胞治疗急性心肌梗死大鼠对比研究

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心肌和穴位注射骨髓间充质干细胞治疗急性心肌梗死大鼠对比研究

作者：刘晓佳辽宁中医药大学

学位级别：硕士

目的：探讨于心肌内注射骨髓间充质干细胞以及通过穴位注射骨髓间充质干细胞这两种移植途径对急性心肌梗死大鼠治疗的对比实验研究，寻求一条治疗急性心肌梗死的新兴、有效的治疗方法。材料与方法：1.实验材料及分组：1.1实验动物：选... 详细信息

目的：探讨于心肌内注射骨髓间充质干细胞以及通过穴位注射骨髓间充质干细胞这两种移植途径对急性心肌梗死大鼠治疗的对比实验研究，寻求一条治疗急性心肌梗死的新兴、有效的治疗方法。材料与方法：1.实验材料及分组：1.1实验动物：选取60只SD大鼠1.2分组：将60只大鼠进行随机分组，分为四个小组，分为假手术组、模型组、心肌内注射干细胞组以及穴位注射干细胞组。1.3造模方法：本实验采用通过对于冠状动脉进行结扎的方法复制急性心肌梗死的模型，结扎大鼠的左冠状动脉前降支，观察心电图：使Ⅱ导联ST段弓背向上抬高，具体方法为：在胸骨左缘第3肋间0.5cm处用剪刀纵向剪开长约1.5cm左右的皮肤组织，用血管钳将肋间外肌和小血管夹断，小弯镊从第3肋两侧肋间隙穿过双股的结扎线，将结扎线两侧钝性分离开，肋间肌并于第3肋骨两端结扎肋间动脉，两侧结扎线的中间剪断第3肋骨向右轻拉扩大视野，将胸膜及心包打开，分离开胸腺组织，在左心耳与肺动脉圆锥之间，找到行于心肌内与心大静脉走向一致的左冠状动脉前降支（LAD）用无创缝合针于左心耳根部下方2mm处穿过心肌表层，在肺动脉圆锥旁出针，观察心电图，待其恢复稳定15min后，在心脏表面进行结扎，待心脏表面相应区域颜色变暗表明心脏缺血造模成功。2.移植途径：2.1穴位注射干细胞组：在急性心肌梗死大鼠造模成功以后，经过72小时，经双侧心俞、至阳、膻中等四个穴位，在每个穴位内注入骨髓间充质干细胞0.3ml。2.2心肌注射干细胞组:在急性心肌梗死大鼠造模成功以后，经过72小时，进行第二次开胸手术，在直视下于冠状动脉左前降支血管供血区域以及其周边区域对照找出六个点，用微量注射器进行均匀地移植1×1010/L骨髓间充质干细胞1.2mL，在心肌局部呈丘样隆起时，则表示移植干细胞成功。3.观察指标：3.1观察大鼠的心脏功能：测量左心室舒张末期直径(LVEDD)、左心室收缩末期直径(LVESD)、左室短轴缩短率(FS)和射血分数(EF)，取连续3个心动周期的平均值以及抽血行BNP检测以了解大鼠心功能情况。3.2观察大鼠的血流动力学变化：通过左室压峰值(LVSP)、左室舒张末期压(LVEDP)、左室等容期压力最大变化速率(dp/dt)、曲线左室压力对数值变化速率{(dp/dt)·P-1}、血压(BP)、心率(HR)以及计算心脏质量指数(heart mass index，HMI;HMI=心脏重量/体重)、左心室质量指数(left ventricular mass index，LVMI;LVMI=左心室重量/心脏重量)的检测回报来观察大鼠的血流动力学变化情况。3.3观察大鼠室性心律失常情况：干细胞注射后的7d、14d、28d行心电图检查，观察各组动物之间频发室早(＞5次/分)，成对室早或短阵性室速(＞10次/分)，多源性室早或落在前一心搏的易损期(R波在T波上)的出现情况，监测时间为8h。3.4大鼠的安全性指标：通过抽血对于包括大鼠血常规、血清蛋白、血清酶谱、血清胆红素、血清肌酐及尿素氮等指标的检查作为了解移植骨髓间充质干细胞的安全性指标。结果：1.心功能测定结果表明，心肌内注射干细胞组和穴位注射干细胞组移植成功以后，两者测定值均表现出改善的趋势，进行各组间血浆BNP的水平以及左心室舒张末期直径(LVEDD)、左心室收缩末期直径(LVESD)、左室短轴缩短率(FS)和射血分数(EF)的测定，两组治疗组与模型组进行比较P穴位注射干细胞两组间比较P>0.05，无统计学意义。2.血流动力学的检测结果表明，通过LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax、LVEDP、HP、SAP、MAP、DAP、HR以及HMI、LVMI的测定值，两组治疗组与模型组进行比较P穴位注射干细胞两组间比较P>0.05，无统计学意义。3.骨髓间充质干细胞移植治疗组与模型组的室性心律失常的发生率比较P>0.05,无统计学意义。4.各组实验大鼠间血液常规、血清蛋白、血清酶学、血清胆红素、血清肌酐及尿素氮等统计回报结果比较P>0.05，无明显统计学意义。5.对于以上各项指标的测定回报研究，心肌注射骨髓间充质干细胞与穴位注射骨髓间充质干细胞两组移植途径对于急性心肌梗死大鼠的治疗比较，两组间无明显差异。结论：1.心肌注射与穴位注射骨髓间充质干细胞对于急性心肌梗死大鼠心功能的监测具有改善作用，两组间无明显差异。2.心肌注射与穴位注射骨髓间充质干细胞对于急性心肌梗死的血流动力学各项指标的具有改善作用，影响两组间无明显差异。

关键词：骨髓间充质干细胞穴位移植心肌注射心肌梗死心功能

穴位注射骨髓间充质干细胞对心肌梗死模型大鼠基质衍生因子-1α及其受体的影响

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中华中医药学刊 2012年第12期30卷 2684-2686页

作者：陈岩杨关林白雪松张哲关雪峰隋吉峰辽宁省中医院辽宁沈阳110032

目的:探讨穴位注射骨髓间充质干细胞对心肌梗死模型大鼠血清基质衍生因子-1α及其受体CX-CR4影响。方法:60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、心肌注射干细胞组、穴位注射干细胞组,采用结扎左冠状动脉前降支方法复制心肌梗死模型,穴位... 详细信息

目的:探讨穴位注射骨髓间充质干细胞对心肌梗死模型大鼠血清基质衍生因子-1α及其受体CX-CR4影响。方法:60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、心肌注射干细胞组、穴位注射干细胞组,采用结扎左冠状动脉前降支方法复制心肌梗死模型,穴位注射干细胞组造模成功72h后心俞、至阳、膻中每穴位注入骨髓间充质干细胞0.3mL(1×1010/L),4周后取血,ELISA法检测血清基质衍生因子-1α及其受体CXCR4表达水平。结果:心肌注射干细胞组和穴位注射干细胞组血清基质衍生因子-1α及其受体CXCR4较模型组升高,两者之间无统计学差异。结论:基质衍生因子-1α/CXCR4轴可能是穴位注射干细胞趋化机制。

关键词：骨髓间充质干细胞穴位移植心肌梗死基质衍生因子-1α CXCR4

穴位注射骨髓间充质干细胞对心肌梗死模型大鼠室性心律失常影响

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辽宁中医药大学学报 2012年第12期14卷 10-12页

作者：陈岩杨关林白雪松张哲隋吉峰辽宁省中医院辽宁沈阳110032

目的:探讨穴位注射骨髓间充质干细胞对心肌梗死模型大鼠室性心律失常的影响。方法:60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、心肌注射干细胞组、穴位注射干细胞组,采用结扎左冠状动脉前降支方法复制心肌梗死模型,穴位注射干细胞组造模成功... 详细信息

目的:探讨穴位注射骨髓间充质干细胞对心肌梗死模型大鼠室性心律失常的影响。方法:60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、心肌注射干细胞组、穴位注射干细胞组,采用结扎左冠状动脉前降支方法复制心肌梗死模型,穴位注射干细胞组造模成功72h后心俞、至阳、膻中每穴位注入骨髓间充质干细胞0.3mL(1×1010/L),7、14、28天后监测心电图。结果:心肌注射干细胞组、穴位注射干细胞组室性心律失常与模型组比较,差异无统计学意义。结论:穴位注射干细胞未增加室性心律失常的危险。

关键词：骨髓间充质干细胞穴位移植心肌梗死室性心律失常