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REV感染对SPF雏鸡胸腺细胞增殖和细胞周期及周期素D1的影响

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中国兽医科学 2020年第5期50卷 643-649页

作者：吴乐高海婷刘超男高雪丽张淑君周放吕晓萍边洋郑世民东北农业大学动物医学学院黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室黑龙江哈尔滨150030

为了探索禽网状内皮组织增生病病毒(REV)感染SPF雏鸡后,对其胸腺细胞增殖、细胞周期分布以及Cyclin D1的影响,将66只1日龄SPF雏鸡随机分为REV感染组和对照组,使用Cell counting Kit-8、流式细胞术、Western-blot、荧光定量PCR等方法对... 详细信息

为了探索禽网状内皮组织增生病病毒(REV)感染SPF雏鸡后,对其胸腺细胞增殖、细胞周期分布以及Cyclin D1的影响,将66只1日龄SPF雏鸡随机分为REV感染组和对照组,使用Cell counting Kit-8、流式细胞术、Western-blot、荧光定量PCR等方法对雏鸡胸腺细胞增殖、细胞周期及Cyclin D1 mRNA和蛋白的动态变化进行检测。结果发现,REV感染SPF雏鸡后,其胸腺细胞的增殖能力于第14、21、28天明显低于对照雏鸡;G0/G1期细胞数于第14天较对照雏鸡明显(P<0.05)升高,S、G2/M期细胞数量减少,第28天时相反;Cyclin D1 mRNA表达于第14天极显著(P<0.01)低于对照雏鸡,第35天时极显著高于(P<0.01)对照雏鸡;Cyclin D1蛋白量显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)低于对照雏鸡。结果表明,感染REV后,雏鸡免疫机能下降可能与胸腺细胞增殖能力下降、细胞周期素D1 mRNA转录及蛋白质水平的异常表达相关。

关键词： SPF雏鸡禽网状内皮组织增生病病毒胸腺细胞细胞周期细胞周期素D1

REV对SPF雏鸡细胞凋亡相关miRNA及其靶基因表达的影响

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中国家禽 2018年第18期40卷 13-19页

作者：于志强刘汉伟孙运陈小青马中春郑世民东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 宁波检验检疫科学技术研究院浙江宁波315012

为探究禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)对SPF雏鸡细胞凋亡相关信号通路的影响,通过REV感染1日龄雏鸡后,对其临床症状、大体病理学变化进行观察,并应用高通量测序及实时荧光定量PCR方法,检测并验证其法氏囊... 详细信息

为探究禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)对SPF雏鸡细胞凋亡相关信号通路的影响,通过REV感染1日龄雏鸡后,对其临床症状、大体病理学变化进行观察,并应用高通量测序及实时荧光定量PCR方法,检测并验证其法氏囊中与细胞凋亡信号通路相关的miRNA及其靶基因表达情况。结果显示:SPF雏鸡感染REV后第21天法氏囊萎缩最显著,法氏囊中gga-mir-18a-5p、gga-mir-155和gga-mir-222b-5p表达量显著下调,其靶基因分别为Caspase-6、Caspase-7和p27,上述靶基因表达量显著上调;同时还发现gga-mir-29b-3p表达量上调,其靶基因Mcl-1表达量下调。证明REV通过下调gga-mir-18a-5p、gga-mir-155和gga-mir-222b-5p以及上调gga-mir-29b-3p的表达量,来降低或增加对其靶基因的抑制,从而使促凋亡因子Caspase-6、Caspase-7和p27的表达量显著增加,同时抑凋亡因子Mcl-1表达量显著减少来促进细胞凋亡的发生。研究结果为REV致病机理的相关研究提供了理论依据。

关键词：禽网状内皮组织增生病病毒 SPF鸡细胞凋亡

REV感染对SPF雏鸡外周血液B淋巴细胞功能和免疫球蛋白含量的影响

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黑龙江畜牧兽医 2021年第18期 69-73页

作者：崔新华边洋高海婷高雪丽刘超男吕晓萍郑世民东北农业大学动物医学学院黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150030

为了探索禽网状内皮组织增生病病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)感染对SPF雏鸡外周血液B淋巴细胞功能和免疫球蛋白含量变化的影响,试验将100只1日龄SPF雏鸡随机分为REV感染组和对照组,REV感染组(50只)雏鸡通过腹腔注射REV稀释液(0... 详细信息

为了探索禽网状内皮组织增生病病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)感染对SPF雏鸡外周血液B淋巴细胞功能和免疫球蛋白含量变化的影响,试验将100只1日龄SPF雏鸡随机分为REV感染组和对照组,REV感染组(50只)雏鸡通过腹腔注射REV稀释液(0.5 mL/只),对照组(50只)雏鸡相同途径给予等量灭菌生理盐水,于REV感染后第1,7,14,21,28,42天,每组随机抽取5只,心脏无菌采血,应用细胞培养技术结合MTT和免疫学等检测方法,检测REV感染对SPF雏鸡外周血液B淋巴细胞增殖能力和IgG、IgA、IgM含量的影响。结果表明:SPF雏鸡感染REV后1~42 d,外周血液中无论是B淋巴细胞对脂多糖(LPS)的增殖能力还是血清IgG、IgA、IgM含量均不同程度低于对照组雏鸡,其中REV感染组B淋巴细胞对LPS的增殖能力在REV感染后第7,14天显著或极显著低于对照组雏鸡(P<0.05或P<0.01);IgG含量在REV感染后第14,28天显著低于对照组雏鸡(P<0.05);IgA含量在REV感染后第21,28,42天显著或极显著低于对照组(P<0.05或P<0.01);IgM含量在REV感染后第42天极显著低于对照组(P<0.01)。说明REV感染可导致SPF雏鸡外周血液的B淋巴细胞功能下降和免疫球蛋白IgG、IgA、IgM含量下降。

关键词：禽网状内皮组织增生病病毒 SPF雏鸡外周血液 B淋巴细胞增殖能力免疫球蛋白

SPF雏鸡感染REV引起脾脏氧化-抗氧化的平衡紊乱

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动物医学进展 2020年第8期41卷 132-136页

作者：卢静刘雪洁邹连慧郑世民刘超男吕晓萍高雪丽东北农业大学动物医学学院黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室黑龙江哈尔滨150030

为探究氧化-抗氧化平衡紊乱在禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)致病机制中的作用,对感染REV后3、7、14、21、28和35 d的SPF雏鸡脾脏进行过氧化氢(H2O2)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、总抗氧化能力(tota... 详细信息

为探究氧化-抗氧化平衡紊乱在禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)致病机制中的作用,对感染REV后3、7、14、21、28和35 d的SPF雏鸡脾脏进行过氧化氢(H2O2)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、总抗氧化能力(total-antioxidante capacity,T-AOC)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力、过氧化氢酶(catalase,CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶1(glutathione peroxidase 1,GPx1)蛋白含量及mRNA表达、脾脏器官指数的检测。结果显示,SPF雏鸡感染REV后,脾脏H2O2、MDA含量显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01),T-AOC、抗氧化酶等抗氧化指标及器官指数分别于不同时间不同程度显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01),表明SPF雏鸡感染REV后,脾脏发生氧化应激,抗氧化功能和免疫功能下降,氧化-抗氧化平衡紊乱可在REV致病机制中发挥作用。

关键词：禽网状内皮组织增生病病毒脾脏氧化-抗氧化 SPF雏鸡

整合进禽反转录病毒基因组片段的鸡马立克氏病病毒重组野毒株的发现

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中国科学（C辑） 2004年第4期34卷 317-324页

作者：张志崔治中山东农业大学动物科技学院泰安271018

用对禽网状内皮组织增生病病毒(REV)的单抗从广东和广西分离到的二株马立克氏病病毒(MDV)野毒株做间接荧光抗体试验,用MDV感染细胞的基因组DNA做斑点分子杂交及PCR显示,这二株MDV基因组中已整合进REV的LTR序列.根据:MDV基因组上易插入RE... 详细信息

用对禽网状内皮组织增生病病毒(REV)的单抗从广东和广西分离到的二株马立克氏病病毒(MDV)野毒株做间接荧光抗体试验,用MDV感染细胞的基因组DNA做斑点分子杂交及PCR显示,这二株MDV基因组中已整合进REV的LTR序列.根据:MDV基因组上易插入REV的LTR的高频位点的序列合成7条引物,根据REV的LTR合成4条引物,由此交叉组成28对引物,分别从这二个MDV野毒株扩增和克隆已整合进MDV的REV-LTR序列及其相连的。MDV序列.测序证明,二株中的REV-LTR插入序列及在MDV基因组中短独特序列(US)上的插入位点完全相同.表明这二个毒株很可能是一次重组事件在鸡群中形成的流行毒株.

关键词：禽网状内皮组织增生病病毒马立克氏病病毒病毒重组鸡胚成纤维细胞

SPF雏鸡感染REV后免疫器官氧化—抗氧化功能的变化

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SPF雏鸡感染REV后免疫器官氧化—抗氧化功能的变化

作者：张美曦东北农业大学

学位级别：硕士

禽网状内皮组织增生病(Reticuloendotheliosis,RE)是由禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)引起的免疫抑制性肿瘤病,该病严重危害养禽业的发展。本试验以1日龄SPF雏鸡为研究对象,应用间接ELISA及实时荧光定量PC... 详细信息

禽网状内皮组织增生病(Reticuloendotheliosis,RE)是由禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)引起的免疫抑制性肿瘤病,该病严重危害养禽业的发展。本试验以1日龄SPF雏鸡为研究对象,应用间接ELISA及实时荧光定量PCR方法检测了REV感染雏鸡免疫器官(胸腺、脾脏、法氏囊)过氧化氢(H2O2)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量,总抗氧化能力(Total-antioxidante capacity,T-AOC),超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活力,过氧化氢酶(Catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶1(Glutathione peroxidase 1,GPx1)含量及其mRNA表达的动态变化,旨在从病毒感染后氧化-抗氧化功能变化的角度阐述REV致病机制,为RE的防治提供科学依据。试验结果发现:(1)感染REV后,SPF雏鸡免疫器官H2O2、MDA含量不同程度高于对照雏鸡。其中,胸腺、脾脏、法氏囊H2O2含量分别于感染后第35 d、第28 d、第21 d显著高于对照雏鸡(P<0.05);MDA含量分别于感染后第28 d、7 d-28 d、第21 d显著或极显著高于对照雏鸡(P<0.05或P<0.01)。表明REV感染可导致SPF雏鸡免疫器官氧化物质增多,脂质过氧化反应增强,机体处于氧化应激。(2)感染REV后,SPF雏鸡免疫器官T-AOC、SOD活力不同程度低于对照雏鸡。其中,胸腺、脾脏、法氏囊T-AOC分别于感染后21 d-35 d、28 d-35 d、第35 d显著或极显著低于对照雏鸡(P<0.05或P<0.01);SOD活力分别于感染后14 d-28 d、14 d-21 d、21 d-35 d显著或极显著低于对照雏鸡(P<0.05或P<0.01)。表明REV感染可使SPF雏鸡免疫器官抗氧化功能显著降低。(3)感染REV后,SPF雏鸡免疫器官CAT、GPx1含量及基因表达水平不同程度低于对照雏鸡。其中,胸腺、脾脏、法氏囊CAT含量分别于感染后14 d-28 d、28 d-35 d、第21 d显著或极显著低于对照雏鸡(P<0.05或P<0.01);胸腺、脾脏、法氏囊GPx1含量分别于感染后第28 d、14 d-21 d、第14 d显著或极显著低于对照雏鸡(P<0.05或P<0.01);胸腺、脾脏CAT mRNA含量分别于感染后21 d-28 d显著或极显著低于对照雏鸡(P<0.05或P<0.01);胸腺、脾脏、法氏囊GPx1 mRNA含量分别于感染后28 d-35 d、第35 d、第28 d显著低于对照雏鸡(P<0.05)。表明REV感染可导致免疫器官CAT、GPx1基因及蛋白表达下降,清除过氧化物能力降低,机体抗氧化酶含量减少,抗氧化功能减弱。(4)感染REV后,SPF雏鸡胸腺、脾脏、法氏囊器官指数于28 d-35 d显著或极显著低于对照雏鸡(P<0.05或P<0.01)。表明REV感染可使免疫器官器官指数下降,免疫器官萎缩,机体发生免疫抑制。

关键词：禽网状内皮组织增生病病毒 SPF雏鸡氧化抗氧化

Skp2对REV感染SPF CEFs细胞周期的调控及其机制

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Skp2对REV感染SPF CEFs细胞周期的调控及其机制

作者：吴乐东北农业大学

学位级别：硕士

禽网状内皮组织增生病(RE)是由禽网状内皮组织增生病病毒(REV)感染引起的以免疫抑制为主的禽类肿瘤性疾病,普遍存在于国内外养殖业,该病的大规模流行给家禽养殖业造成较大损失。由于目前对该病的研究较为局限,尤其对其肿瘤发生机制的研... 详细信息

禽网状内皮组织增生病(RE)是由禽网状内皮组织增生病病毒(REV)感染引起的以免疫抑制为主的禽类肿瘤性疾病,普遍存在于国内外养殖业,该病的大规模流行给家禽养殖业造成较大损失。由于目前对该病的研究较为局限,尤其对其肿瘤发生机制的研究不够全面,为了有效降低RE对养殖业的危害,迫切需要了解其发病的详细机制。S期激酶相关蛋白2(Skp2)作为泛素连接酶复合物(SCF)的识别底物,与细胞的异常增殖密切相关,在肿瘤研究中引起广泛关注。作为当前医学界、生物学界,尤其是动物医学界研究热点之一,纵观国内外对Skp2基因已有的相关研究报道,其主要在哺乳动物中,特别是在人类某些疾病中的研究较为深入,而关于禽类Skp2基因与REV造成的细胞周期异常的关系,迄今未见报道。本研究在成功构建了短发卡RNA(sh RNA)介导Skp2沉默质粒载体,并转染至REV感染的SPF鸡胚成纤维细胞(CEFs)中的基础上,进一步在转录和蛋白水平上分别应用RT-PCR和Western Blot技术较系统的研究了REV感染SPF CEFs后,其Skp2,p27,Cyclin D1 mRNA表达和蛋白含量的变化;应用流式细胞术结合PI单染方法对REV感染SPF CEFs细胞周期的变化进行了检测;使用CCK-8 Kit检测试剂盒对REV感染SPF CEFs的细胞增殖活力做了较全面系统的研究。这项研究有助于进一步了解由REV造成的细胞周期异常机制,为RE的综合防治(制)寻找新的分子靶点,主要研究结果如下:(1)本研究成功建立了鸡Skp2基因实时荧光定量PCR检测方法,该方法最优反应体系20.0μL:包含Real-time PCR Master mix(2×)10.0μL,上、下游引物(10μmol/L)各1.0μL,c DNA 2.0μL,dd HO 6.0μL;最佳反应条件为95℃预变性10 s,95℃变性5 s,60℃退火/延伸34s,30个循环。(2)SPF CEFs感染REV后6h、12h、24h、48h、72h、96h和120h,其Skp2 mRNA表达量均不同程度高于病毒未感染的对照组,其中24h、48h和72h极显著(P0.05)。(4)在成功构建的shRNA-908、sh RNA-358、sh RNA-225和sh RNA-141四个Skp2表达抑制质粒中,sh RNA-358和sh RNA-141对Skp2的抑制作用在转染后24h、48h及72h极显著(P0.05)变化。转染质粒sh RNA-NC作用于CEFs后,上述被检指标的mRNA表达量均未见统计学差异(P>0.05)。(6)与空白对照组相比,REV感染SPF CEFs后,其Skp2和Cyclin D1蛋白表达量均显著(P0.05)。(7)CEFs感染REV后,其G0/G1期细胞数较对照组极显著(P0.05);与REV感染组相比,V-sh RNA-358组和V-sh RNA-141组G0/G1期细胞数较对照组极显著(P0.05);而V-sh RNA-NC组各期细胞数均无显著变化(P>0.05)。上述研究结果为进一步阐明REV感染对CEF细胞增殖和周期的影响以及Skp2在其中所扮演的角色提供了重要的科学实验依据。也为进一步在分子调节水平上探讨REV的免疫致病机制提供了新思路。

关键词：禽网状内皮组织增生病病毒 SPF鸡胚成纤维细胞 S期激酶相关蛋白2 细胞周期素D1 p27

REV感染对SPF雏鸡外周血液T淋巴细胞亚型及其相关细胞因子含量的影响

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REV感染对SPF雏鸡外周血液T淋巴细胞亚型及其相关细胞因子含量的...

作者：葛依阳东北农业大学

学位级别：硕士

禽网状内皮组织增生病病毒(REV)可导致被感染禽类产生严重的免疫抑制,给世界各国家禽养殖业带来了极大经济损失。血液是病毒在机体内到达其靶器官的重要途径,外周血中淋巴细胞的数量虽然较少,但在机体抗病毒感染机制中,T淋巴细胞的作用... 详细信息

禽网状内皮组织增生病病毒(REV)可导致被感染禽类产生严重的免疫抑制,给世界各国家禽养殖业带来了极大经济损失。血液是病毒在机体内到达其靶器官的重要途径,外周血中淋巴细胞的数量虽然较少,但在机体抗病毒感染机制中,T淋巴细胞的作用无可替代。本研究以1日龄SPF雏鸡为研究对象,通过类比方式,于REV感染SPF雏鸡后第1、3、7、14和21天经心脏采血取样,分离血清和淋巴细胞,采用流式细胞检测技术和免疫学检测方法,分别对REV感染SPF雏鸡后,其外周血液的T淋巴细胞亚型(包括:CD、CDT淋巴细胞数量及其比值),血清中IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-10和IL-12含量的动态变化进行了检测。旨在通过本项研究阐明SPF雏鸡在感染REV后,其血液免疫相关变化情况,为防治REV提供理论依据。研究主要结果如下:(1)REV感染1日龄SPF雏鸡后,其外周血液中CDT淋巴细胞数量于病毒感染后11天显著(P病毒感染后第1、3、14、21天显著(P病毒感染后第3天显著(P0.05)。表明REV感染可降低雏鸡外周血液CD和CDT淋巴细胞亚型数量及两者的比例,进而导致病毒感染雏鸡免疫功能低下。(2)REV感染1日龄SPF雏鸡后第3和第14天,其血清中IFN-γ含量极显著(P病毒感染后第3天极显著(P病毒感染后14天明显较对照雏鸡降低(P病毒感染后第3天极显著(P0.05)。表明REV感染可抑制SPF雏鸡外周血液致炎因子的生物合成及释放。(3)REV感染1日龄SPF雏鸡后第3和第7天,其血清中IL-4含量极显著(P0.05)。表明REV感染不但可抑制致炎因子的生物合成和释放,而且对抑炎因子也具有一定的促进作用。(4)REV感染1日龄SPF雏鸡后第3和第14天,其外周血中Th1/Th2值较相应对照雏鸡明显(P<0.05或P<0.01)减小,但在第7天显著高于对照雏鸡(P<0.05)。表明REV感染会导致SPF雏鸡外周血免疫类型向体液免疫漂移。通过检测上述各项指标,本研究较全面地阐明了SPF雏鸡在感染REV后,其外周血中T淋巴细胞亚型数量及其相关细胞因子含量的变化,揭示了REV对SPF雏鸡外周血中T淋巴细胞免疫功能的影响,为RE的免疫防治提供了新的思路。

关键词：禽网状内皮组织增生病病毒 SPF雏鸡外周血T淋巴细胞亚型细胞因子

REV感染对雏鸡血液主要类型细胞及CyclinD1、p27 mRNA表达的影响

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REV感染对雏鸡血液主要类型细胞及CyclinD1、p27 mRNA表达的影响

作者：刘文超东北农业大学

学位级别：硕士

禽网状内皮组织增生病(reticuloendotheliosis,RE)是由禽网状内皮组织增生病病毒(retieuloendotheliosis virus,REV)引起的以免疫抑制为主的肿瘤性疾病。本试验以1日龄SPF雏鸡为研究对象,通过瑞氏染色法、酯酶染色法、MTT法、ELISA、荧... 详细信息

禽网状内皮组织增生病(reticuloendotheliosis,RE)是由禽网状内皮组织增生病病毒(retieuloendotheliosis virus,REV)引起的以免疫抑制为主的肿瘤性疾病。本试验以1日龄SPF雏鸡为研究对象,通过瑞氏染色法、酯酶染色法、MTT法、ELISA、荧光定量PCR技术,较全面系统的检测了雏鸡外周血白细胞,异嗜性粒细胞数量、T淋巴细胞及其对Con A的增殖功能、B淋巴细胞及其对LPS的增殖功能、免疫球蛋白(Ig G、IgA、Ig M)含量及Cyclin D1和p27 mRNA表达的动态变化,旨在进一步揭示REV感染SPF雏鸡后,其对机体外周血免疫能力与Cyclin D1和p27 mRNA表达变化的影响,为更好地防治RE提供重要的科学依据。主要研究结果如下:(1)1日龄SPF雏鸡感染REV后,其外周血白细胞总数、异嗜性粒细胞、T淋巴细胞数量及其对Con A的增殖功能在REV感染后12天,均不同程度低于相应对照雏鸡;其中,异嗜性细胞和TANAE+细胞数量均在病毒感染后142天,极显著(P病毒感染后141d和42d,与对照雏鸡相比显著下降(P病毒感染后72d,均高于相应对照雏鸡,其中Cycling D1 mRNA表达极显著(P<0.01)高于相应对照组;表明Cyclin D1与p27 m RNA过表达和REV所致的细胞增殖密切相关。

关键词：禽网状内皮组织增生病病毒 SPF雏鸡外周血液 Cyclin D1 mRNA p27 mRNA