检索结果-南通市图书馆

禽网状内皮组织增生病病毒感染SPF雏鸡血液淋巴细胞增殖功能及其细胞周期相关因子变化

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

畜牧兽医学报 2018年第1期49卷 157-163页

作者：王晓燕刘文超付礼胜高雪丽刘超男吕晓萍郑世民东北农业大学动物医学学院黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150030

为探索禽网状内皮组织增生病病毒(REV)感染对SPF雏鸡外周血液的淋巴细胞增殖功能及其细胞周期素D1、p27表达的影响。将80只1日龄SPF雏鸡随机分为REV感染组和对照组,应用CCK-8、RT-qPCR、Western Blot等方法对雏鸡外周血液上述被检指标... 详细信息

为探索禽网状内皮组织增生病病毒(REV)感染对SPF雏鸡外周血液的淋巴细胞增殖功能及其细胞周期素D1、p27表达的影响。将80只1日龄SPF雏鸡随机分为REV感染组和对照组,应用CCK-8、RT-qPCR、Western Blot等方法对雏鸡外周血液上述被检指标的动态变化进行检测。结果表明,REV感染SPF雏鸡后,其外周血液中T、B淋巴细胞增殖能力明显低于对照组雏鸡,且p27mRNA水平显著(P病毒感染后期Cyclin D1mRNA表达及其蛋白质含量均显著高于(P<0.05)对照组雏鸡,然而p27转录显著低于对照组雏鸡(P<0.05)。REV感染SPF雏鸡导致的血液T、B细胞增殖能力下降、Cyclin D1mRNA转录及其蛋白质含量的增加而p27mRNA转录下降与REV感染所致的雏鸡免疫机能下降密切相关。

关键词： SPF雏鸡禽网状内皮组织增生病病毒细胞周期素D1 淋巴细胞增殖能力外周血液

禽网状内皮组织增生病病毒env蛋白在毕赤酵母中的表达及其免疫原性研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国预防兽医学报 2018年第12期40卷 1147-1151页

作者：杨彦超王静李凯祁小乐崔红玉高玉龙刘长军高宏雷王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为评价禽网状内皮组织增生病病毒(REV) env蛋白的免疫原性,本研究将env基因克隆至毕赤酵母表达载体pAO815,构建了含有两个env表达盒(已突变env基因中BglⅡ和Bam HⅠ酶切位点)的重组表达质粒pAO815-2env,并电转至毕赤酵母宿主菌GS115,构... 详细信息

为评价禽网状内皮组织增生病病毒(REV) env蛋白的免疫原性,本研究将env基因克隆至毕赤酵母表达载体pAO815,构建了含有两个env表达盒(已突变env基因中BglⅡ和Bam HⅠ酶切位点)的重组表达质粒pAO815-2env,并电转至毕赤酵母宿主菌GS115,构建重组酵母菌株pAO815-2env/GS115,经发酵培养得到的env蛋白(蛋白含量达到4.8 g/L)经亲和层析纯化后免疫SPF鸡,利用ELISA试剂盒和中和试验检测血清中的REV抗体。结果显示,重组酵母菌株表达的env蛋白,不仅能够诱导SPF鸡产生抗REV抗体,还能诱导其产生中和抗体,且产生的中和抗体效价较高,具有良好的免疫原性。本研究为开展禽网状内皮组织增生病亚单位疫苗的研制提供了实验依据。

关键词：禽网状内皮组织增生病病毒 env基因毕赤酵母发酵

禽网状内皮组织增生病病毒诱导宿主天然免疫反应及感染法氏囊转录组学的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

禽网状内皮组织增生病病毒诱导宿主天然免疫反应及感染法氏囊转录...

作者：孔正茹扬州大学

学位级别：硕士

禽网状内皮组织增生病(Reticuloendotheliosis,RE)是由反转录科禽类C型反转录病毒禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)引起的禽类重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。临床中REV感染引起的免疫抑制给养禽业带来重大... 详细信息

禽网状内皮组织增生病(Reticuloendotheliosis,RE)是由反转录科禽类C型反转录病毒禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)引起的禽类重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。临床中REV感染引起的免疫抑制给养禽业带来重大的损失。近年来,REV的感染流行大多呈现与马立克病病毒(Marek’s disease virus,MDV)和J亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup J,ALV-J)等免疫抑制性病毒混合感染,这使得疫病的诊断和防控难度加大。因此该疾病的防控对养禽业的健康发展和生物制品质量的提高具有重要影响。目前,关于REV感染宿主引起的宿主免疫反应机制,以及病毒的致病机理尚不清楚。本研究以REV HA1101病毒株感染鸡外周血淋巴细胞和人工接种SPF鸡为研究对象,通过荧光定量PCR、转录组学和生物信息学等研究方法,初步探讨了病毒感染过程中可能发挥作用的细胞因子及相关信号通路,为进一步了解REV感染宿主后引起的免疫抑制和致病机理提供重要的线索。一、REV感染外周血淋巴细胞对天然免疫相关基因转录的影响为了明确REV感染对鸡外周血淋巴细胞中天然免疫应答的影响,利用荧光定量PCR方法检测REV感染SPF鸡外周血淋巴细胞后天然免疫相关基因表达情况,包括Toll样受体(TLR3、TLR4、TLR7、TLR15 和 TLR21)、信号通路相关细胞因子(IRF7、MDA5、MyD88、MDA5、NF-κB、IRAK4、TRAF6、TRIF 和 TAK1)、炎性细胞因子(IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10和IL-18)、抗病毒相关细胞因子(IFN-α、IFN-β、IFN-ν、iNOS、MHC I和OASL)等基因在感染后12h、24h、48h和72h的转录水平变化情况。实验结果表明,REV感染SPF鸡外周血淋巴细胞后72h以内,TLR3、TLR4和TLR7的mRNA转录水平明显降低;而 TLR15 和 TLR21 的 mRNA 转录水平变化不大。IRF7、IRAK4、NF-κB、TRAF6、TRIF、TAKI和MHC I转录水平表达变化与TLR3趋势一致;而MyD88、IL-10、IL-18、MDA5、IFN-β、iNOS和OASL在感染72h时表达上调;IL-lβ、IL-6和IL-8转录水平显著升高,在72h时达到峰值;IFN-α在感染48h表达稍有抑制,IFN-lγ则在感染初期12h时表达显著升高。以上结果表明REV在感染早期能够不同程度引起天然免疫受体TLR3、TLR4和TLR7的抑制,以及Toll样受体信号通路相关细胞因子的抑制;炎性细胞因子和抗肿瘤相关细胞因子不同程度的表达上调,这些结果为进一步解释REV的免疫抑制机制提供依据。二、REV感染SPF鸡主要免疫器官中免疫相关分子的表达情况为了解REV感染宿:主毕期的天然免疫反应,本研究进行了REV人工接种SPF鸡动物实验。实验分为感染组和对照组,在感染后的第1、3、5、7、14、21、28和35天分别采集外周血淋巴细胞、胸腺、脾脏、法氏囊和盲肠扁桃体等免疫器官和细胞,通过荧光定量PCR检测病毒的复制情况以及天然免疫受体(TLR3和TLR7)、炎性因子(IL-1β和IL-6)和干扰素(IFN-α、IFN-β和IFN-γ)的表达情况。结果显示REV感染后,病毒含量的变化呈现先增后减,再增再减的趋势。在胸腺中,第14天时病毒的含量达到最高;在外周血淋巴细胞、脾脏、法氏囊和盲肠扁桃体中,第7天时病毒的含量达到最高:在第28天时,病毒的含量又开始增加。天然免疫受体(TLR3和TLR7)和II型干扰素(IFN-γ)在病毒大量复制时,表达量也上升;炎性因子(IL-6和IL-1β)的表达变化在外周血淋巴细胞、脾脏和法氏囊中趋势与病毒复制一致;在感染脾脏第28天和法氏囊第14天和第28天中I型干扰素(IFN-α和IFN-β)表达上调,此时的病毒含量也是最高。这些实验结果表明了REV感染宿主免疫器官早期的免疫反应情况,为深入研究病毒感染引起的免疫抑制机理提供基础。三、REV感染SPF鸡法氏囊转录组学的研究REV感染鸡只可引起免疫抑制,混合感染和继发感染,导致临床较高的死亡率。然而,病毒与宿主之间的相互作用知之甚少。本研究旨在通过REV感染的法氏囊组织基因转录组学分析,反应病毒与宿主之间的互作关系。经第二部分实验结果以及相关参考文献可以得知,REV感染SPF鸡后病毒含量在法氏囊中达到最高值,因此选择法氏囊作为转录组学分析的研究对象。生物信息学分析表明,在REV感染后总共有15296个差异表达基因,这些表达差异基因涉及细胞过程、结合、生物学调节、代谢加工、刺激反应和免疫系统等方面。通过KEGG信号通路分析发现,差异表达基因主要参与了免疫、肿瘤和代谢相关的信号通路,如Toll样受体信号通路、细胞因子-细

关键词：禽网状内皮组织增生病病毒外周血淋巴细胞 SPF鸡免疫器官转录组学天然免疫相关基因

禽网状内皮组织增生病病毒TaqMan探针荧光定量PCR检测方法的建立及应用

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医科学 2010年第11期40卷 1137-1141页

作者：李凯高宏雷高立祁小乐高玉龙徐延伟王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所禽传染病研究室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

根据GenBank中禽网状内皮组织增生病病毒(REV)基因组序列设计1对针对REVgp90基因的引物和1条特异性TaqMan探针,建立了一种快速检测REV病毒载量的TaqMan荧光定量PCR方法。通过对反应条件和反应体系的优化,使得该方法在1×101～1×108copi... 详细信息

根据GenBank中禽网状内皮组织增生病病毒(REV)基因组序列设计1对针对REVgp90基因的引物和1条特异性TaqMan探针,建立了一种快速检测REV病毒载量的TaqMan荧光定量PCR方法。通过对反应条件和反应体系的优化,使得该方法在1×101～1×108copies/μL范围内具有良好的线性关系,灵敏度达到10copies/μL,是常规PCR方法的100倍,该方法与其他禽病病毒无交叉反应,批间与批内重复性试验变异系数均小于2%。用REV HLJR0901株人工感染1日龄SPF雏鸡,定期剖检,对感染鸡体内各器官的病毒分布及载量进行检测,结果表明,在肝、脾、法氏囊、胸腺和腺胃中均可检测到病毒,其病毒载量并无明显差异。本研究结果表明,该方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,可用于REV的定量检测,为该病毒的诊断及致病性的研究提供了技术手段。

关键词：禽网状内皮组织增生病病毒荧光定量聚合酶链反应 TaqMan探针

禽网状内皮组织增生病病毒套式PCR检测方法的建立

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

畜牧与兽医 2011年第12期43卷 58-61页

作者：毕研丽孙翠平王金良郭广君吕素芳苗立中沈志强山东绿都生物科技有限公司山东滨州256600 山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600

根据GenBank中登录的禽网状内皮组织增生病病毒(REV)基因组序列,设计合成了2对引物,外部引物的扩增片段大小为467 bp,内部引物的扩增片段大小为314 bp,建立了适合REV快速检测的套式PCR方法。采用该方法对REV毒株进行了检测,结果显示能... 详细信息

根据GenBank中登录的禽网状内皮组织增生病病毒(REV)基因组序列,设计合成了2对引物,外部引物的扩增片段大小为467 bp,内部引物的扩增片段大小为314 bp,建立了适合REV快速检测的套式PCR方法。采用该方法对REV毒株进行了检测,结果显示能扩增到314 bp的条带;禽流感病毒(H9亚型)、新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、减蛋综合征病毒、禽白血病病毒、禽呼肠孤病毒、马立克氏病病毒的扩增结果均为阴性。该方法第1次扩增的敏感性是100 pg,第2次扩增的敏感性是1 fg,第2次比第1次扩增的敏感性高105倍。所建立的套式PCR方法具有敏感性高、重复性好、特异性强等优点,可用于禽网状内皮组织增生病的临床诊断和分子流行病学调查。

关键词：禽网状内皮组织增生病病毒套式PCR 检测

禽网状内皮组织增生病病毒gp90基因在杆状病毒中的表达及其产物的活性分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医科学 2009年第11期39卷 973-977页

作者：高立祁小乐高玉龙高宏雷秦立廷邓小芸王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所禽传染病研究室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

以质粒pMD18T-env为模板,利用PCR技术扩增禽网状内皮组织增生病病毒的gp90基因,酶切、纯化后,克隆至载体pFastBacHTA中,构建了重组供体载体pFgp90,并将其转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,使gp90基因整合到Bacmid穿梭载体中,获得重组穿梭... 详细信息

以质粒pMD18T-env为模板,利用PCR技术扩增禽网状内皮组织增生病病毒的gp90基因,酶切、纯化后,克隆至载体pFastBacHTA中,构建了重组供体载体pFgp90,并将其转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,使gp90基因整合到Bacmid穿梭载体中,获得重组穿梭载体Bacmidgp90。通过脂质体介导将其转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBacgp90。抗gp90蛋白小鼠超免疫血清介导的Western-blot分析和间接免疫荧光试验(IFA)结果显示,gp90蛋白被正确表达,分子质量约为45 ku;gp90蛋白在变性和自然状态下均能够被识别,具有良好的生物活性。

关键词：禽网状内皮组织增生病病毒 gp90基因 sf9细胞杆状病毒生物活性

禽网状内皮组织增生病病毒和呼肠孤病毒感染SPF鸡对IFN-γ产生的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医学报 2008年第3期28卷 232-234,238页

作者：郑玉姝赵宏坤崔治中赵朴李宏梅刘翠艳李培庆山东农业大学动物科技学院山东泰安271018 河南科技学院动物科技学院河南新乡453003

1日龄SPF鸡分别接种禽网状内皮组织增生病病毒(REV)、禽呼肠孤病毒(ARV)和REV+ARV,于感染后3、5、46 d采集脾细胞做脾淋巴细胞培养并采用双抗体夹心ELISA法检测IFN-γ水平。结果表明,与对照相比,鸡感染REV后脾淋巴细胞IFN-γ的分泌水平... 详细信息

1日龄SPF鸡分别接种禽网状内皮组织增生病病毒(REV)、禽呼肠孤病毒(ARV)和REV+ARV,于感染后3、5、46 d采集脾细胞做脾淋巴细胞培养并采用双抗体夹心ELISA法检测IFN-γ水平。结果表明,与对照相比,鸡感染REV后脾淋巴细胞IFN-γ的分泌水平显著升高。感染后5 d,REV单独感染引起IFN-γ8倍的增长,达到峰值,然后逐渐下降。ARV单独感染引起IFN-γ2倍的增长。REV和ARV共感染鸡脾淋巴细胞IFN-γ的分泌量增长了3倍。至感染后46 d,共感染和REV单独感染的IFN-γ水平与对照组相比仍然差异显著,ARV单独感染与对照组相比差异不再显著。

关键词： IFN-γ 禽呼肠孤病毒禽网状内皮组织增生病病毒 SPF鸡

禽网状内皮组织增生病病毒gp90全长蛋白的原核表达、纯化及其免疫原性分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

微生物学报 2009年第10期49卷 1380-1384页

作者：高立祁小乐高宏雷高玉龙秦立廷孙芬芬张云王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所禽传染病研究室兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

【目的】原核表达免疫原性良好的禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)gp90蛋白,并制备抗gp90蛋白高效价多克隆血清。【方法】利用PCR技术,以pMD18T-env为模板,扩增得到REV的gp90蛋白编码基因,将其克隆入表达载体... 详细信息

【目的】原核表达免疫原性良好的禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)gp90蛋白,并制备抗gp90蛋白高效价多克隆血清。【方法】利用PCR技术,以pMD18T-env为模板,扩增得到REV的gp90蛋白编码基因,将其克隆入表达载体pET-28a(+)中,将构建的原核表达质粒pET28-gp90,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)感受态细胞,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后进行gp90蛋白表达并鉴定。用纯化的gp90蛋白免疫6-8周龄Balb/c小鼠,制备抗gp90的多克隆血清。用间接免疫荧光试验检测该血清的特异性,用酶联免疫吸附试验(ELISA)滴定其效价。【结果】REV gp90基因在重组大肠杆菌中正确表达,免疫小鼠后获得的抗血清可与重组杆状病毒表达的gp90蛋白特异性反应,ELISA效价达到1∶12800,该研究为开展REV诊断试剂的研制奠定了基础。

关键词：禽网状内皮组织增生病病毒 gp90蛋白原核表达纯化多克隆抗体

禽网状内皮组织增生病病毒感染对SPF雏鸡胸腺、法氏囊细胞凋亡及相关因子表达的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

禽网状内皮组织增生病病毒感染对SPF雏鸡胸腺、法氏囊细胞凋亡及...