检索结果-南通市图书馆

鸡传染性贫血病毒、网状内皮增生症病毒与禽白血病病毒基因芯片检测方法的建立

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

华北农学报 2015年第6期30卷 91-96页

作者：苏霞朱瑞豪陈小玲杨丽聪周宏专徐福洲杨兵北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京100097

基于多重PCR技术,建立鸡传染性贫血病病毒(CAV)、禽网状内皮增生症病毒(REV)、禽白血病病毒禽(ALV)A、C、D亚群的基因芯检测方法。根据NCBI收录的鸡传染性贫血病毒(CIAV)、禽网状内皮增生症病毒(REV)与禽白血病病毒(ALV)A、C、D亚群参... 详细信息

基于多重PCR技术,建立鸡传染性贫血病病毒(CAV)、禽网状内皮增生症病毒(REV)、禽白血病病毒禽(ALV)A、C、D亚群的基因芯检测方法。根据NCBI收录的鸡传染性贫血病毒(CIAV)、禽网状内皮增生症病毒(REV)与禽白血病病毒(ALV)A、C、D亚群参考毒株的序列,设计合成特异性扩增引物及探针,将下游引物进行Cy3荧光标记,制备基因芯片;分别提取几种病毒的基因组DNA,进行PCR扩增后与探针进行杂交,荧光检测仪扫描并分析结果。结果表明:制备的芯片能够同时检测CIAV、REV与ALV A、C、D亚群,该方法对病毒的最低检测限为106copies/m L,特异性试验结果表明,该方法与NDV、MDV和IBDV均无交叉反应,可快速鉴别ALV、REV、CIAV。为今后在临床应用中快速鉴别诊断CIAV、REV与ALV A、C、D亚群提供了可行性。

关键词：鸡传染性贫血病毒禽网状内皮增生症病毒禽白血病病毒基因芯片

禽网状内皮组织增殖病病毒PCR及RT-PCR检测方法的研究和p30主要抗原域的原核表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国预防兽医学报 2006年第4期28卷 441-445页

作者：葛兆宏陆广富江苏畜牧兽医职业技术学院江苏泰州225300

根据***发表的一对引物,5'-CATACTGGAGCCAATGGTGTAAAGGGCAGA-3'(上游引物),5'-AATGTTGTAGCGAAGTACT-3'(下游引物),上游引物位于REV-SNV毒株LTR序列上游237bp到267bp,下游引物在499bp到517bp之间,扩增产物总长为281bp。以REV-T株感染的鸡胚成纤维细胞DNA作为PCR扩增模板,进行PCR扩增,提取病毒RNA进行RT-PCR,这两种方法均获得了禽网状内皮增生症T株的部分LTR序列,将其克隆入pGEM-TEasy克隆载体中,经测序,证实为禽网状内皮增生症T株的部分LTR序列,初步建立了REV的PCR和RT-PCR检测方法。人工合成了REVp30的主要抗原域,用构建成功的表达禽网状内皮增生症p30主要抗原域的原核表达载体pET-p30,转化大肠杆菌BL21,挑取阳性克隆培养,IPTG诱导后裂解菌体作SDS-PAGE分析,出现大小约25Ku的表达产物即融合蛋白TrxA-p30主要抗原域,经Westernblot验证融合蛋白具有REV特异的反应原性。采用常规表达条件:LB培养基,37℃培养,待菌生长至OD600为0.4h～0.6h,用终浓度为0.2mmol/L～0.8mmol/L的IPTG进行诱导,于37℃振荡培养4h～5h,均能高效表达。本研究为建立REV抗体的ELISA检测方法打下基础。

关键词：禽网状内皮增生症病毒 p30蛋白主要抗原域原核表达系统 Western blot

禽网状内皮组织增殖病病毒PCR及RT-PCR检测方法的研究和p30主要抗原域的原核表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

禽网状内皮组织增殖病病毒PCR及RT-PCR检测方法的研究和p30主要抗...

作者：葛菲菲南京农业大学

学位级别：硕士

根据MONA ***发表的一对引物，5’-CATACTGGAGCCAATGGTGTAAA GGGCAGA-3’(上游引物)，5’-AATGTTGTAGCGAAGTACT-3’(下游引物)，上游引物位于REV-SNV毒株LTR序列上游237nt到267nt，下游引物在499nt到517nt之间，扩增产物总长为281bp。以REV-T株感染的鸡胚成纤维细胞DNA作为PCR扩增模板，进行PCR扩增，提取病毒RNA进行RT-PCR，这两种方法均获得了禽网状内皮增生症T株的部分LTR序列，将其克隆入pGEM-T Easy克隆载体中，经测序，证实为禽网状内皮增生症T株的部分LTR序列，初步建立了REV的PCR和RT-PCR检测方法。人工合成了REV的主要抗原域p30，用构建成功的表达禽网状内皮增生症主要原域的原核表达载体pET-p30，转化大肠杆菌BL，挑取阳性克隆培养，IPTG诱导后裂解菌体作SDS—PAGE分析，出现大小约30KD的表达产物即融合蛋白TrxA—p30，经Western—blot验证融合蛋白具有REV特异的反应原性。采用常规表达条件：LB培养基，37℃培养，待菌生长至OD为0.4-0.6时，用终浓度为0.2-0.8mmol／L的IPTG进行诱导，于37℃振荡培养4-5h，均能高效表达。为建立REV抗体的ELISA检测方法打下基础。

关键词：禽网状内皮增生症病毒聚合酶链式反应反转录聚合酶链式反应 p30蛋白主要抗原域原核表达系统融合蛋白 Western-blot

广西部分规模场禽网状内皮增生症流行病学调查

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

上海畜牧兽医通讯 2016年第3期 28-29,31页

作者：胡杰骆永泉张步娴尹彦文莫胜兰屈素洁粟艳琼广西动物疫病预防控制中心 530001 贺州市动物预防控制中心

通过ELISA方法对广西6个规模场的874份血清样品进行禽网状内皮病毒抗体检测,结果发现血清抗体阳性率平均为79.63%;用PCR方法对6个规模场的18个批次的鸡痘疫苗和8个批次的禽马立克氏病疫苗进行禽网状内皮增生症病毒检测,结果18个批次的... 详细信息

通过ELISA方法对广西6个规模场的874份血清样品进行禽网状内皮病毒抗体检测,结果发现血清抗体阳性率平均为79.63%;用PCR方法对6个规模场的18个批次的鸡痘疫苗和8个批次的禽马立克氏病疫苗进行禽网状内皮增生症病毒检测,结果18个批次的鸡痘疫苗检测出1个批次为禽网状内皮增生症病毒阳性,8个批次的马立克氏病疫苗均未检测出禽网状内皮增生症病毒。

关键词： ELISA 禽网状内皮病毒抗体 PCR 禽网状内皮增生症病毒

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

REV囊膜蛋白的原核表达、抗体制备及鉴定

江西农业大学学报 2021年第5期43卷 1159-1166页

作者：朱丽霖王后坤陈雪阳高可丽方春梁雄燕杨玉莹长江大学动物科学学院湖北荆州434025

【目的】禽网状内皮增生症病毒(reticuloendothelial virus,REV)囊膜蛋白与细胞表面受体结合启动病毒感染,并在REV的复制、致病过程中具有重要作用。为探索REV囊膜蛋白相关生物学特性,研究获得了高效表达的禽网状内皮增生症病毒囊膜蛋白... 详细信息

【目的】禽网状内皮增生症病毒(reticuloendothelial virus,REV)囊膜蛋白与细胞表面受体结合启动病毒感染,并在REV的复制、致病过程中具有重要作用。为探索REV囊膜蛋白相关生物学特性,研究获得了高效表达的禽网状内皮增生症病毒囊膜蛋白,制备多克隆抗体。【方法】利用原核表达载体pET-28a和pGEX-6p-1表达REV囊膜蛋白gp90,并通过Ni2+亲和层析柱对融合蛋白REV-His-gp90进行纯化,纯化的蛋白免疫Balb/c小鼠,制备了多克隆抗体;纯化的REV-GST-gp90蛋白用于检测多克隆抗体效价。【结果】pET-28a-REV-gp90和pGEX-6p-1-REV-gp90表达质粒构建成功,通过SDS-PAGE验证蛋白能在大肠杆菌BL21菌株中表达;Western-blot检测结果显示制备的多克隆抗体具有良好的反应性和特异性;采用间接ELISA法检测抗血清效价为1∶64000;IFA结果显示,制备的多克隆血清能与REV特异性反应。【结论】研究制备的多克隆抗体效价高、特异性良好,为进一步开展REV囊膜蛋白的生物学特性研究及其特异性抗体应用奠定基础。

关键词：禽网状内皮增生症病毒原核表达囊膜蛋白多克隆抗体

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

不同启动子表达载体的构建及其体外活性分析

中国畜牧兽医 2014年第2期41卷 11-15页

作者：刘正伟李慧敏黄妙容郭凯王建丽李延鹏陈瑞爱华南农业大学广东广州510642 广东大华农动物保健品股份有限公司广东云浮527400

本研究以禽网状内皮增生症病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)囊膜糖蛋白(envelope,env)基因作为报告基因,定量检测不同启动子在体外的转录活性,为研发马立克氏病病毒(Marek’s disease virus,MDV)活载体疫苗、选择适宜的启动子提... 详细信息

本研究以禽网状内皮增生症病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)囊膜糖蛋白(envelope,env)基因作为报告基因,定量检测不同启动子在体外的转录活性,为研发马立克氏病病毒(Marek’s disease virus,MDV)活载体疫苗、选择适宜的启动子提供依据。本试验构建6个含不同启动子,且能表达env基因的重组质粒,并将构建好的重组质粒转染到鸡胚成纤维细胞中,通过间接免疫荧光试验和实时荧光定量PCR检测不同启动子的表达转录水平。研究证明6种启动子均能使env基因在体外获得表达,且不同启动子的转录活性不同。比较发现MDV自身启动子相对其他组启动子的转录活性较弱,pec启动子的转录活性最强。

关键词：禽网状内皮增生症病毒囊膜糖蛋白基因启动子活性分析

维普期刊数据库博看期刊

2010-2012年广西鸡三种肿瘤病病毒的流行病学研究及其在商品马立克活疫苗中污染的检测

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

2010-2012年广西鸡三种肿瘤病病毒的流行病学研究及其在商品马立...

作者：曾婷婷广西大学

学位级别：硕士

马立克氏病病毒(MDV)、禽白血病病毒(ALV)和网状内皮增生症病毒(REV)是引起鸡肿瘤的最常见病原。目前,临床中存在肿瘤病毒混合感染比较普遍的情况。通过对2010-2012年间16群主要来自广西的疑似肿瘤病的病鸡进行了剖检、肿瘤组织PCR检测... 详细信息

马立克氏病病毒(MDV)、禽白血病病毒(ALV)和网状内皮增生症病毒(REV)是引起鸡肿瘤的最常见病原。目前,临床中存在肿瘤病毒混合感染比较普遍的情况。通过对2010-2012年间16群主要来自广西的疑似肿瘤病的病鸡进行了剖检、肿瘤组织PCR检测、病毒分离鉴定及部分新鲜活体的可疑肿瘤组织病理组织学观察。PCR检测结果发现,16群可疑病鸡中7群为MDV单一感染(43.75%)、2群为ALV-J单一感染(12.5%)、3群为MDV和ALV-J混合感染(18.75%)、3群为MDV、ALV-J和REV混合感染(18.75%)及1群为MDV和ALV-D混合感染(6.25%)。说明近两年引起肉眼可见肿瘤病变的病原主要是MDV单一感染或MDV和ALV、REV混合感染。应用SPF鸡胚成纤维细胞(CEF)分离培养技术和接种病毒的细胞培养物间接免疫荧光试验(IFA)、分离株基因序列分析方法,获得了6株MDV-1,属超强毒MDV(vvMDV)或特超强毒MDV(vv+MDV)、5株ALV-J、1株初步鉴定为ALV-D和1株REV。其中1株MDV-1混合ALV-J的感染,1株MDV-1混合REV和ALV-J的感染。疑似ALV-D的毒株需要得到更多的序列才能确定含有哪些成分。取部分病料的新鲜活体制作病变组织的石蜡切片,在显微镜下观察到了MDV单一感染引起的淋巴细胞肿瘤和MDV和ALV-J混合感染引起的髓细胞瘤及淋巴细胞和髓细胞混合的肿瘤。由鸡肿瘤病毒引起的肿瘤组织病理变化与由鸡白痢沙门氏菌慢性感染引起的心脏肉芽肿和肝脏坏死组织病理变化存在明显差别。应用PCR方法对17个批次的商品MDV-1活疫苗和9枚SPF鸡胚进行了外源性ALV和REV的检测,结果均没有扩增出目的片段,初步说明所检样品中没有外源性ALV和REV污染。

关键词：鸡马立克氏病病毒禽白血病病毒禽网状内皮增生症病毒混合感染病毒分离鉴定 IFA序列分析组织病理学疫苗检测

2011-2014年河南省鸡群马立克氏病病毒流行株的分子进化及基因重组分析

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

2011-2014年河南省鸡群马立克氏病病毒流行株的分子进化及基因重...

作者：宿靖伟河南农业大学

学位级别：硕士

马立克氏病病毒（Marek’s disease virus,MDV）是少数感染自然宿主后,可诱发淋巴瘤的禽疱疹病毒之一,其感染引起的鸡马立克氏病（Marek’s disease,MD）也是最早可以用抗病毒疫苗来预防肿瘤发生的疾病。为了解鸡MDV流行毒株的分子特征... 详细信息

马立克氏病病毒（Marek’s disease virus,MDV）是少数感染自然宿主后,可诱发淋巴瘤的禽疱疹病毒之一,其感染引起的鸡马立克氏病（Marek’s disease,MD）也是最早可以用抗病毒疫苗来预防肿瘤发生的疾病。为了解鸡MDV流行毒株的分子特征,本研究对2012-2014年河南省发病鸡群的临床病料进行了采集,并对MDV 132 bp重复序列进行了PCR扩增,同时对meq、gE和gI基因进行了克隆和序列测定。结果表明,9份病料中均可扩增出与132bp双拷贝大小相符的PCR主产物;meq、gE和gI基因的核苷酸序列同源性与国内外参考毒株相比,分别为98.5%00%、98.8%00%和98.0%00%;基于这些基因构建系统发生树的分析结果表明,与美国、澳大利亚、日本以及印度的MDV分离株相比,目前河南鸡群中流行的MDV与此前分离的河南流行株进化关系较近,并且与其他国内分离株共同形成一个较大的独立进化分支。除了MDV,禽网状内皮增生症病毒（Reticuloendotheliosis virus,REV）也是导致家禽免疫抑制性疾病和肿瘤病最重要的病原之一。由于MDV和REV具有相似的组织嗜性,常混合感染于同一鸡群,因此这两种病毒的共感染对家禽养殖业危害巨大。此前研究表明,MDV基因组中可人工或自然重组REV的部分基因组片段,如长末端重复序列（long terminal repeat,LTR）,这种重组对MDV的病原学特性可能具有重要影响。为了解国内鸡群MDV和REV的共感染和自然重组状况,本研究对分离自河南商品蛋鸡群的17个MDV分离株进行了分析,结果发现其中HNGS206和HNXZ103的病毒基因组中存在REV-LTR的重组插入。进一步的研究表明这两个毒株不是MDV与REV自然重组的流行毒株,其基因组中LTR的插入可能发生于临床病例鸡共感染后的病毒分离培养过程中。本研究的结果提示河南鸡群中MDV和REV的共感染较为普遍,但MDV与REV自然重组毒株的流行状况仍需要进一步的流行病学监测。

关键词：马立克氏病病毒禽网状内皮增生症病毒流行病学进化分析共感染

实时荧光定量PCR技术在SPF鸡四种垂直传播疾病监测中的应用

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国比较医学杂志 2012年第8期22卷 6-14页

作者：王静陈冬妮欧芷华袁文邓庆丽陆勇军张钰广东省实验动物监测所(广东省重点实验室) 广州510262 中山大学生命科学学院广州510275

目的探讨荧光定量PCR检测技术对SPF鸡四种垂直传播病毒的检测应用。方法采集60份SPF鸡及70份普通鸡群蛋清、泄殖腔试子样品,提取样品核酸,分别进行ARV、REV、CAV、ALV四种病毒实时荧光定量PCR检测,根据标准曲线及溶解曲线分析判读样品... 详细信息

目的探讨荧光定量PCR检测技术对SPF鸡四种垂直传播病毒的检测应用。方法采集60份SPF鸡及70份普通鸡群蛋清、泄殖腔试子样品,提取样品核酸,分别进行ARV、REV、CAV、ALV四种病毒实时荧光定量PCR检测,根据标准曲线及溶解曲线分析判读样品病毒拷贝数。结果 SPF鸡ALV 2份阳性,检出率3.3%,其余病毒检测均为阴性;普通鸡样品REV检测2份阳性,检出率2.9%,ALV 10份阳性,检出率14.3%。结论荧光定量PCR检测方法最低可检测到100个拷贝核酸,检测灵敏度较高,有望应用于SPF鸡临床样品的病原检测。

关键词：实时荧光定量PCR 禽网状内皮增生症病毒鸡传染性贫血病毒禽白血病病毒禽呼肠孤病毒 SPF鸡