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长白山白眉蝮蛇蛇毒中类凝血酶的分离纯化方法研究

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中国药房 2007年第36期18卷 2825-2828页

作者：钟读波吴远双余旭亚孟庆雄昆明理工大学生命科学与技术学院昆明市650224

目的:研究长白山白眉蝮蛇蛇毒中类凝血酶的简单分离纯化方法。方法:采用DEAE-Sephadex A-25及Sephadex G-25层析的方法,比较二者对长白山白眉蝮蛇蛇毒中类凝血酶简单分离纯化的效果。结果:从长白山白眉蝮蛇蛇毒中分离出类凝血酶,SDS-PAG... 详细信息

目的:研究长白山白眉蝮蛇蛇毒中类凝血酶的简单分离纯化方法。方法:采用DEAE-Sephadex A-25及Sephadex G-25层析的方法,比较二者对长白山白眉蝮蛇蛇毒中类凝血酶简单分离纯化的效果。结果:从长白山白眉蝮蛇蛇毒中分离出类凝血酶,SDS-PAGE电泳显示为一条带,分子量大约为35.5kDa,达到电泳纯。理化性质研究表明,此类凝血酶具有体外凝血活性,体外凝血酶比活力为***-1,用N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐测得该酶的精氨酸酯酶比活力为***-1。用蛋白酶抑制剂和乙二胺四乙酸对该酶进行抑制实验,结果表明该酶属于丝氨酸蛋白酶,而不是金属蛋白酶。结论:本方法可用于长白山白眉蝮蛇蛇毒中类凝血酶的分离纯化。

关键词：长白山白眉蝮蛇蛇毒纤维蛋白原类凝血酶离子层析分离纯化

血浆分离组分Ⅰ+Ⅲ提取人免疫球蛋白方法初探

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中国输血杂志 2016年第9期29卷 907-909页

作者：方斌彭良俊韩韧董天保王月左林张云杨丹丹杨波武汉生物制品研究所有限责任公司湖北武汉430207 颇尔过滤器(北京)有限公司

目的为提高人免疫球蛋白收率,纯化血浆分离组分Ⅰ+Ⅲ并回收高纯度的人免疫球蛋白,进行方法学初步研究。方法用辛酸沉淀结合PALL公司提供的S Hypercel阳离子柱、Hypercel STAR AX阴离子柱两步离子交换层析法进行纯化。结果通过对数据分... 详细信息

目的为提高人免疫球蛋白收率,纯化血浆分离组分Ⅰ+Ⅲ并回收高纯度的人免疫球蛋白,进行方法学初步研究。方法用辛酸沉淀结合PALL公司提供的S Hypercel阳离子柱、Hypercel STAR AX阴离子柱两步离子交换层析法进行纯化。结果通过对数据分析得出,Ig G单体二聚体达到99%以上,Ig G纯度达到97%以上,收率达到80%以上。结论该方法能够很好纯化血浆分离组分Ⅰ+Ⅲ,回收高纯度的人免疫球蛋白。

关键词：组分Ⅰ+Ⅲ 离子层析人免疫球蛋白

rhIGF-Ⅰ的表达纯化和SARS-CoV未知蛋白细胞内定位及其功能研究

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rhIGF-Ⅰ的表达纯化和SARS-CoV未知蛋白细胞内定位及其功能研究

作者：冯彦斌山西大学

学位级别：硕士

胰岛素样生长因子-I(insulin-like growth factor-I，IGF-I)是一种具有促进多种细胞生长功能的活性多肽，它对组织细胞的增殖、分化、凋亡，机体的生长发育及肿瘤的发生发展起重要的调节作用。蛋白质纯化因其操作复杂，纯化条件不易掌... 详细信息

胰岛素样生长因子-I(insulin-like growth factor-I，IGF-I)是一种具有促进多种细胞生长功能的活性多肽，它对组织细胞的增殖、分化、凋亡，机体的生长发育及肿瘤的发生发展起重要的调节作用。蛋白质纯化因其操作复杂，纯化条件不易掌握，产率低，阻碍了其产业化生产。所以建立一条相对简单、高效的纯化路线，有利于推动IGF-I研究和应用。已构建好的含重组质粒pExSecI-IGF-I的*** BL21(DE3)，经IPTG16℃低温诱导重组蛋白的表达。将离心收集到的菌体超声破壁，离心分离，收集上清液，进行离子交换层析和分子筛分离纯化。蛋白纯度用Tris-Tricine SDS-PAGE鉴定，Western blot检测纯化的重组蛋白的免疫学活性。目的蛋白以可溶形式存在胞浆中，经二步柱层析纯化后，可获得高纯度的rhIGF-I。Western blot分析表明分离纯化的蛋白具有免疫学活性。

关键词： IGF-I 离子层析凝胶层析 SARS-CoV X1 X2 荧光蛋白定位细胞周期凋亡

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蚓激酶提取分离工艺的研究

蚓激酶提取分离工艺的研究

作者：郑慧山西医科大学

学位级别：硕士

蚓激酶（Lumbrokinas）是一种常见的用于治疗心脑血管疾病的药物。它是从传统中药材-蚯蚓发现的具有良好的活血、降血脂、降血粘的抗血栓活性物质。它与血栓有特殊的亲和力,能够跟踪溶栓,有效地溶解微栓,修复血管内皮受损细胞。蚓激酶... 详细信息

蚓激酶（Lumbrokinas）是一种常见的用于治疗心脑血管疾病的药物。它是从传统中药材-蚯蚓发现的具有良好的活血、降血脂、降血粘的抗血栓活性物质。它与血栓有特殊的亲和力,能够跟踪溶栓,有效地溶解微栓,修复血管内皮受损细胞。蚓激酶具有副作用小、安全性高、疗效较显著的优势,它具有很广阔的市场前景。目前国内对蚓激酶的提取分离工艺的研究很多,他们[1-3]纯化过程中采用了硫酸铵沉淀法,耗费时间长,分离纯化步骤复杂,不适宜工业化生产。如何有效地从蚯蚓中提取纤溶酶-蚓激酶,以便应用于血栓病的治疗和预防,是一项具有重大应用意义的研究。本研究粗提取利用蚓激酶热稳定性的特点,采用适宜温度去除部分杂蛋白的方法为后期纯化提供便利;分离纯化仅采用两步色谱分离就获得了纯度达95%以上的蚓激酶,这些大大简化了纯化步骤,提高了蚓激酶的纯度。本文将蚯蚓匀浆液经过两次离心、300K中空纤维柱超滤除杂,5K中空纤维柱超滤浓缩得到杂蛋白更少的粗提取液,为后期进一步纯化奠定基础。利用蚓激酶热稳定的性质,通过优化得到最佳的热处理条件,在二次离心前加入热处理的步骤进行除杂,去除了不耐热的蛋白杂质。加入的300K中空纤维柱和5K中空纤维柱对粗提取液进一步除杂和浓缩,减少了粗提取液的杂蛋白,减小了粗体液的体积,减化了后期工艺步骤。经一系列条件的优化后,确定了以溴化氰活化的Sepharose4B亲和胶从粗提液来捕获蚓激酶;用10K超滤柱去除蛋白中的氨水并浓缩,用DEAE阴离子离子交换层析对蛋白进行最后的精纯,得到了纯度95%以上的蚓激酶。通过纯化后获得的蚓激酶比活为210000U/mg,经SDS-PAGE分析得一条带,相对分子量为28000;高效液相色谱分析其纯度达95%以上。

关键词：蚓激酶分离纯化亲和层析离子层析

来自Pyrococcus horikoshii的极端耐热β-1,4-内切纤维素酶的分离纯化与酶学性质

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天津理工大学学报 2013年第4期29卷 51-56页

作者：聂立影郑春阳天津强微特生物科技有限公司天津300384

耐热纤维素酶具有广泛的应用前景,本研究室在利.用大肠杆菌表达来自Pyrococcus horikoshii的极端耐热β-1,4-内切纤维素酶基础上,建立了包括热处理、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子层析的纯化工艺,分离纯化获得单一组分的重组极端耐热... 详细信息

耐热纤维素酶具有广泛的应用前景,本研究室在利.用大肠杆菌表达来自Pyrococcus horikoshii的极端耐热β-1,4-内切纤维素酶基础上,建立了包括热处理、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子层析的纯化工艺,分离纯化获得单一组分的重组极端耐热β-1,4-内切纤维素酶(EGPh),SDS-PAGE测定该酶纯度大于90%,以CMC-Na为底物,DNS法测定比活22.3 U/mg,活性收率为73.3%,纯化倍数为45倍.酶学性质研究表明,该酶的分子量为43 KD,等电点(PI)为5.3,催化CMC-Na最适反应温度为95℃,最适反应pH为6.0,Km值为3.61±0.26 mg/ml.酶学稳定性研究表明EGPh在pH4.0～9.0、温度85℃下稳定.纯化的EGPh表现了极好的热稳定性,95℃时半衰期为8 h.

关键词：耐热纤维素酶离子层析纯化工艺酶学性质

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半导体工业用的纯水中发现的离子浓度

微电子学 1987年第2期 61-65页

作者： Jana Houskova ,Theresa Chu ,郭树田

目前监测超纯水中离子含量的最通用仪器是电导率测定仪。然而,这些仪器提供的电导率测量结果将受几种因素的影响,这些仪器也不能提供有关特殊离子的任何信息。本文介绍一种新方法,应用离子层析可以监测高纯水中的离子。采用预先富集,达... 详细信息

目前监测超纯水中离子含量的最通用仪器是电导率测定仪。然而,这些仪器提供的电导率测量结果将受几种因素的影响,这些仪器也不能提供有关特殊离子的任何信息。本文介绍一种新方法,应用离子层析可以监测高纯水中的离子。采用预先富集,达到要求的灵敏度。业已表明,送回离子层析实验室的瓶装现场采样是一种合格的实用方法。本文介绍了15个LSI和VLSI制造厂所用纯水的离子层析研究结果。

关键词：离子层析离子浓度洗提液半导体工业电子工业

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成果简报

广东科技 1996年第11期 25-28页

全流加等电—离子层析提取谷氨酸技术是由广东开平味事达集团股份有限公司与华南理工大学合作联合开发成功。该技术利用离子层析技术,以正离子上柱,加氨负离于洗脱法回收等电点母液的谷氨酸,再用全流加法套用于发酵液的谷氨酸等结晶分析... 详细信息

全流加等电—离子层析提取谷氨酸技术是由广东开平味事达集团股份有限公司与华南理工大学合作联合开发成功。该技术利用离子层析技术,以正离子上柱,加氨负离于洗脱法回收等电点母液的谷氨酸,再用全流加法套用于发酵液的谷氨酸等结晶分析,从而全面提高发酵液的谷氨酸总提取收率。本技术主要应用于

关键词：先进水平离子层析无线寻呼机 BB机深圳市多层陶瓷电容器多层瓷介电容器陶瓷介质电容器广东开平金长城

Sabin脊髓灰质炎灭活疫苗病毒纯化层析柱柱效的建立

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贵州医科大学学报 2019年第3期44卷 293-296页

作者：高承刚苏敏李卫东杨晓蕾中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650018 云南省第一人民医院检验科云南昆明650018

目的:建立Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Vero细胞)病毒浓缩液(s IPV)纯化层析柱柱效。方法:连续对3个批次Sabin s IPV病毒的纯化工艺的凝胶层析柱和离子层析柱的柱效进行检测并分析其柱效值,检测两种层析获得的病毒纯化液的D抗原、总蛋白... 详细信息

目的:建立Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Vero细胞)病毒浓缩液(s IPV)纯化层析柱柱效。方法:连续对3个批次Sabin s IPV病毒的纯化工艺的凝胶层析柱和离子层析柱的柱效进行检测并分析其柱效值,检测两种层析获得的病毒纯化液的D抗原、总蛋白含量、比活性及纯度。结果:通过对连续3个批次的s IPV病毒纯化工艺的监测,建立凝胶层析柱的柱效不低于3 605 N/m,离子层析柱的柱效不低于2 222 N/m,凝胶柱效值>离子柱的柱效值,连续3批检测D抗原和总蛋白含量稳定,比活性为78～86 DU/μg,纯度为100%。结论:建立的层析柱柱效获得的病毒纯化液质量稳定。

关键词：脊髓灰质炎 Sabin IPV病毒纯化凝胶层析离子层析柱效

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分析试验室 1986年第5期 10-10页

《Official Methods of Analysis》(法定分析法)系“Association of Official Analytical Chemists”(正式分析家协会”编辑出版,又称“AOAC分析法”。该协会建立于1884年,由西方各国(主要是美国)在政府、科研部门、工厂实验室工作的分... 详细信息

《Official Methods of Analysis》(法定分析法)系“Association of Official Analytical Chemists”(正式分析家协会”编辑出版,又称“AOAC分析法”。该协会建立于1884年,由西方各国(主要是美国)在政府、科研部门、工厂实验室工作的分析化学家所组成。协会的任务是对文献上发表的分析方法加以选择和改进,进而经过一系列严格的程序制定出具有权威性的分析方法。

关键词：分析化学家离子层析新书架方法试验电分析化学极谱分析极谱法电化学分析出版分析法痕量分析常规分析电位分析