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鲫鱼、草鱼离体肠道对酪氨酸和脯氨酸的吸收、转运与利用的研究

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鲫鱼、草鱼离体肠道对酪氨酸和脯氨酸的吸收、转运与利用的研究

作者：白燕西北农林科技大学

学位级别：硕士

饲粮中的蛋白质在动物肠道内必须被降解为游离氨基酸或由2～3个残基组成的小肽(small peptide,SP)才能被肠道所吸收,而肠粘膜对氨基酸及小肽的吸收对于蛋白质在动物体内的整个代谢过程起着承上启下的关键作用,因此有关肠道氨基酸吸收的... 详细信息

饲粮中的蛋白质在动物肠道内必须被降解为游离氨基酸或由2～3个残基组成的小肽(small peptide,SP)才能被肠道所吸收,而肠粘膜对氨基酸及小肽的吸收对于蛋白质在动物体内的整个代谢过程起着承上启下的关键作用,因此有关肠道氨基酸吸收的研究一直是动物营养学家关注的热点问题。对小鼠、大鼠、兔、畜禽及人类的肠吸收机制已进行了大量的研究,但有关鱼类肠道吸收氨基酸机制的报道并不多见,尤其是鱼类肠道粘膜利用吸收后的氨基酸合成蛋白质、脂类等物质的代谢研究更是鲜见报道。本文初步研究并比较了鲫鱼和草鱼肠道吸收、转运酪氨酸与脯氨酸并利用吸收后的酪氨酸、脯氨酸合成蛋白质、脂类的动力学,而且在此基础上,探讨了鲫鱼和草鱼离体肠道对四种蛋白质饲料酶解液中氨基酸的吸收及转运动力学,旨在为水产动物的蛋白质及氨基酸营养研究提供一些基础理论数据与一种简便有效的研究方法。现将主要结果总结如下: 试验一:鲫鱼、草鱼离体肠道对酪氨酸和脯氨酸的吸收、转运与利用的研究。该试验采用同位素示踪法和肠道离体灌流模型分别测定了鲫鱼、草鱼离体肠道对酪氨酸和脯氨酸的吸收量、吸收速率、跨壁运输量随相应氨基酸灌流时间和浓度的变化而变化的关系以及肠粘膜中参与合成蛋白质与脂类的氨基酸的量。试验结果表明: 1.氨基酸浓度对吸收速率有显著影响:随着灌流酪氨酸、脯氨酸浓度的增加,鲫鱼、草鱼肠道对其的吸收速率与其浓度均呈正相关关系。肠道内灌流的酪氨酸浓度分别为2.5mmol.L、1.5mmol.L、0.5mmol.L时,鲫鱼肠道在10分钟时的吸收转运速度相应地分别为0.387umol.g肠.min、0.153umol.g肠.min和0.087umol.g肠.min;草鱼分别为0.047umol.g肠.min、0.025umol.g肠.min和0.016 umol.g肠.min,鲫鱼的吸收转运速度极显著高于草鱼(△S>LSD0.01);肠道内灌流的脯氨酸浓度分别为10mmol.L、5mmol.L、1mmol.L时,鲫鱼肠道在10分钟时的吸收转运速度分别为0.876 umol.g肠.min、0.426umol.g肠.min和0.078umol.g肠.min,草鱼分别为0.302 umol.g肠.min、0.255umol.g肠.min和0.019umol.g肠.min,鲫鱼对脯氨酸的吸收转运速度显著高于草鱼(△S>LSD0.05)。 2.吸收率与氨基酸浓度关系:鲫鱼肠道对酪氨酸、脯氨酸的总吸收率大体上是随着灌流氨基酸浓度的下降而呈下降趋势,脯氨酸各浓度组的总吸收率之间差异显著(△S>LSR),而酪氨酸0.5mmol.L组(2.44%)高于1.5mmol.L浓度组(2.38%),但三

关键词：鲫鱼草鱼离体肠道酪氨酸(Tyr) 脯氨酸(Pro) 吸收速率跨膜运输蛋白质合成脂肪合成

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鲇离体肠道对亮氨酸和苯丙氨酸的吸收

河北渔业 2009年第12期 19-21,29页

作者：易艳郭世莉曹勤燕重庆师范大学生命科学学院重庆400047 重庆市涪陵区第十五中学校重庆涪陵408000

采用外翻肠囊和茚三酮显色法研究了鲇离体肠道对L-亮氨酸(leu)和L-苯丙氨酸(phe)的吸收转运量。结果表明,在一定的氨基酸浓度范围内,鲇离体肠道对L-亮氨酸(leu)和L-苯丙氨酸(phe)的吸收量随着其浓度的升高而增加;鲇对L-亮氨酸(leu)的吸... 详细信息

采用外翻肠囊和茚三酮显色法研究了鲇离体肠道对L-亮氨酸(leu)和L-苯丙氨酸(phe)的吸收转运量。结果表明,在一定的氨基酸浓度范围内,鲇离体肠道对L-亮氨酸(leu)和L-苯丙氨酸(phe)的吸收量随着其浓度的升高而增加;鲇对L-亮氨酸(leu)的吸收量高于L-苯丙氨酸(phe)。

关键词：鲇离体肠道 L-亮氢酸 L-苯丙氧酸吸收

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螺旋式单链介入微机器人的研究

中国机械工程 2009年第17期20卷 2100-2103页

作者：陈柏蒋素荣陈笋吴洪涛南京航空航天大学江苏省精密与微细制造技术重点实验室南京210016 南京航空航天大学南京210016 上海交通大学医学院附属新华医院上海200127

在对基于螺旋密封原理的双链介入机器人驱动原理进行分析研究的基础上,提出了单链介入机器人设计方案,构建了螺旋式单链介入机器人性能分析数学模型。分别制作了直径为5mm的螺旋式双链介入机器人及单链介入机器人的实验样机,并对机器人... 详细信息

在对基于螺旋密封原理的双链介入机器人驱动原理进行分析研究的基础上,提出了单链介入机器人设计方案,构建了螺旋式单链介入机器人性能分析数学模型。分别制作了直径为5mm的螺旋式双链介入机器人及单链介入机器人的实验样机,并对机器人在离体肠道中的平均运行速度进行了比较,研究结果表明,螺旋式单链介入机器人能获得与双链结构机器人类似的运动性能。单链介入机器人在脉动流场中的运行实验表明,单链介入机器人能在流体冲击下进行顺流运动和逆流运动。

关键词：螺旋介入微机器人离体肠道模拟主动脉

斑点叉尾鮰肠道对10种EAA吸收动力学的研究

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斑点叉尾鮰肠道对10种EAA吸收动力学的研究

作者：王友慧西南农业大学

学位级别：硕士

在动物体内蛋白质必须被降解成游离氨基酸(free amino acid,FAA)或2～3氨基酸残基的小肽(small peptide,SP)才能被肠道所吸收，因此有关肠道氨基酸肠吸收的研究一直是动物营养学领域中的热点问题。对小鼠、大鼠、兔、畜禽动物以及人类... 详细信息

在动物体内蛋白质必须被降解成游离氨基酸(free amino acid,FAA)或2～3氨基酸残基的小肽(small peptide,SP)才能被肠道所吸收，因此有关肠道氨基酸肠吸收的研究一直是动物营养学领域中的热点问题。对小鼠、大鼠、兔、畜禽动物以及人类的肠吸收机制已进行了大量的研究(Matthews et al，1965;Rerat，1988;Monchi& Rerat，1993;Tarvid,1995)，但目前对斑点叉尾鮰肠道对氨基酸吸收机制的研究较少，尤其是吸收动力学研究未见报道。本文通过三个试验探讨10种必需氨基酸在斑点叉尾鮰肠道内的吸收及其转运动力学，旨在为斑点叉尾鮰乃至水产动物的蛋白质及氨基酸营养研究提供一些基础理论数据和一种简便有效的研究方法。现将主要结果总结如下：试验一：离体肠道灌注法研究肠道AA吸收、转运的可行性探讨。运用肠道离体灌注方法对斑点叉尾鮰进行试验，其结果表明：该方法测定肠道对氨基酸吸收和转运灵敏度较高，通过测定流经肠道的氨基酸灌注液浓度的变化能正确反映肠道对氨基酸的吸收规律，通过测定肠道培养液中的氨基酸浓度变化，能正确反映肠道对氨基酸的运输规律。同时，利用该实验系统时，灌流时间控制在1hr以内、氨基酸灌注液浓度在1～10mmol／L时，其实验结果具有可靠性。试验二：斑点叉尾鮰肠道对10种EAA吸收及跨壁运输动力学研究。该试验运用试验一的实验方法，分别测定了斑点叉尾鮰肠道对10种EAA吸收量、吸收速率、跨壁运输量随时间和浓度的变化关系，比较分析了10种EAA吸收和跨壁运输的动力学差异。结果表明： (1)在0～21min内，肠道对氨基酸的吸收量随时间的变化呈线性相关。在0～60min内，跨壁运输量随时间变化的曲线存在一定的差异：在0～20min，Arg、Lys和Val的跨壁运输量增加速率较快，而Leu、Ile、Thr、Trp和His在前20min增加较慢，增加快慢体现在曲线斜率在不同时间的存在差异上;在后20～60min，它们的变化曲线均呈线性增加;Phe和Met的曲线变化在0～60min内呈直线相关。 (2)AA浓度对吸收量的影响有显著差异：不同浓度下，用最小显著极差法检测10种EAA吸收量的差异性分析表明：在alpha=0.01时，Trp、Met、His、Leu、Ile、Thr有极显著差异(ΔS＞LSR)，Trp的吸收量最小，而Thr的吸收量最大;在相同浓度时，各氨基酸之间最大吸收量有显著差异(P＜0.05)。 (3)AA浓度与跨壁运输量的关系：同一氨基酸随着浓度的增加，培养液中各氨基酸的积累速度明显加快;在1～5mmol／L时，跨壁运输量变化不显著，在5～10mmol／L时，跨壁运输量随浓度变化差异显著。不同氨基酸之间，不同浓度下的最大跨壁运输量Ile、Leu、Trp、Thr随浓度的增加不成线性相关;Phe、Arg、Lys、Met、His的跨壁运输量随浓度的增加呈现正相关。斑点叉尾烟肠道对 10种 EAA吸收动力学的研究 (4) Phe、仰、Val、Leu、Afg、lie、M耐、Lys、His、hr吸收动力学常数依次为： K．;：1．1刀、1二35、1．93、2刀22、4．118、5．024、5．101、5．19吕、5．341、5．502;人。：1．176、 1刀1卜1．545、1．777、1．353、2＊48、3．449、2．1吕9、2．56o、6刀二4。试验三：＊Lys、L＊幻、卜11＊或卜k＊、卜Val、卜＊h对卜＊u、卜11e对卜uU、 L－lie吸收抑制动力学的研究。该试验采用试验一的实验方法，测定了斑点叉尾蛔肠道Val、Phe、Lys、Met、lie(或Leu)对L一Leu、Life的吸收抑帘动力学，比较了10 川川卜八八们．时收0．Z、0’v们刊们＊、’吸收训个’川、帅MI浓腴阶g化义系．．夕．’;以人山】：玉)在 0～21min内，混合AA的吸收量(Ns十fief ＋Zmmow 和 LeAlle 3＋Zmmol／L 时除外)和跨壁运输量随时间的变化主要表现为线性相关关系，在变化趋势上与单一 AA I4相似。 C)对 Leu和 lie吸收匠的影响存在差异：Val、Phe、Lys分别与＊混合的吸收量要小于与Leu混合的吸收量，Met对Leu和＊吸收量的影响不显著，主要表现为部分 fill线发生交叉。Leu和 lie之间存在显著的相互抑制作用。＊)混合氨基酸的最大吸收量和最大跨壁运输量存在差异：Lys刊、Lys＋Leu的最大吸收量在不同浓度下其吸收量显著大于其它混合氨基酸0．05);Met＋Leu、的e刊1e的吸收

关键词：氨基酸吸收、跨壁运输动力学斑点叉尾鮰离体肠道

基于体内消化、吸收过程探讨桂枝汤的药效物质基础

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基于体内消化、吸收过程探讨桂枝汤的药效物质基础

作者：高焕陕西中医药大学

学位级别：硕士

目的:桂枝汤源于汉代医家张仲景所著《伤寒论》,使其开篇第一方,主要由桂枝、芍药、生姜、大枣和甘草五味饮片组成,具有发表解肌、调和营卫的功效。中药口服后的药效物质基础源于入血成分中,故本研究基于体内消化、吸收过程以及网络药... 详细信息

目的:桂枝汤源于汉代医家张仲景所著《伤寒论》,使其开篇第一方,主要由桂枝、芍药、生姜、大枣和甘草五味饮片组成,具有发表解肌、调和营卫的功效。中药口服后的药效物质基础源于入血成分中,故本研究基于体内消化、吸收过程以及网络药理学方法探讨桂枝汤的药效物质基础。方法:1利用HPLC-MS/MS建立桂枝汤、大鼠给药桂枝汤后血清样品以及大鼠肠道内容物中桂枝汤主要成分含量的测定方法。2探讨大鼠口服及静注给药桂枝汤后主要成分在体内的药代动力学特征及口服绝对生物利用度(Fabs)。比较原型成分和代谢物在体内的消化、吸收、代谢过程的差异;3建立大鼠离体肠道非翻转模型,模拟胃肠道功能,探讨胃肠道不同部位对桂枝汤主要成分的吸收和转化作用;4大鼠皮下注射20%酵母后诱导其发热,灌胃给药桂枝汤后对其肛温进行测定,考察不同剂量桂枝汤的解热作用;5应用网络药理学方法,将桂枝汤分为原型成分和入血成分,分别预测成分靶点与疾病靶点(发热和胃肠道炎症),建立成分-靶点-疾病网络图,获取成分和疾病共同相关的靶点。利用IPA软件对成分与疾病共同相关靶点进行通路富集分析,筛选桂枝汤治疗以上两种疾病的核心成分与靶点,从而探讨桂枝汤的药效物质基础和异病同治的机制。结果:1利用HPLC-MS/MS建立了桂枝汤10个成分的含量分析方法以及大鼠给药桂枝汤后血清中14个成分(含5个代谢物)含量测定方法。同时利用HPLCMS/MS建立了大鼠胃肠道内容物中12个成分的测定方法。上述方法特异性高,灵敏度好。2药代动力学结果表明,桂枝汤经口服给药后各成分的AUC0-∞和Cmax随剂量增加而增加,显示出一级动力学特征。肉桂酸和6-姜酚脂溶性强,以原型的形式被直接吸收进入体内,具有较高的Fabs。而对于水溶性较强的苷类成分,如甘草苷、甘草酸等,其代谢物可被充分的吸收进入体内,具有较高的血药浓度和暴露量;大鼠静注给药桂枝汤后血中原型成分的血药浓度值明显高于代谢物的值;桂枝汤口服给药后大多数原型成分受到肠道菌群及酶的作用,使其在体内主要以代谢物的形式被吸收和利用。3离体肠道非翻转模型研究结果表明,桂枝汤主要成分在小肠上端(十二指肠)和结肠部位吸收率和透过率较好,提示其是桂枝汤成分的主要吸收部位。各成分在盲肠中的转化率较高,提示其是药物发生代谢的主要场所。4药效评价结果表明大鼠注射酵母后体温持续升高。随着给药剂量增加,大鼠升温变缓。高、中剂量组具有显著的解热作用,P肠道消化、吸收进入血液是药物发挥药效作用的关键步骤,所以中药“真正”的药效成分应该存在于被吸收进入血液的成分中,包括方剂原型成分和代谢产物。口服后桂枝汤成分受到肠道消化的影响,使其进入体内的物质形式发生改变,多以代谢物的形式被机体吸收和利用,提示该过程可能影响桂枝汤的药效作用。因此,研究药物原型及代谢物在体内的生物过程有助于寻找中药的药效物质基础。

关键词：桂枝汤药效物质基础 HPLC-MS/MS 药代动力学离体肠道药效学网络药理学

鲫鱼肠道对四种蛋白质饲料的体外消化与其酶解液中氨基酸吸收效率的研究

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饲料工业 2006年第10期27卷 33-36页

作者：白燕叶元土锦州医学院畜牧兽医学院苏州大学农业科技学院

采用离体消化方法测定了鲫鱼肠道对鱼粉、花生粕、菜粕、棉籽粕的体外消化率和氨基酸的生成效率。同时采用同位素示踪法和肠道离体灌流模型分别测定了鲫鱼离体肠道对4种蛋白质饲料体外酶解液中氨基酸的吸收速度。结果表明:鲫鱼肠道对鱼... 详细信息

采用离体消化方法测定了鲫鱼肠道对鱼粉、花生粕、菜粕、棉籽粕的体外消化率和氨基酸的生成效率。同时采用同位素示踪法和肠道离体灌流模型分别测定了鲫鱼离体肠道对4种蛋白质饲料体外酶解液中氨基酸的吸收速度。结果表明:鲫鱼肠道对鱼粉、花生粕、菜粕、棉籽粕的体外消化率分别为48.51%、85.52%、60.64%、67.22%,其中以花生粕最高,鱼粉最低,消化率彼此之间的差异均显著(P肠道(每克)对4种蛋白质饲料酶解液中氨基酸的吸收转运速度,以鱼粉最高,在灌流40min时,速度为1.058mg/min,其次为花生粕0.782mg/min、棉籽粕0.679mg/min、最低为菜粕0.451mg/min,差异显著(P肠道对氨基酸的吸收转运量占流过肠道的氨基酸总量的比例表示肠道对氨基酸的吸收效率,结果为鲫鱼肠道对4种蛋白质饲料酶解液氨基酸的吸收转运效率间无显著性差异(P>0.05),所以肠道对氨基酸的吸收效率可能并不受饲料种类的影响。量。采用凯氏定氮法对烘干的饲料样品和消化滤渣进行粗蛋白质含量测定,按照公式计算饲料样品的离体消化率:蛋白质离体消化率(%)=(消化前饲料重量×饲料粗蛋白质含量-消化后滤渣质量×滤渣粗蛋白质含量)/(消化前饲料质量×饲料粗蛋白质含量)。1.3酶解液氨基酸总量测定及计算方法按照1.2.2的方法分别对饲料样品进行酶解,于0、1、3、5、7h分别取酶解液0.2ml(同时补充等体积的磷酸缓冲液),加入10%的三氯醋酸0.2ml,待蛋白质沉淀后以6000r/min离心20min后,取上清液0.1ml采用茚三酮法测定OD570值,用亮氨酸作标准曲线计算酶溶液氨基酸的总量,再按照酶解的氨基酸总量(扣除饲料酶解前的游离氨基酸含量)占饲料量的百分比计算氨基酸的消化生成效率。1.4用于肠道灌注的酶解液制备方法按照1.2.2的方法对鱼粉、花生粕、菜粕、棉籽粕进行酶解7h后,取酶解液以10000r/min离心25min,收集上清液为酶解液,于冰箱冷冻保存备用。定量取此酶解液0.2ml加入10%三氯醋酸0.2ml,待蛋白质沉淀后以6000r/min离心20min,采用茚三酮定量测定酶解液氨基酸浓度。1.5灌注试验方法采用叶元土等利用的肠道灌注系统进行蛋白质饲料酶解液的灌注试验。整个灌注系统置于生化培养箱中,控制环境温度在28℃,恒流泵控制灌注液的流量在2.00ml/min,由氧气瓶从灌流开始前5min就向培养液中充入医用氧气以保持肠道组织活性。1.6离体肠道的制备将鲫鱼捣毁脊髓处死,立即解剖取出肠道,在生理盐溶液浸渍下剔除肠道外壁上的脂肪、血污等,在灌流系统中用生理盐溶液冲洗干净肠道内容物,置于生理盐溶液中待用。每次灌注试验用一尾鲫鱼的肠道,每次试验至少重复3遍。用于解剖获取肠道的鲫鱼平均体重为126g,试验前养殖于室内循环养殖系统中,养殖环境温度为25℃左右,投喂粗蛋白质为30%的颗粒配合饲料2周以上。1.7肠道对氨基酸平均转运速度计算方法在灌注液中加入放射性酪氨酸(L-[4,5-3H]-tyr,放射性浓度为0.5毫居里/毫升),从灌注开始(0min)每10min取肠道外培养液0.1ml,持续40min,并取开始时肠道外培养液样品。每次取样品液100μl,取3个平行样品,并补充同样体积的生理盐溶液以保持肠道外培养液总体积恒定。取肠道内灌流液100μl于闪烁瓶内,设3个平行样品,样品液均置于闪烁瓶内,加入闪烁液5ml放置半小时后,在SN-6930液体闪烁计数器中计数(cpm值)。因灌流液的氨基酸浓度是已测知的,所以根据灌流液cpm值和肠道外培养液cpm值,就可计算出肠道外培养液的氨基酸浓度,再根据培养液体积(40ml)计算经过肠道转运到培养液中的氨基酸总量,最后根据吸收转运的时间计算单位质量肠道对氨基酸的平均转运速度。1.8数据的表示与处理由于鱼体大小差异使肠道长度和质量有一定的差异,为减小试验误差,统一比较标准,我们把鲫鱼肠道对试验氨基酸的跨壁运输量表示为单位肠道组织重量(g)对试验氨基酸的跨壁运输量,并以此为基础计算氨基酸吸收转运速度,计算公式如下:转运到肠道外培养液中氨基酸的浓度=灌流液氨基酸浓度×(肠道外培养液cpm值-空白培养液cpm值)/灌流液cpm值;跨壁运输量=(培养液cpm值-空白培养液cpm值)×灌流试验氨基酸浓度×培养液体积/(灌流液cpm值×肠道质量);氨基酸平均转运速度=(培养液cpm值-前10min时培养液cpm值)×灌流试验氨基酸浓度×培养液体积/(灌流液cpm值×肠道质量×

关键词：鲫鱼离体肠道体外消化氨基酸生成效率吸收速度鱼粉蛋白质饲料