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适配体识别-化学发光技术检测福氏志贺菌

食品与发酵工业 2023年第1期49卷 267-272,278页

作者：陈威风李晓雪裴兰梅常惟丹崔丽伟潘春梅河南牧业经济学院食品与生物工程学院河南郑州450046

福氏志贺菌(Shigella flexneri)是一种危害人类健康的食源性致病菌。该实验首先制备鲁米诺功能化花状纳米金和氨基化磁性纳米Fe_(3)O_(4),然后将福氏志贺菌适配体的互补序列(FSZ-2HH)连接在鲁米诺功能化花状纳米金的表面构建信号探针,... 详细信息

福氏志贺菌(Shigella flexneri)是一种危害人类健康的食源性致病菌。该实验首先制备鲁米诺功能化花状纳米金和氨基化磁性纳米Fe_(3)O_(4),然后将福氏志贺菌适配体的互补序列(FSZ-2HH)连接在鲁米诺功能化花状纳米金的表面构建信号探针,并将福氏志贺菌适配体(FSZ-1)通过亲和素的桥接作用修饰到氨基化磁性纳米Fe_(3)O_(4)表面构建捕获探针。当目标物存在时,目标物和信号探针会竞争性结合捕获探针,进而通过测定化学发光来达到检测目的。实验结果表明:在浓度2.6×10~2.6×10^(5) CFU/mL,福氏志贺菌的浓度与化学发光强度呈良好的线性关系,检出限为12 CFU/mL,特异性良好。该实验建立的方法为食品中福氏志贺菌的快速高灵敏检测提供了良好思路。

关键词：福氏志贺菌适配体传感器化学发光磁分离技术

福氏志贺菌PFGE和MLVA分子分型方法的应用与评价

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中国人兽共患病学报 2019年第3期35卷 245-249,253页

作者：杨劲松陈爱平陈建辉罗朝晨林杰郑恩惠福建省疾病预防控制中心福州350001 福建省人兽共患病研究重点实验室福州350001

目的比较和评价脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)和多位点可变数目串联重复序列分析技术(MLVA)在福建地区福氏志贺菌研究中的应用。方法运用PFGE和MLVA技术对43株分离自福建地区的福氏志贺菌进行分子分型,结合流行病学资料分析比较分型效果。结... 详细信息

目的比较和评价脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)和多位点可变数目串联重复序列分析技术(MLVA)在福建地区福氏志贺菌研究中的应用。方法运用PFGE和MLVA技术对43株分离自福建地区的福氏志贺菌进行分子分型,结合流行病学资料分析比较分型效果。结果 43株福氏志贺菌经PFGE分型后相似度在61.70%～100%之间,按照100%的相似水平可分为36个PFGE型,没有优势PFGE型别,分辨系数为0.992 2,存在4个优势簇(G1～G4);福氏志贺菌经MLVA分型后,按照100%的相似水平可分为41个MLVA型别,遗传关联度介于6.207%～100%之间,没有优势MLVA型别,分辨系数为0.997 8,得到5个优势基因群(Cluster1～5)。在最小生成树上,部分F4c与Fx亲缘关系较近,并都由F2a和F1a分支而来,表现出一定的遗传关系。结论两种分型方法的分辨率基本一致,PFGE分型结果与流行病学背景资料及血清型别基本吻合,MLVA在分析菌株种群进化关系上更具优势。

关键词：福氏志贺菌 PFGE MLVA 遗传进化

中国福氏志贺菌前噬菌体分布与基因组进化研究

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疾病监测 2023年第5期38卷 516-521页

作者：梁俊容金东杨晶卢珊熊衍文叶长芸徐建国中国疾病预防控制中心传染病预防控制所北京102206

目的前噬菌体是细菌基因组中重要可移动原件,在细菌毒力和宿主适应性方面发挥着重要作用。由噬菌体介导的福氏志贺菌血清型转化频繁发生,给志贺菌的监测、诊断和预防工作带来不便。为了探究我国福氏志贺菌基因组进化与其前噬菌体相关的... 详细信息

目的前噬菌体是细菌基因组中重要可移动原件,在细菌毒力和宿主适应性方面发挥着重要作用。由噬菌体介导的福氏志贺菌血清型转化频繁发生,给志贺菌的监测、诊断和预防工作带来不便。为了探究我国福氏志贺菌基因组进化与其前噬菌体相关的血清型别转换之间的关系,利用生物信息学方法将前噬菌体在福氏志贺菌基因组中的分布与进化进行关联分析。方法在中国17省(市、自治区)选取的294株福氏志贺菌具有丰富的血清型多态性。通过比较不同血清型福氏志贺菌基因组中原噬菌体及血清型转换噬菌体的覆盖度,统计分析其分布规律。结果部分菌株可携带多种前噬菌体,同一种前噬菌体也可分布在不同血清型菌株中;部分菌株虽携带血清型转换噬菌体却并未发生血清型转换事件。不同血清型转换噬菌体在福氏志贺菌进化树中成簇出现,表明该部分菌株出现了血清型集中转换现象。结论本研究有助于揭示前噬菌体的遗传多样性及与福氏志贺菌进化和血清型变异之间的关系,对预防和控制志贺菌的感染具有重要意义。

关键词：福氏志贺菌噬菌体血清型转换细菌基因组进化

福氏志贺菌核酸适配体的SELEX筛选及特异性研究

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中国食品学报 2020年第6期20卷 256-262页

作者：冯俊丽田小兰汪艺浙江工商大学海洋食品研究院杭州310012 浙江省水产品加工技术研究联合重点实验室杭州310012

为探究核酸适配体技术在食源性致病菌检测和鉴定方面的应用,以福氏志贺菌为研究对象,采用全细胞SELEX技术筛选与其特异性结合的适配体。经多轮正筛和反筛,共克隆得到17条序列,4条高频适配体(F-1、F-3、F-9和F-16)对福氏志贺菌有较高的... 详细信息

为探究核酸适配体技术在食源性致病菌检测和鉴定方面的应用,以福氏志贺菌为研究对象,采用全细胞SELEX技术筛选与其特异性结合的适配体。经多轮正筛和反筛,共克隆得到17条序列,4条高频适配体(F-1、F-3、F-9和F-16)对福氏志贺菌有较高的亲和力,其中F-1和F-9与福氏志贺菌的亲和力较高,相应的亲和常数Kd值分别为(51.3±3.25) nmol/L和(42.6±7.11) nmol/L。软件模拟F1和F9的二级结构,其最小自由能分别为-7.39 kcal/mol和-6.98 kcal/mol。本文首次筛选出对福氏志贺菌具有较高亲和特异性的适配体,为后续利用适配体进行食源性致病菌快速检测奠定了基础。

关键词：福氏志贺菌适配体亲和力 SELEX

福氏志贺菌O-抗原修饰及血清型转换机制研究进展

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中华流行病学杂志 2013年第7期34卷 750-753页

作者：罗霞孙强正徐建国中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京102206

志贺菌（Shigella）是菌性痢疾（菌痢）的主要病原菌。其感染病例主要发生在发展中国家，且多为5岁以下儿童。志贺菌属包含4个亚群，其中福氏志贺菌（Shigellaflexneri，B群）是包括中国在内发展中国家的优势血清群。根据细菌外膜脂多糖... 详细信息

志贺菌（Shigella）是菌性痢疾（菌痢）的主要病原菌。其感染病例主要发生在发展中国家，且多为5岁以下儿童。志贺菌属包含4个亚群，其中福氏志贺菌（Shigellaflexneri，B群）是包括中国在内发展中国家的优势血清群。根据细菌外膜脂多糖（LPS）的O-抗原结构差异，

关键词：福氏志贺菌 O-抗原修饰血清型转换血清型转换噬菌体质粒

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原儿茶醛对福氏志贺菌的抑制作用

中国食品学报 2021年第11期21卷 62-70页

作者：宋璐忆李佳辉王硕郭嘉璐邓海潮石超西北农林科技大学食品科学与工程学院陕西杨凌712100

为寻求安全、有效的福氏志贺菌控制方法,探究原儿茶醛对福氏志贺菌的抑制作用。测定原儿茶醛对福氏志贺菌的最小抑菌浓度、最小杀菌浓度以及其对菌体细胞形态、胞内ATP浓度、膜电位、菌体蛋白质合成和破坏及生长曲线的影响,结果表明:原... 详细信息

为寻求安全、有效的福氏志贺菌控制方法,探究原儿茶醛对福氏志贺菌的抑制作用。测定原儿茶醛对福氏志贺菌的最小抑菌浓度、最小杀菌浓度以及其对菌体细胞形态、胞内ATP浓度、膜电位、菌体蛋白质合成和破坏及生长曲线的影响,结果表明:原儿茶醛对福氏志贺菌的最小抑菌浓度为0.5 mg/mL,最小杀菌浓度为4.0 mg/mL。场发射扫描电镜观测到原儿茶醛使福氏志贺菌形态受损,菌体皱缩干瘪;原儿茶醛影响福氏志贺菌细胞膜的通透性,表现为质量浓度为2×MIC和4×MIC的原儿茶醛使细菌胞内ATP浓度显著降低,引起细菌膜电位超极化,破坏菌体蛋白质并抑制细胞蛋白质合成;原儿茶醛延长了福氏志贺菌的生长迟滞期,减小其最大生长速率。结论:原儿茶醛对福氏志贺菌具有良好的抑制作用,其有作为天然、安全的抑菌物质应用于食品工业中的潜力。

关键词：原儿茶醛福氏志贺菌细胞膜抑菌作用

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福氏志贺菌2型多重PCR检测方法的建立

中国畜牧兽医 2014年第8期41卷 34-39页

作者：朱阵王婧张继瑜魏小娟周绪正郭肖刘翠翠中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所兽药重点开放实验室甘肃兰州730050

为构建一种快速、高效、特异性强的检测与鉴定福氏志贺菌的多重PCR方法,本试验以不同血清型志贺菌中的特有基因ipaH、gtrⅡ、gtrⅩ和R002为扩增目标来设计相对应的引物,在同一PCR体系中对福氏志贺菌进行检测。通过一系列探索及对反应条... 详细信息

为构建一种快速、高效、特异性强的检测与鉴定福氏志贺菌的多重PCR方法,本试验以不同血清型志贺菌中的特有基因ipaH、gtrⅡ、gtrⅩ和R002为扩增目标来设计相对应的引物,在同一PCR体系中对福氏志贺菌进行检测。通过一系列探索及对反应条件的优化调整,最终建立了可在多种细菌中快速检测出福氏志贺菌2型(2a和2b)的方法。结果表明,应用多重PCR可快速、高效、准确的对福氏志贺菌进行验证和鉴别,对于预防实验室菌种污染和志贺氏菌病的临床诊断与治疗有着重要意义。

关键词：多重PCR 福氏志贺菌特有基因引物

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单宁酸抑制福氏志贺菌所致肠道炎症的研究

单宁酸抑制福氏志贺菌所致肠道炎症的研究

作者：岳学青黑龙江八一农垦大学

学位级别：硕士

志贺菌(Shigella)是一种能够引起人类和动物细菌性腹泻的主要致病菌。近些年随着抗生素大量应用于细菌性痢疾的治疗,志贺菌的耐药性也呈逐年增强的趋势,以耐头孢类和喹诺酮类为主。中药以其低成本、不易形成耐药性、药性缓和的特点逐渐... 详细信息

志贺菌(Shigella)是一种能够引起人类和动物细菌性腹泻的主要致病菌。近些年随着抗生素大量应用于细菌性痢疾的治疗,志贺菌的耐药性也呈逐年增强的趋势,以耐头孢类和喹诺酮类为主。中药以其低成本、不易形成耐药性、药性缓和的特点逐渐成为研究的热点。志贺菌主要定植于结肠组织造成黏膜损伤并引起黏液性血样腹泻。单宁酸(Tannic acid,TA)是中药五倍子的主要成分。虽然之前的报道一直将单宁酸作为抗营养因子,但近些年随着对单宁酸的深入研究,其杀菌抑菌的作用逐渐被发现。将单宁酸添加到动物日粮生产中可以改善细菌性腹泻,并具有抗氧化、抗癌、抗病毒的能力。本研究通过福氏志贺菌(Shigella flexneri,S.flex)细胞通透性试验,耐药基因试验,以及小鼠结肠炎症试验,探究了单宁酸对福氏志贺菌的抑菌机制、耐药机制以及抗炎症作用。在探究单宁酸对福氏志贺菌细胞通透性的影响方面。本研究从大庆市某养殖基地采集发病幼鹅新鲜粪便,分离得到福氏志贺菌。随后进行细菌最低抑菌浓度检测;碱性磷酸酶活性检测;DNA,RNA泄漏量和细菌细胞液电导率变化的测定。试验结果显示,经单宁酸作用后碱性磷酸酶活性、DNA,RNA泄漏量、细菌细胞液电导率均显著高于空白对照组。福氏志贺菌与单宁酸作用后,加入碘化丙啶溶液,在荧光倒置显微镜下观测碘化丙啶进入细胞内的情况。试验结果显示,经单宁酸作用后福氏志贺菌通透性发生改变,碘化丙啶穿过细胞膜进入细菌内部。通过PAGE电泳试验检测其可溶性蛋白的表达情况变化。结果显示,在单宁酸与细菌作用6小时后,福氏志贺菌可溶性蛋白表达受到了抑制。通过扫描电镜与透射电镜观测细胞形态及细胞破损情况变化。结果显示,细菌与单宁酸作用后多数福氏志贺菌的形态由杆状变为球形,单宁酸造成福氏志贺菌细胞膜损伤,内容物流出导致细菌死亡。在探究单宁酸对福氏志贺菌质粒所携带耐药基因的影响方面。本研究通过药敏试验检测福氏志贺菌对常见抗生素的耐药性。结果显示,福氏志贺菌对头孢类、喹诺酮类、磺胺类等均产生耐药性,但经单宁酸作用后福氏志贺菌对部分头孢类抗生素敏感性增强。PCR结果显示,福氏志贺菌含有TEM、CTX-M、qnr S、cat、int I1与trb C基因,经过与单宁酸作用后CTX-M-14基因表达受到抑制。在单宁酸抑制福氏志贺菌引起的小鼠结肠炎症方面。本研究采用30只C57雄性6周龄体重在19-20 g的小鼠进行结肠炎症模型建立。将小鼠分为空白对照组、模型组、给药组,其中给药组分为3个给药浓度分别为20 mg/kg、40 mg/kg、60 mg/kg,共5组每组6只。7天适应期后给药组分别灌胃不同浓度单宁酸,模型组与空白对照组给予等量生理盐水共7天。给药7天后模型组与给药组以1×10 CFU/m L福氏志贺菌,按每只小鼠0.1 m L的剂量进行灌胃。空白对照组灌胃等量生理盐水。给菌后,第三天麻醉处死小鼠,检测血清与结肠组织中IL-6、IL-8、TNF-?的表达水平,以及结肠组织病理变化。试验结果显示,血液和组织中炎性因子表达量,模型组显著高于其他4组(P福氏志贺菌细胞膜的完整性,抑制了福氏志贺菌可溶性蛋白的表达;降低了耐药基因的表达、提高了抗生素敏感性、缓解了福氏志贺菌引起的小鼠结肠炎症。

关键词：单宁酸福氏志贺菌抑菌机制炎症

福氏志贺菌2a型外膜蛋白A的生物信息学分析与重组表位疫苗分子的设计

同方学位论文库评论

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生物学杂志 2016年第3期33卷 99-103页

作者：刘祥陕西理工学院生物科学与工程学院汉中723001

福氏志贺菌外膜蛋白OmpA（outer membrane protein A）具有较强的免疫原性,在疫苗上有应用前景。采用MEGA（molecular evolutionary genetics analysis）软件对OmpA的系统发生分析显示,福氏志贺菌与肠道细菌间亲缘关系较其它菌属更近。... 详细信息

福氏志贺菌外膜蛋白OmpA（outer membrane protein A）具有较强的免疫原性,在疫苗上有应用前景。采用MEGA（molecular evolutionary genetics analysis）软件对OmpA的系统发生分析显示,福氏志贺菌与肠道细菌间亲缘关系较其它菌属更近。利用在线软件预测OmpA为亲水的分泌型蛋白,存在多个酶切位点;采用TMHMM（transmembrane hidden markov models）Server v.2.0程序预测OmpA无跨膜结构并定位于细胞膜外;SOPMA（self-optimized prediction method with alignment）服务器预测OmpA二级结构中含无规则卷曲41.09%,α-螺旋26.44%,β-转角10.06%,β-片层22.41%。通过Signal P 4.1软件分析显示,OmpA的1~21位氨基酸为信号肽序列。采用SwissModel程序预测的三维模型显示OmpA为桶装结构。利用ABCpred（artificial neural network based B-cell epitope prediction）和Bepi Pred（B-cell epitopes prediction）方案,预测OmpA存在3个B细胞表位。运用神经网络与量化矩阵法预测OmpA具有1个CTL表位。使用MHC-Ⅱ类分子结合肽在线程序预测显示OmpA具有1个Th表位。设计获得抗原性较好的OmpA蛋白重组表位多肽。为OmpA多表位串联疫苗的研究奠定基础。

关键词：福氏志贺菌 OmpA蛋白细胞表位蛋白结构