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神经鞘氨醇磷酸胆碱对原代培养人角质形成细胞DNA合成影响

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中国实验诊断学 2009年第9期13卷 1148-1149页

作者：朱明姬夏建新孙晶姜日花吉林大学中日联谊医院皮肤科吉林长春130033 吉林大学第二医院皮肤科

目的观察神经鞘氨醇磷酸胆碱(Sphingosylphosphorylcholine,SPC)对原代培养的人角质形成细胞DNA合成影响,并选择最适浓度。方法原代培养人角质形成细胞,加入不同浓度的SPC,之后测定3H-TdR掺入量。结果SPC的深度为2μM时,3H-TdR掺入量最... 详细信息

目的观察神经鞘氨醇磷酸胆碱(Sphingosylphosphorylcholine,SPC)对原代培养的人角质形成细胞DNA合成影响,并选择最适浓度。方法原代培养人角质形成细胞,加入不同浓度的SPC,之后测定3H-TdR掺入量。结果SPC的深度为2μM时,3H-TdR掺入量最高,当SPC的浓度超过2μM时3H-TdR掺入量有下降趋势,但SPC的浓度5μM时3H-TdR掺入量仍然很高。SPC的浓度为20μM时3H-TdR掺入量降到最低点。结论SPC浓度为2μM时促进原代培养的人角质形成细胞DNA合成能力最强,但浓度超过20μM时显示有细胞毒性。SPC在促进创伤愈合的治疗中将有很好的应用前景。

关键词：神经鞘氨醇磷酸胆碱角质形成细胞原代细胞培养

神经鞘氨醇磷酸胆碱对人真皮成纤维细胞表达MMP-1,MMP-3和TIMP-1的影响

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中国皮肤性病学杂志 2017年第2期31卷 136-139页

作者：时磊李玲燕付明婧宋智琦朴永君大连市第三人民医院皮肤科大连116033 大连医科大学附属第一医院皮肤科大连116011

目的研究神经鞘氨醇磷酸胆碱(shingosylphosphorylcholine,SPC)对体外培养人真皮成纤维细胞分泌基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶内源性组织抑制剂-1(TIMP-1)的影响,探索在促进皮肤创伤愈合方面SPC的... 详细信息

目的研究神经鞘氨醇磷酸胆碱(shingosylphosphorylcholine,SPC)对体外培养人真皮成纤维细胞分泌基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶内源性组织抑制剂-1(TIMP-1)的影响,探索在促进皮肤创伤愈合方面SPC的作用机制。方法通过MTT的方法检测SPC在成纤维细胞增殖效率方面的作用。利用RT-PCR和Western blotting的方法检测体外培养人真皮成纤维细胞经5μmol/L SPC诱导后,表达损伤修复相关蛋白MMP-1,MMP-3,TIMP-1的情况。结果一定浓度的SPC具有促进成纤维细胞增殖的作用。5μmol/L SPC具有上调成纤维细胞表达MMP-1,MMP-3,TIMP-1 m RNA和蛋白的作用(P<0.05)。结论实验证实体外培养人真皮成纤维细胞在经SPC干预后,其表达细胞外基质调节蛋白MMP-1,MMP-3,TIMP-1的作用得到增强,提示SPC具有促进皮肤创伤愈合的作用。

关键词：神经鞘氨醇磷酸胆碱成纤维细胞 MMPs TIMP-1 创伤愈合

神经鞘氨醇磷酸胆碱对人真皮成纤维细胞基因表达的影响

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中国皮肤性病学杂志 2009年第7期23卷 397-399页

作者：朱明姬朴永君姜日花吉林大学中日联谊医院皮肤科吉林长春130033 大连医科大学第一附属医院皮肤科辽宁大连116011

目的利用基因芯片技术分析神经鞘氨醇磷酸胆碱(SPC)对人真皮成纤维细胞基因表达谱的影响,从基因水平探讨其促进皮肤创伤愈合的机制。方法从经SPC处理和未处理的原代培养人皮肤成纤维细胞中抽提总RNA,制备cDNA芯片探针,与基因芯片进行杂... 详细信息

目的利用基因芯片技术分析神经鞘氨醇磷酸胆碱(SPC)对人真皮成纤维细胞基因表达谱的影响,从基因水平探讨其促进皮肤创伤愈合的机制。方法从经SPC处理和未处理的原代培养人皮肤成纤维细胞中抽提总RNA,制备cDNA芯片探针,与基因芯片进行杂交,扫描仪扫描芯片,扫描信号用GenPix pro3.0软件分析,利用CLASTER操作系统分析结果,TREEVIEW操作系统显示其结果,查阅SOURCE功能数据库进行每个基因的功能分析。结果基因芯片的8096个基因中有意义的信号位点为194个,按功能分为11类,表达增加1倍以上的基因为52个,表达减少50%以下的基因为49个,其中表达水平最高的基因为CTGF,其次为CYR61,IL-6等,均与创伤愈合有关。结论SPC可通过刺激成纤维细胞基因表达的变化,使成纤维细胞分泌一系列与皮肤创伤愈合有关的细胞因子,调控其增殖,从而促进创伤愈合。

关键词：神经鞘氨醇磷酸胆碱成纤维细胞基因芯片技术基因表达

神经鞘氨醇磷酸胆碱对原代培养人真皮成纤维细胞DNA合成影响

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中国实验诊断学 2004年第2期8卷 145-146页

作者：朱明姬蒋忠民丛宪玲丛建军李增勋陈远耀吉林大学中日联谊医院皮肤科长春130033 通话市人民医院大韩民国忠南大学医科大学医院皮肤科吉林大学基础医学院病理教研室

目的　观察神经鞘氨醇磷酸胆碱 (Sphingosylphosphorylcholine ,SPC)对原代培养人真皮成纤维细胞DNA合成的影响。方法　利用儿童包皮组织行人真皮成纤维细胞原代培养 ,采用不同浓度SPC处理培养的细胞 ,测定3H TdR掺入量。结果　SPC浓度... 详细信息

目的　观察神经鞘氨醇磷酸胆碱 (Sphingosylphosphorylcholine ,SPC)对原代培养人真皮成纤维细胞DNA合成的影响。方法　利用儿童包皮组织行人真皮成纤维细胞原代培养 ,采用不同浓度SPC处理培养的细胞 ,测定3H TdR掺入量。结果　SPC浓度为 2 μM时 ,3H TdR掺入量明显高于对照组 (P <0 0 5 ) ,5 μM时3H TdR掺入量达高峰 ,而后逐渐降低 ,2 0 μM时3H TdR掺入量为最低。结论　在一定浓度范围内SPC能明显促进原代培养人真皮成纤维细胞DNA的合成 ,在人类皮肤创伤愈合的治疗领域中。

关键词：神经鞘氨醇磷酸胆碱 SPC 真皮成纤维细胞 DNA合成细胞培养原代培养

SPC对人真皮成纤维细胞中MMP-1、MMP-2、MMP-3表达影响的研究

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SPC对人真皮成纤维细胞中MMP-1、MMP-2、MMP-3表达影响的研究

作者：胡珊大连医科大学

学位级别：硕士

目的:本实验采用人真皮成纤维细胞作为实验模型,研究神经鞘氨醇磷酸胆碱（sphingosylphosphorylchoine, SPC）对人真皮成纤维细胞中基质金属蛋白酶-1（MMP-1）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-3（MMP-3）表达的影响,探讨SP... 详细信息

目的:本实验采用人真皮成纤维细胞作为实验模型,研究神经鞘氨醇磷酸胆碱（sphingosylphosphorylchoine, SPC）对人真皮成纤维细胞中基质金属蛋白酶-1（MMP-1）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-3（MMP-3）表达的影响,探讨SPC促进皮肤创伤愈合作用机制。方法:采用组织块消化法培养人真皮成纤维细胞,取4-10代进行实验,利用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫印迹（Western blotting）的方法半定量检测经SPC诱导的人真皮成纤维细胞中MMP-1、MMP-2、MMP-3 mRNA水平和蛋白水平的表达。结果:采用组织块消化法培养人真皮成纤维细胞,与传统的消化法和组织法比较,成功率较高。SPC以时间梯度（2、6、12、24和48小时）诱导人真皮成纤维细胞后,RT-PCR结果显示,mRNA的表达水平产生了不同程度的变化,MMP-1、MMP-3在SPC作用2小时左右时逐渐升高,六小时左右达到高峰,维持一段时间后下降。MMP-2 mRNA的表达水平变化不显著。Western blotting分析显示,SPC对MMP-1、MMP-3蛋白水平的影响同样具有时间依赖性,MMP-2蛋白表达变化不明显。结论:SPC促进人真皮成纤维细胞MMP-1、MMP-3的表达,进而参与调节细胞外基质,可能为SPC促进皮肤创伤愈合的作用机制之一。

关键词：神经鞘氨醇磷酸胆碱成纤维细胞创伤愈合 MMPs

在人真皮成纤维细胞中SPC诱导TIMP-1的表达

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在人真皮成纤维细胞中SPC诱导TIMP-1的表达

作者：时磊大连医科大学

学位级别：硕士

皮肤创伤愈合是一种复杂的病理性组织再生过程,涉及一系列相互影响相互重叠的反应,其中包括首发的炎症反应、肉芽组织的形成、细胞外基质的产生以及新生组织的塑形。在皮肤创伤愈合过程中的每一步反应阶段都离不开真皮成纤维细胞的参与... 详细信息

皮肤创伤愈合是一种复杂的病理性组织再生过程,涉及一系列相互影响相互重叠的反应,其中包括首发的炎症反应、肉芽组织的形成、细胞外基质的产生以及新生组织的塑形。在皮肤创伤愈合过程中的每一步反应阶段都离不开真皮成纤维细胞的参与,成纤维细胞通过细胞的增殖、细胞外基质的合成和细胞迁移、粘附活动等方式帮助创伤愈合的完成,所以人真皮成纤维细胞在皮肤创伤愈合过程中有着不可替代的作用。国内外研究证实神经鞘氨醇磷酸胆碱(sphingosylphosphorylcholine, SPC)可促进皮肤创伤愈合。这可能与SPC具有促进多种参与皮肤创伤愈合相关细胞增殖水平的作用有关(如表皮角质形成细胞、真皮成纤维细胞、皮脂腺细胞、毛囊细胞及血管内皮细胞),以及促进血管再生、细胞迁移粘附、细胞骨架再生及其相关蛋白的表达有关。SPC可能通过与细胞膜表面受体特异性结合,作为第二信使激活信号传导途径,调节细胞因子活性,尽而发挥一系列生物学作用,参与皮肤的创伤愈合。但SPC促进皮肤创伤愈合过程中细胞生理状态和蛋白类物质表达的变化方面,进而涉及到具体机制方面还有待于进一步研究。皮肤创伤愈合过程中的组织重塑依赖于在基质金属蛋白酶(matrix matalloproteinase, MMPs)的作用下细胞外基质的重建过程,其中在一定的时期也受到基质金属蛋白酶内源性组织抑制剂(tissue inhibitors of metalloproteinase, TIMPs)的调控。MMPs/TIMPs体系的变化调节细胞外基质的沉积和降解之间的平衡。TIMPs通过结合MMPs,抑制其活性,进而影响正常细胞以及肿瘤细胞的增殖、迁移,特别是在创伤愈合过程中发挥着不可替代的作用。因此通过观察TIMP-1的表达变化可从一个方面猜想皮肤创伤愈合的效率。目的：研究神经鞘氨醇磷酸胆碱在体外培养人真皮成纤维细胞的增殖作用以及对创伤愈合相关蛋白TIMP-1表达的影响。探讨SPC发挥生物学作用的又一途径,进一步证实SPC促皮肤创伤愈合的作用。方法：取3个个体包皮环切术的包皮组织为组织来源,原代培养人真皮成纤维细胞,传代培养12代以内的单层成纤维细胞为研究对象。在体外细胞培养条件下,通过MTT方法检测SPC的浓度梯度(0.1,1,5,10,20μM)干预人真皮成纤维细胞增殖能力的影响。半定量RT-PCR检测各组人真皮成纤维细胞TIMP-1mRNA表达情况变化。Western blotting免疫印迹法鉴定人真皮成纤维细胞在SPC干预下TIMP-1蛋白表达水平的变化。结果：不同浓度的SPC对人真皮成纤维细胞增殖具有不同程度的促进作用,5μM组和10μM组增殖促进现象较对照组明显,且SPC促人真皮成纤维细胞的增殖情况存在对SPC的浓度依赖性,5μM组和10μM组增殖促进现象较对照组明显,SPC干预浓度与成纤维细胞增殖情况呈相关性(P<0.05)。RT-PCR结果显示5μM的SPC具有上调成纤维细胞TIMP-1 mRNA的表达作用,当SPC浓度达到20μM时,TIMP-1 mRNA的表达产生抑制作用,检测物OD值与B-actin OD值的比值对照组为0.768±0.339、5μM组为1.062±0.961、20μM组为0.490±0.138,P<0.05,表示差异有统计学意义。5μM的SPC以时间梯度(2、6、12、24和48小时)干预成纤维细胞后,TIMP-1 mRNA的表达水平产生了不同程度的变化,各组与无药物对照组相比6小时组、12小时组、24小时组TIMP-1 mRNA表达增强,OD值与B-actin OD值的比值对照组为0.357±0.636,6小时组为0.888±0.162,12小时组为0.761±0.156,24小时组为0.736±0.063,P<0.05,表示差异有统计学意义。SPC作用下TIMP-1 mRNA的表达水平增强呈现时间依赖性,OD值与B-actin OD值的比值对照组为0.357±0.636,6小时组为0.888±0.162,12小时组为0.761±0.156,24小时组为0.736±0.063,P<0.05,表示差异有统计学意义。依此可认为受SPC诱导的TIMP-1 mRNA表达的最佳作用时间为12小时左右。免疫印记实验显示SPC促进TIMP一1蛋白的表达,并同样呈现时间的依赖性。6小时组和12小时组P<0.05,24小时组与48小时组P<0.01,均表示差异有统计学意义。结论：***可促进人真皮成纤维细胞的增殖,且增殖情况与SPC浓度呈相关性。***具有调节人真皮成纤维细胞TIMP-1的表达作用,并以此参与调控皮肤的创伤愈合过程。

关键词：神经鞘氨醇磷酸胆碱成纤维细胞创伤愈合 TIMP-1

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皮肤科学基础

中国医学文摘（皮肤科学） 2006年第6期23卷 341-343页