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上皮钙黏蛋白和神经钙黏蛋白以及β连环蛋白在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义

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中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2016年第6期51卷 440-445页

作者：宋盼盼钱晓云周函沈晓辉刘丁丁冯安宁高下南京医科大学鼓楼临床医学院耳鼻咽喉头颈外科 210008 南京医科大学鼓楼临床医学院病理科 210008

目的检测上皮间质转化（Epithelial—mesenchymaltransition，EMT）标志物上皮钙黏蛋白（E—cadhefin，E—cad）、神经钙黏蛋白（N—cadherin，N—cad）、β-连环蛋白（β—catenin，β—cat）在喉鳞状细胞癌组织中的表达并分析其与临... 详细信息

目的检测上皮间质转化（Epithelial—mesenchymaltransition，EMT）标志物上皮钙黏蛋白（E—cadhefin，E—cad）、神经钙黏蛋白（N—cadherin，N—cad）、β-连环蛋白（β—catenin，β—cat）在喉鳞状细胞癌组织中的表达并分析其与临床病理特征及预后的关系。方法采用免疫组化方法检测76例喉癌组织及其对应的癌旁正常组织中E—cad、N—cad、β—cat蛋白的表达水平，分析其与各临床病理特征之间的关系，再结合临床随访资料，用Kaplan．Meier法绘制生存曲线，Log．rank法比较各组和预后的关系，Cox回归模型分析喉癌预后的独立预测因素。结果E—cad、N—cad、β-cat在癌和癌旁组织中的表达水平差异均有统计学意义（P〈0．001）。喉癌组织中E—cad表达水平与淋巴结转移、临床病理分期、分化程度有关（P〈0．05）；N—cad表达水平与临床病理分期、分化程度有关（P〈0．05）；t3-cat表达水平与淋巴结转移、临床病理分期、分化程度有关（P〈0．05）。E—cad与β—cat的表达相关（P=0．001），N—cad与β—cat的表达相关（P=0．02），而E—cad与N—cad的表达不相关。联合分析E—cad／N—cad：E—cad（＋）／N—cad（一）、E—cad（＋）／N—cad（＋）、E—cad（-）／N—cad（-）、E—cad（一）／N—cad（＋），各组的表达水平与临床病理分期及分化程度有关（P〈0．05）；同理联合分析E—cad／β-cat示各组的表达水平与淋巴结转移、临床病理分期及分化程度有关（P〈0．01）。Log-rank法分析表明，喉癌组织中E—cad、N—cad、β-cat阳性组与阴性组的预后差异有统计学意义（P〈0．05）；联合分析表明，E—cad／N—cad，E-cad／β-cat各组的预后差异亦有统计学意义（P〈0．01）。Cox回归模型分析表明，临床病理分期、β—cat是喉癌预后的独立预测因素，E—cad、N—cad表达水平不能单独预测疾病的预后。结论E-cad表达减低，N—cad、β-eat异常表达增高，在喉癌的发生、发展中起到重要的作用，可为评估临床预后提供参考；喉癌的临床病理分期、β-catenin可作为独立预测疾病预后的因子。

关键词：癌,鳞状细胞上皮钙粘蛋白神经钙粘蛋白 β-连环蛋白预后

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急性白血病患者N-cadherin、CD133-2表达及其临床意义

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临床肿瘤学杂志 2022年第10期27卷 927-931页

作者：苗玉迪胡星星李艳春陕西省人民医院血液内科西安710000 西安国际医学中心血液病医院实验诊断中心 710000

目的探讨神经钙粘蛋白(N-cadherin)、CD133-2在急性白血病中的表达及意义。方法选取2015年1月至2017年2月在我院治疗的急性白血病患者110例(观察组),同时选取健康志愿者60例作为对照组。流式细胞术检测Ncadherin、CD133-2表达,比较两... 详细信息

目的探讨神经钙粘蛋白(N-cadherin)、CD133-2在急性白血病中的表达及意义。方法选取2015年1月至2017年2月在我院治疗的急性白血病患者110例(观察组),同时选取健康志愿者60例作为对照组。流式细胞术检测Ncadherin、CD133-2表达,比较两组表达差异以及观察组不同临床病理特征患者表达情况,随访比较不同N-cadherin和CD133-2表达患者的预后情况。结果观察组N-cadherin、CD133-2阳性表达率为62.7%和46.4%,明显高于对照组(P 0.05);N-cadherin和CD133-2表达呈正相关(P<0.05)。N-cadherin和CD133-2阴性表达者中位总生存时间为27个月,明显长于N-cadherin和CD133-2双阳性表达、Ncadherin阳性表达、CD133-2阳性表达者(P<0.05)。Cox风险比例回归模型分析显示:年龄、N-cadherin和CD133-2表达是影响急性白血病患者OS的独立预后因素(P<0.05)。结论 N-cadherin、CD133-2在急性白血病表达上调,与患者预后有一定关系,值得进一步研究。

关键词：急性白血病神经钙粘蛋白 CD133-2 预后

水飞蓟宾抑制肝癌HepG2细胞侵袭和转移的作用及机制研究

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水飞蓟宾抑制肝癌HepG2细胞侵袭和转移的作用及机制研究

作者：陈惠云福建中医药大学

学位级别：硕士

目的:本课题首先以人肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)细胞株(HepG2)为模型,探讨水飞蓟宾是否抑制HCC HepG2细胞的侵袭和转移。其次,神经钙粘蛋白(N-cadherin)是恶性肿瘤细胞上皮-间充质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)的重要标志物。利用表皮生长因子(Epidermal growth factor,EGF)建立细胞EMT模型,研究水飞蓟宾是否通过抑制N-cadherin的表达而逆转EMT过程,进而抑制HCC的转移。在此基础上进一步研究水飞蓟宾对N-cadherin相关的信号通路蛋白的影响。方法:1.作用研究:采用MTT法观察水飞蓟宾对HepG2细胞的增殖抑制作用;采用细胞划痕实验和Transwell小室法观察水飞蓟宾对HepG2细胞迁移的作用;采用Transwell小室法检测水飞蓟宾对细胞迁移与侵袭能力的影响;通过RT-PCR方法检测迁移相关基因 Twist、Snail、Slug、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、基质金属蛋白酶-11(MMP-11)和MMP-13的表达水平;采用单因素方差分析方法比较不同浓度水飞蓟宾对细胞活力、细胞迁移距离的和迁移细胞个数的影响,并比较各组间 Twist、Snail、Slug、VEGF、MMP-11 和 MMP-13 的转率,以P钙粘蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)基因转录和表达水平的变化。最后,通过Western Blot方法检测水飞蓟宾对N-cadherin的下游蛋白ERK、Akt和MMP-9的表达。结果:1.作用研究:MTT检测结果显示不同浓度(30,60,120,240和480 μg/ml)水飞蓟宾可以抑制HepG2细胞增殖,抑制作用呈现剂量依赖和时间依赖性(P蛋白水平,进一步说明EGF能够上调EMT标志物Viment in和N-cadherin的表达,与对照组比较有显著性差异(p蛋白的表达。RT-PCR和Western Blot结果均说明,水飞蓟宾干预可以明显降低N-cadh-erin基因的转录和蛋白的表达;但对Vimentin基因的转录和蛋白的表达没有明显的作用。另外,Western Blot实验结果表明水飞蓟宾可以显著下调ERK和AK T的表达(p<0.05),对MMP-9的表达无显著作用。结论:(1)水飞蓟宾可抑制人HCCHepG2细胞的增殖,迁移和侵袭。(2)水飞蓟宾可下调细胞Twist、Snail、Slug、VEGF和MMP-13基因的表达。(3)在EGF诱导EMT模型后,水飞蓟宾能够通过抑制N-cadherin的表达,逆转EMT,抑制HCCHepG2细胞的迁移和侵袭。(4)水飞蓟宾可能通过ERK1/2和Akt通路抑制HCC HepG2迁移和侵袭。

关键词：肝癌水飞蓟宾上皮-间充质转化神经钙粘蛋白

鸡胚发育过程N-Cadherin和Neurofilament在脊髓中共表达模式的研究

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中国免疫学杂志 2013年第3期29卷 232-235页

作者：杨慈清杜蕊林俊堂赵善廷西北农林科技大学动物医学院杨陵712100 新乡医学院生命科学技术学院新乡453000 河南省医用组织再生重点实验室洛阳471000

目的:阐明鸡胚发育过程中神经钙粘蛋白(N-Cadherin)和神经丝蛋白(Neurofilament,NF)在脊髓中表达模式。方法:从鸡胚发育第3天(E3)开始到孵化出壳(P0),分别取材、固定、包埋和冰冻切片,采用荧光免疫组织化学法检测N-Cad-herin和NF蛋白表... 详细信息

目的:阐明鸡胚发育过程中神经钙粘蛋白(N-Cadherin)和神经丝蛋白(Neurofilament,NF)在脊髓中表达模式。方法:从鸡胚发育第3天(E3)开始到孵化出壳(P0),分别取材、固定、包埋和冰冻切片,采用荧光免疫组织化学法检测N-Cad-herin和NF蛋白表达时间和位置的变化。结果:在鸡胚发育过程,从E3开始,N-Cadherin在脊髓中便呈现阳性表达,E6-E8时达到高峰,E10开始降低,到出生P0在脊髓灰质中仍然呈阳性,而NF蛋白的表达与N-Cadherin具有相似之处,同样呈现时空性变化,但也存在表达区域差异。结论:N-Cadherin和NF在鸡胚脊髓发育过程的表达呈现时空性变化,在胚胎发育中期出现表达的高峰,随之减弱,直到出生仍然呈一定强度的表达。

关键词：胚胎发育神经钙粘蛋白神经丝蛋白表达模式脊髓

利用小鼠活体子宫内电转基因技术研究N-Cadherin对大脑皮层神经元迁移的影响

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利用小鼠活体子宫内电转基因技术研究N-Cadherin对大脑皮层神经元...

作者：付苏雷新乡医学院

学位级别：硕士

背景高等动物的大脑皮层是一个由多层神经细胞构成的、高度复杂而有序的复合体,它的形成是神经细胞由内及外的装配过程,这个过程受到严格的调控以确保建立正确的、有功能的大脑皮层。有研究表明,通过条件型基因敲除技术在小鼠胚胎... 详细信息

背景高等动物的大脑皮层是一个由多层神经细胞构成的、高度复杂而有序的复合体,它的形成是神经细胞由内及外的装配过程,这个过程受到严格的调控以确保建立正确的、有功能的大脑皮层。有研究表明,通过条件型基因敲除技术在小鼠胚胎时敲除N-Cadherin基因,会导致大脑皮层出现分层混乱,完全失去正常的层结构,这说明N-Cadherin在皮层发育中有着不可替代的作用。小鼠子宫内电转基因技术是近年来发展起来的在活体内研究基因功能的重要方法,特别适用于中枢神经系统基因功能研究。目的建立小鼠活体子宫内电转基因方法,利用该方法结合RNA干扰技术研究N-Cadherin在小鼠大脑皮层形成过程中对神经元迁移的影响。方法 1.小鼠活体子宫内电转基因：取怀孕15d的小鼠,以合适的电转条件对胎鼠大脑皮层室管膜进行定时定位活体电转基因,电转后24h取阳性胎脑,4%多聚甲醛固定,包埋后冷冻冠状切片,DAPI染细胞核观察组织形态结构变化,荧光免疫组织化学法检测α-SMA的表达差异。 2.活体电转报告基因质粒的选择：通过小鼠子宫内电转基因技术将pCAGGS-GFP, pEGFP-N1和pCL-GFP三种质粒转染到E15胎鼠的大脑皮层室管膜,通过统计三种质粒表达的荧光强度,筛选一个在活体表达荧光最强的质粒作为报告基因质粒;进一步将筛选出的质粒以不同浓度做电转比较,确定用于后续实验的合适浓度。 3. N-Cadherin异常表达质粒（超表达质粒和RNA干扰质粒）的构建与验证：对购自Addgene的小鼠N-Cadherin超表达质粒进行测序,分析质粒结构;小鼠N-Cadherin的RNA干扰质粒,首先通过在线设计干扰片段,然后交由公司合成构建;将异常表达质粒转染HEK293T细胞后,应用免疫荧光及Western blotting检测N-Cadherin表达量的变化,以此验证质粒表达的效率和强度。 4.通过小鼠活体子宫电转基因技术和RNA干扰技术相结合,在小鼠胚胎大脑皮层发育过程中实现对N-Cadherin的超表达和抑制表达,应用GFP示踪N-Cadherin超表达和抑制表达后神经元在大脑皮层发育过程中的迁移特征。 5.为了研究N-Cadherin是否对干细胞向神经细胞分化具有重要作用,本研究将培养至第六代小鼠脂肪间充质干细胞诱导成为类神经细胞,应用RT-PCR检测诱导后N-Cadherin及其相关蛋白β-catenin、ADAM17、ADAM9等的表达变化。结果 1.通过对各种转染条件的探索,成功建立了小鼠子宫内电转基因方法。GFP阳性表达胚胎的脑组织切片,显示GFP转染和正常区域的组织形态结构和a-SMA表达无显著差别。 2.通过三种质粒pCAGGS-GFP、pEGFP-N1和pCL-GFP在活体表达GFP荧光强度进行比较,发现相同摩尔浓度下pCAGGS-GFP在小鼠大脑皮层的荧光表达最强;其作为报告基因的适合浓度为0.25μg/μL～0.5μg/μL。 3.小鼠N-Cadherin的超表达质粒pEGFP-N-Cad转染HEK293T细胞后,细胞免疫荧光及Western blotting的结果表明,pEGFP-N-Cad能够实现小鼠N-Cadherin的超表达;同时由公司构建的两个干扰质粒N-Cad-shRNA1和shRNA2用同样的方法检测,结果表明两个干扰质粒均有干扰效果,但N-Cad-shRNA1干扰效果更优。 4.通过小鼠子宫内电转基因方法成功实现了N-Cadherin在小鼠大脑皮层的抑制表达和超表达,发现抑制N-Cadherin的表达导致大脑皮层神经细胞停滞在VZ区及SVZ区,不能正常迁移;而N-Cadherin的超表达对大脑皮层神经细胞的迁移未见明显影响。 5.将小鼠脂肪间充质干细胞体外诱导成类神经细胞后,观察到GFAP表达呈阳性,RT-PCR结果显示N-Cadherin表达显著升高,β-catenin、ADAM9和ADAM17表达显著降低。结论 1.成功建立了以GFP作为报告基因的小鼠子宫内电转基因方法。 2.筛选出一个在小鼠子宫内电转中适合作报告基因的质粒pCAGGS-GFP,并确定其最佳浓度。 3.筛选出一个能够有效干扰小鼠N-Cadherin表达的干扰序列,并获得了相应的干扰质粒。 4.在小鼠大脑皮层发育过程中,超表达N-Cadherin后未见对室管膜细胞迁移有明显影响,而干扰N-Cadherin的表达后则明显抑制其向外迁移,暗示N-Cadherin对室管膜神经细胞向外迁移具有重要作用。 5.体外诱导小鼠脂肪间充质干细胞成为类神经细胞后,发现N-Cadherin基因表达显著升高,而β-catenin、ADAM9和ADAM17则显著降低,暗示N-Cadherin可能与β-catenin、ADAM9和DAM17有着密切关系

关键词：子宫内电转 RNA干扰神经钙粘蛋白神经元迁移