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许旺细胞源神经营养蛋白的研究进展

中华显微外科杂志 2008年第4期31卷 314-316页

作者：邬江朱家恺庞水发中山大学第一附属医院显微外科广州市510080

外周神经损伤的修复是临床治疗的难题之一，尽管近年来采用了精细的显微外科技术及细胞外科技术较好地恢复了受损神经的连续性，但神经功能的恢复往往不能令人满意：迫使人们转向从神经再生的内在机制寻找解决途径：保护受损神经元免于... 详细信息

外周神经损伤的修复是临床治疗的难题之一，尽管近年来采用了精细的显微外科技术及细胞外科技术较好地恢复了受损神经的连续性，但神经功能的恢复往往不能令人满意：迫使人们转向从神经再生的内在机制寻找解决途径：保护受损神经元免于死亡，促进神经再生，加快神经功能恢复。自20世纪50年代神经生长因子被发现以来，包括NGFs、CNGF、GDNF、MDNF等在内的多种神经营养因子相继被发现与神经元存活及轴突再生密切相关。由于这些生长因子从多方面揭示了神经再生过程的分子机制，从而成为近10年来神经研究领域的热点。

关键词：神经营养蛋白细胞源神经功能恢复神经生长因子神经元存活外周神经损伤细胞外科技术显微外科技术

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三步法纯化雪旺细胞源神经营养蛋白

中华实验外科杂志 1999年第4期16卷 370-371页

作者：陈强朱家恺顾熊飞高贵中山医科大学附属第二医院显微外科

目的探索三步法纯化及获得雪旺细胞源神经营养蛋白的方法，为获得纯化蛋白进行单克隆抗体研究奠定基础。方法收集预损伤大鼠坐骨神经２００条，用酶消化结合差速粘附法纯化并收集其中雪旺细胞，将细胞超声粉碎、离心，收集上清液超滤，... 详细信息

目的探索三步法纯化及获得雪旺细胞源神经营养蛋白的方法，为获得纯化蛋白进行单克隆抗体研究奠定基础。方法收集预损伤大鼠坐骨神经２００条，用酶消化结合差速粘附法纯化并收集其中雪旺细胞，将细胞超声粉碎、离心，收集上清液超滤，再经ｓｅｐｈａｄｅｘＧ１００层析，得到两个主峰，分段收集，将其中活性部分过高效液相色谱柱。结果得到三个主峰，相对分子质量分别为６８×１０３、５４×１０３和３０×１０３，用ＭＴＴ法测定生物活性，５４×１０３蛋白生物活性最大，经ＳＤＳＰＡＧＥ电泳证实基本为单一蛋白带。结论应用三步法同时各步采用合适方案是纯化雪旺细胞源神经营养蛋白的较好方法。

关键词：雪旺细胞神经营养蛋白三步法纯化

雪旺细胞胞浆神经营养蛋白的分离纯化和理化性质测定

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中华显微外科杂志 1998年第2期21卷 115-117页

作者：刘黎军朱家恺顾熊飞广州市中山医科大学第一附属医院显微外科中山医科大学生化教研室

目的：分离纯化雪旺细胞胞浆神经营养蛋白并测定其等电点。方法：培养收集新生１－３天ＳＤ乳鼠四肢神经雪旺细胞，超声粉碎，超速离心，取上清胞浆成份超滤浓缩，收集分子量＞１０ＫＤａ浓缩蛋白液，通过ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ离... 详细信息

目的：分离纯化雪旺细胞胞浆神经营养蛋白并测定其等电点。方法：培养收集新生１－３天ＳＤ乳鼠四肢神经雪旺细胞，超声粉碎，超速离心，取上清胞浆成份超滤浓缩，收集分子量＞１０ＫＤａ浓缩蛋白液，通过ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ离子交换层析，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤层析和Ｄｉｏｌ－１５０高压液相分子筛层析进行分离纯化，等电聚焦电泳测定纯化的活性蛋白质等电点和ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其亚基分子量。结果：成功地分离纯化出一种活性蛋白质，分子量约５８ＫＤａ，等电点４．５５，结论：联合应用超滤浓缩、离子交换层析。

关键词：雪旺细胞神经营养蛋白分离纯化理化性质

雪旺氏细胞源神经营养蛋白的^(125)碘标记物制备与鉴定

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中国病理生理杂志 1999年第6期15卷 574-576页

作者：卢晓林朱家恺许扬滨刘长征中山医科大学附一院显微外科中山医科大学核医学教研室

雪旺氏细胞源神经营养蛋白（Ｓｃｈｗａｎｎ－ｃｅｌｄｅｒｉｖｅｄｎｅｕｔｒｏｐｈｉｃｐｒｏｔｅｉｎ，ＳＣＤＮＴＰ）是从雪旺氏细胞中提取的一种神经营养蛋白，分子量为５４×１０３，尤其对运动神经元有较强的营养支持和促进其... 详细信息

雪旺氏细胞源神经营养蛋白（Ｓｃｈｗａｎｎ－ｃｅｌｄｅｒｉｖｅｄｎｅｕｔｒｏｐｈｉｃｐｒｏｔｅｉｎ，ＳＣＤＮＴＰ）是从雪旺氏细胞中提取的一种神经营养蛋白，分子量为５４×１０３，尤其对运动神经元有较强的营养支持和促进其损伤后修复作用［１］。但ＳＣＤＮＴ...

关键词：雪旺氏细胞神经营养蛋白碘125标记物 SCDNTP

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雪旺细胞分泌神经营养蛋白的提纯

中华显微外科杂志 1997年第1期20卷 28-31页

作者：肖玉周朱家恺顾熊飞广州市中山医科大学中山医科大学附属第一临床学院显微外科蚌埠医学院附属医院骨科

目的：寻找出提纯神经营养蛋白的实用而有效的方法。方法：收集ＳＤ乳鼠周围神经的雪旺细胞无血清条件培养液，离心，将上清液超滤浓缩（ＰＭ１０）收集分子量大于１０ＫＤａ浓缩蛋白液，经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶过滤获得三个蛋... 详细信息

目的：寻找出提纯神经营养蛋白的实用而有效的方法。方法：收集ＳＤ乳鼠周围神经的雪旺细胞无血清条件培养液，离心，将上清液超滤浓缩（ＰＭ１０）收集分子量大于１０ＫＤａ浓缩蛋白液，经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶过滤获得三个蛋白峰，经生物活性检测，证明洗脱Ⅱ峰液生物活性最大。将冼脱Ⅱ峰液再经ＰＭ１０超滤膜浓缩收集浓缩蛋白液，分别用ＴＨＫ２４、ＴＴＫ２４微型过滤器去除大于１００ＫＤａ和小于３０ＫＤａ蛋白，过分子筛高效液相色谱柱。结果：得到４个主要蛋白峰，前三峰蛋白分子量均超过１５０ＫＤａ，第四峰分子量为６７ＫＤａ，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和银染色法进一步证实该蛋白分子量为６７ＫＤａ，基本为单一蛋白带。结论：Ｓｅｐｈａｄｅｘ凝胶过滤、多次超滤和分子筛高效液相色谱技术综合应用是纯化雪旺细胞源神经营养蛋白较好的方法。

关键词：雪旺细胞神经营养蛋白高效液相色谱

神经营养蛋白低亲和力受体p75^(NTR)的结合蛋白

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生命的化学 2003年第6期23卷 425-427页

作者：白氡陈虹黄秉仁中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

神经营养蛋白通过酪氨酸激酶受体Trk和低亲和力受体p75NTR发挥其多种生理功能。通过蛋白质相互作用的研究技术已确认了十多个与p75NTR相互作用的蛋白质分子 ,它们在结构和功能上都存在显著差异。

关键词：神经营养蛋白低亲和力受体p75^NTR 结合蛋白酪氨酸激酶受体生理功能肿瘤坏死因子

雪旺细胞无血清条件培养液中的神经营养蛋白活性

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现代临床医学生物工程学杂志 2003年第3期9卷 234-236页

作者：吴波以朱家恺顾熊飞广州医学院第二附属医院骨科广州510260

目的　进一步探测雪旺细胞无血清条件培养液中神经营养蛋白活性 .方法　收集成年大鼠坐骨神经雪旺细胞无血清条件培养液 (Schwanncellserum -freecondionedmedium ,SC -SFCM ) ,通过PM10超滤获取 >10Kd浓缩液 ,再经Disc -PAGE分离和Biot... 详细信息

目的　进一步探测雪旺细胞无血清条件培养液中神经营养蛋白活性 .方法　收集成年大鼠坐骨神经雪旺细胞无血清条件培养液 (Schwanncellserum -freecondionedmedium ,SC -SFCM ) ,通过PM10超滤获取 >10Kd浓缩液 ,再经Disc -PAGE分离和Biotrap电洗脱 ,从SC -SFCM中分离出A、B、C、D四组蛋白带 ,选择其最佳活性浓度 ,四组蛋白带按照 7种不同组合加入脊髓前角神经元 (SAHN)培养液中 ,通过MTT法进行神经营养活性检测 .结果　含D蛋白带的各组 ,其OD值均显著高于对照组 p 蛋白带的其它各组 ,其OD值与对照组比较无显著性差异 (p >0 .0 5 ) .结论　来自于SC

关键词：雪旺细胞培养液神经营养蛋白活性

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许旺细胞分泌的蛋白对运动神经元营养作用

中华显微外科杂志 2001年第3期24卷 189-191页

作者：肖玉周朱家恺顾熊飞中山医科大学第一附属医院显微外科中山医科大学生化教研室

目的　探讨许旺细胞分泌相对分子质量为 67× 10 3蛋白对培养脊髓运动神经元营养作用。　方法　提纯许旺细胞分泌相对分子质量为 67× 10 3蛋白 ,取 SD胎鼠 (12～ 14d)脊髓腹侧运动神经元培养 ,鉴定 ,将脊髓运动神经元与不同浓度的相对... 详细信息

目的　探讨许旺细胞分泌相对分子质量为 67× 10 3蛋白对培养脊髓运动神经元营养作用。　方法　提纯许旺细胞分泌相对分子质量为 67× 10 3蛋白 ,取 SD胎鼠 (12～ 14d)脊髓腹侧运动神经元培养 ,鉴定 ,将脊髓运动神经元与不同浓度的相对分子质量为 67× 10 3 蛋白液联合培养 ,用 MTT法检测该蛋白生物活性。　结果　许旺细胞源性蛋白 (67× 10 3 )在不同的浓度下吸光度 (A)值不同 ,显示明显的量效关系 ,其最佳活性浓度为 2 0 ng/ ml。　结论　许旺细胞分泌的相对分子质量为 67× 10

关键词：许旺细胞神经营养蛋白运动神经元

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骨髓基质细胞源性神经活性物质的提取与纯化

中国修复重建外科杂志 2005年第4期19卷 287-290页

作者：周立义洪光祥王发斌黄启顺翁雨雄华中科技大学同济医学院附属协和医院手外科武汉430022

目的　分离纯化骨髓基质细胞(marrow stromal cells,MSCs)胞浆中神经营养蛋白,并验证其神经活性作用。　方法　自小鼠股骨分离培养MSCs,超声粉碎后离心并收集其上清液,超滤浓缩后收集大于10 ku浓缩蛋白液。Sephadex G- 10 0层析、高效... 详细信息

目的　分离纯化骨髓基质细胞(marrow stromal cells,MSCs)胞浆中神经营养蛋白,并验证其神经活性作用。　方法　自小鼠股骨分离培养MSCs,超声粉碎后离心并收集其上清液,超滤浓缩后收集大于10 ku浓缩蛋白液。Sephadex G- 10 0层析、高效液相色谱分析(high performance liquid chromatography,HPL C)和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶不连续电泳(sodium dodecyl sulfate- polyacrylamide gel electropheresis,SDS- PAGE)等技术分离神经活性蛋白,培养脊髓运动神经元,通过MTT法及观察细胞形态来验证其神经活性作用。　结果　MSCs胞浆上清液经SephadexG- 10 0层析后发现, 峰对神经细胞生长有促进作用。对峰行HPL C分析发现,A峰对神经细胞生长有明显促进作用。对A峰行SDS- PAGE分析,提示为单一蛋白带,分子量为13ku。　结论　MSCs胞浆中含有神经营养蛋白,其分子量为13ku。

关键词：神经活性物质细胞源性 performance SDS-PAGE分析高效液相色谱分析 Sephadex 神经营养蛋白神经细胞生长聚丙烯酰胺凝胶十二烷基硫酸钠脊髓运动神经元提取骨髓基质细胞 MSCs HPLC分析活性作用 cells 分离纯化分离培养