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利用重组真核表达载体pCMV-p53转染wt p53基因及对大鼠C6胶质瘤细胞的热增敏效应

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浙江大学学报（医学版） 2009年第1期38卷 67-74页

作者：石键傅伟明张宏赵洪洋朱贤立浙江大学医学院附属第二医院神经外科浙江杭州310009 华中科技大学同济医学院附属协和医院神经外科湖北武汉430022

目的:探讨C6细胞在加热后的生物学行为改变及转染外源性野生型p53基因(wtp53)对C6胶质瘤热疗的影响。方法:提取与鉴定真核表达载体pCMV-p53,利用红色荧光蛋白确定转染质粒和脂质体的最佳比例。wtp53真核表达质粒稳定转染至大鼠C6胶质瘤... 详细信息

目的:探讨C6细胞在加热后的生物学行为改变及转染外源性野生型p53基因(wtp53)对C6胶质瘤热疗的影响。方法:提取与鉴定真核表达载体pCMV-p53,利用红色荧光蛋白确定转染质粒和脂质体的最佳比例。wtp53真核表达质粒稳定转染至大鼠C6胶质瘤细胞系,通过neo基因表达的检测确定目的基因转染的成功性。设置C6/p53(+)细胞组、C6细胞加热组、C6/p53(+)细胞加热组、反复加热后生长的热耐受C6细胞组和对照组,观察各组细胞的生物学行为及裸鼠接种成瘤率。对裸鼠皮下各组异种胶质瘤做激光间质热疗(laser interstitial thermotherapy,LITT)并比较抑瘤效果。结果:wtp53基因片断经正确鉴定和提取,转染质粒和脂质体的最佳转染比例为1∶6。neo基因稳定表达于转染了阳性质粒的C6细胞中。热耐受C6细胞的生长未受影响,C6/p53(+)细胞组生长速度减慢,加热组在加热12h后细胞增殖明显受影响,而C6/p53(+)细胞加热组的细胞增殖活性从6h起受到显著抑制;在C6/p53(+)细胞组、C6细胞加热组、C6/p53(+)细胞加热组中都可以观察到细胞凋亡形态学改变,流式细胞技术证实C6/p53(+)细胞加热组凋亡率增加最为明显,达对照组的30倍,差异有显著性(P瘤率均有下降,分别为75%、57%、20%,而热耐受C6细胞组为100%。C6/p53(+)裸鼠LITT组与假手术组疗效比较差异有显著性(P瘤效果在所有的LITT实验组最低。结论:p53基因可通过真核载体基因转染技术实现在C6细胞中稳定表达,并能在体内、外抑制大鼠C6胶质瘤细胞的生长,wtp53表达上调可增加C6细胞对加热的敏感性。

关键词：神经胶质瘤/病理学基因 p53 高温诱发脑肿瘤遗传载体转染重组遗传

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RNA致敏树突状细胞治疗胶质瘤的实验研究

浙江大学学报（医学版） 2007年第6期36卷 592-597页

作者：俞建波冯志仙詹仁雅童鹰马跃辉潘剑威浙江大学医学院附属第一医院浙江杭州310003

目的:肿瘤RNA致敏树突状细胞(DC)治疗颅内荷瘤小鼠,观察DC疫苗对脑胶质瘤的治疗作用,探讨免疫反应的机理,为DC疫苗的临床应用提供实验基础。方法:用G422胶质母细胞瘤RNA冲击致敏DC制成DC疫苗,检测DC疫苗的CTL活性,瘤内和皮下两种途径注... 详细信息

目的:肿瘤RNA致敏树突状细胞(DC)治疗颅内荷瘤小鼠,观察DC疫苗对脑胶质瘤的治疗作用,探讨免疫反应的机理,为DC疫苗的临床应用提供实验基础。方法:用G422胶质母细胞瘤RNA冲击致敏DC制成DC疫苗,检测DC疫苗的CTL活性,瘤内和皮下两种途径注射荷瘤小鼠以进行免疫治疗,观察小鼠生存期,并与PBS、单纯DC组进行比较,同时检测血清IFN-γ、IL-2、IL-10、IL-4等细胞因子,并行病理检查。结果:DC疫苗的CTL活性明显高于对照组(P病理提示肿瘤出现坏死。两种注射途径间以上指标无明显差异。结论:肿瘤RNA冲击致敏DC注射荷瘤小鼠具有明显的免疫治疗作用,能显著延长动物生存期,并能诱导特异性抗肿瘤细胞免疫反应,其机理主要是Th1细胞介导的细胞免疫反应,且免疫反应的程度与注射途径无关。

关键词：神经胶质瘤/病理学神经胶质瘤/治疗树突细胞/免疫学免疫疗法脑肿瘤/治疗疫苗/治疗应用细胞因子

外源性白介素24促进C6细胞凋亡的体外研究

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实用肿瘤杂志 2016年第2期31卷 122-126页

作者：李明辉赵静雅闫蕴力冯运章邯郸市中心医院普外二科河北邯郸056001 邯郸市中心医院病理科河北邯郸056001 河北医科大学细胞生物学教研室河北石家庄050017

目的探讨外源性白细胞介素24(interleukin 24,IL-24)体外抑制胶质瘤细胞增殖及促凋亡的相关机制。方法应用MTT体外观察转染IL-24对胶质瘤C6细胞增殖的抑制作用。应用Hoechst 33258荧光染色体外观察IL-24对C6细胞的促凋亡作用。Western b... 详细信息

目的探讨外源性白细胞介素24(interleukin 24,IL-24)体外抑制胶质瘤细胞增殖及促凋亡的相关机制。方法应用MTT体外观察转染IL-24对胶质瘤C6细胞增殖的抑制作用。应用Hoechst 33258荧光染色体外观察IL-24对C6细胞的促凋亡作用。Western blot法检测c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)和caspase-3蛋白的表达变化情况。结果 IL-24能使C6细胞的体外增殖能力降低,转入IL-24的C6细胞(C6/IL-24)增殖能力下降。经Hochest 33258染色,转入IL-24的C6细胞凋亡后出现核固缩、染色质凝集呈块或碎裂状改变。与转入空载体的C6细胞(C6/p LXSN)及C6细胞比较,C6/IL-24细胞的JNK和caspase-3蛋白表达均增高(均P0.05)。结论外源性IL-24基因可抑制C6胶质瘤细胞的增殖并诱导其凋亡,该诱导凋亡的作用可能与其上调并激活JNK及caspase-3表达有关。

关键词：神经胶质瘤/病理学白细胞介素类/药理学细胞系,肿瘤半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 JNK丝裂原活化蛋白激酶类细胞凋亡/药物作用细胞增殖/药物作用

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RGS5表达变化和大鼠胶质瘤生长的关系

实用肿瘤杂志 2017年第5期32卷 406-410页

作者：郝文炯王占伟郭晖邹有瑞蒋树财孙涛沈冰延安大学附属医院神经外科陕西延安716000 郑州市第七人民医院神经外科河南郑州450000 潍坊市人民医院神经外科山东潍坊261041 宁夏医科大学总医院神经外科宁夏回族自治区银川750004 滨州市人民医院神经外科山东滨州256600

目的探讨G蛋白信号调节因子5(regulator of G protein signaling 5,RGS5)表达变化与大鼠胶质瘤生长之间的关系。方法 72只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机平均分为胶质瘤组、生理盐水组、健康对照组、腺病毒-大鼠增殖抑制基因-绿色荧光蛋白... 详细信息

目的探讨G蛋白信号调节因子5(regulator of G protein signaling 5,RGS5)表达变化与大鼠胶质瘤生长之间的关系。方法 72只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机平均分为胶质瘤组、生理盐水组、健康对照组、腺病毒-大鼠增殖抑制基因-绿色荧光蛋白重组复合物(adenovirus-rat hyperplasia suppressor gene-green fluorescent protein,Adv-r HSG-GFP)组。胶质瘤组和Adv-r HSG-GFP组建立大鼠C6胶质瘤动物模型,生理盐水组颅内注射10μL生理盐水,健康对照组为健康大鼠。Adv-r HSG-GFP组在接种C6胶质瘤细胞后第4和11天,于肿瘤原位注射重组腺病毒Adv-r HSG-GFP。接种C6胶质瘤细胞后第9、15和21天取脑胶质瘤观察肿瘤的生长情况,免疫组织化学法检测RGS5蛋白的表达。结果 Adv-r HSG-GFP组肿瘤体积小于胶质瘤组(P瘤生长。接种后第15和21天胶质瘤组RGS5蛋白表达均高于生理盐水组、健康对照组和Adv-r HSG-GFP组(均P胶质瘤生长密切相关。

关键词：神经胶质瘤/病理学信号传导 GTP结合蛋白质类基因表达大鼠,Sprague-Dawley 疾病模型,动物

整合素αvβ3对胶质瘤细胞增殖和侵袭力影响的实验研究

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中华肿瘤防治杂志 2007年第19期14卷 1450-1453页

作者：艾文兵刘学勇熊志云陈玉宏雷霆三峡大学仁和医院神经外科湖北宜昌443001 华中科技大学同济医学院附属同济医院神经外科湖北武汉430030

目的:研究整合素αvβ3对胶质瘤细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:采用MTT比色法和增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(SABC)法,观察不同浓度的整合素αvβ3抗体对体外培养的C6胶质瘤细胞增殖的影响;建立Bo... 详细信息

目的:研究整合素αvβ3对胶质瘤细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:采用MTT比色法和增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(SABC)法,观察不同浓度的整合素αvβ3抗体对体外培养的C6胶质瘤细胞增殖的影响;建立Boyden小室细胞侵袭模型,观察不同浓度的整合素αvβ3抗体对体外培养的C6胶质瘤细胞侵袭能力的影响。结果:对照组A值(0.2135±0.0325)、肿瘤细胞增殖抑制率(0)分别与实验组A值(0.1687±0.0403、0.1194±0.0512和0.0823±0.0338)和肿瘤细胞增殖抑制率[(31.56±3.36)%、(45.21±5.32)%和(68.27±4.49)%]比较,差异有统计学意义,F值分别为14.75和19.46,P均胶质瘤细胞透膜细胞计数比较,差异有统计学意义,F值分别为20.34和13.23,P均胶质瘤的细胞增殖和侵袭性生长具有促进作用,其为抗整合素αvβ3治疗脑胶质瘤提供了实验依据。

关键词：整合素类/生物合成神经胶质瘤/病理学增殖细胞核抗原细胞,培养的鼠科

脑胶质瘤分子病因相关组织芯片CyclinB1表达及其临床意义的研究

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中华肿瘤防治杂志 2008年第13期15卷 972-975页

作者：霍红梅翟德忠朱卿王爱东兰青黄强苏州大学附属第二医院实验中心暨脑肿瘤研究室江苏苏州215004

目的:探讨CyclinB1在针对胶质瘤发生、发展相关组织芯片中的表达及意义。方法:构建针对人脑胶质瘤发生、发展分子机制研究的组织芯片,应用免疫组化EnVision法检测CyclinB1在组织芯片标本中的表达,分析其表达率及表达强度。结果:CyclinB... 详细信息

目的:探讨CyclinB1在针对胶质瘤发生、发展相关组织芯片中的表达及意义。方法:构建针对人脑胶质瘤发生、发展分子机制研究的组织芯片,应用免疫组化EnVision法检测CyclinB1在组织芯片标本中的表达,分析其表达率及表达强度。结果:CyclinB1染色阳性表达主要位于细胞核。在71例人脑胶质瘤组织中,CyclinB1阳性表达率为52.1%,与正常成人脑组织(18.2%)比较,差异有统计学意义(χ2=5.15,P胶质瘤组织CyclinB1阳性表达率分别为11.2%、44.0%、65.2%和71.4%;病理级别与CyclinB1的阳性表达率呈正相关(r=0.959,P胶质瘤细胞系多细胞球体SHG44细胞和GBM细胞的CyclinB1阳性表达率高于神经干细胞、脑肿瘤干细胞(χ2=9.60,P瘤和裸鼠骨髓中也呈过表达。结论:CyclinB1的表达强度能客观反映被测细胞的增殖活性,处于非增殖状态的干细胞低表达或不表达。它的高表达与肿瘤恶性程度相一致。

关键词：神经胶质瘤/病理学细胞周期蛋白质类/分析组织阵列分析免疫组织化学

PIAS3绿色荧光蛋白表达载体构建及其对胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响

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中华肿瘤防治杂志 2007年第11期14卷 830-833页

作者：纪华李光辉王东林胡义德陈正堂第三军医大学新桥医院全军肿瘤研究所重庆400037

目的:构建PIAS3绿色荧光蛋白真核表达载体,探讨外源性PIAS3对胶质瘤细胞U251周期和凋亡的影响。方法:利用RT-PCR扩增人全长PIAS3编码序列,并将其克隆到带有绿色荧光蛋白的真核表达载体pEGFP-N1中,得到重组质粒pEGFP-N1-PI-AS3。应用脂... 详细信息

目的:构建PIAS3绿色荧光蛋白真核表达载体,探讨外源性PIAS3对胶质瘤细胞U251周期和凋亡的影响。方法:利用RT-PCR扩增人全长PIAS3编码序列,并将其克隆到带有绿色荧光蛋白的真核表达载体pEGFP-N1中,得到重组质粒pEGFP-N1-PI-AS3。应用脂质体法转染体外培养的人胶质瘤U251细胞株。荧光显微镜观察蛋白表达,用RT-PCR和Westernblot检测PIAS3的表达,Annexin V2FITC和PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞增殖周期变化。结果:转染PIAS3基因的细胞株外源目的基因和蛋白表达增强,瞬时转染48 h后,光镜下可见部分细胞变圆,部分细胞脱落死亡;对照组和未转染组无明显变化。流式细胞仪分析显示,pEGFP-N1-PIAS3转染组凋亡细胞增多,细胞凋亡率显著高于未转染组和pEGFP-N1转染组,P=0.0073;U251细胞转染pEGFP-N1-PIAS3后细胞周期阻滞于S期,S期细胞比例增高,P=0.025,G2期细胞比例降低。结论:外源性PIAS3使U251阻滞在S期,诱导胶质瘤细胞凋亡。

关键词：脑肿瘤/病理学神经胶质瘤/病理学 PIAS3 基因转染细胞凋亡细胞周期

垂体瘤转化基因和血管内皮生长因子在胶质瘤中的表达及其相关性研究

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陕西医学杂志 2008年第1期37卷 24-27,55页

作者：王东戴如飞闫超蔡军李英斌南京医科大学附属南京第一医院神经外科南京210006 徐州医学院第二附属医院神经外科

目的:探讨胶质瘤中垂体瘤转化基因(PTTG)和血管内皮生长因子(VEGF)在胶质瘤中的表达以及二者之间的相关性。方法:将40例胶质瘤患者手术标本按病理级别分为级8例,级10例,级13例,级9例,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测PTTG及VEGFmRNA的... 详细信息

目的:探讨胶质瘤中垂体瘤转化基因(PTTG)和血管内皮生长因子(VEGF)在胶质瘤中的表达以及二者之间的相关性。方法:将40例胶质瘤患者手术标本按病理级别分为级8例,级10例,级13例,级9例,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测PTTG及VEGFmRNA的表达,免疫组化检测PTTG、VEGF蛋白的表达。结果:PTTG蛋白表达在～级的阳性率分别为37.5%,50.0%,76.9%,100.0%,其表达随着肿瘤级别的增高而增加(χ2=9.602,P瘤级别的增高而增加(P胶质瘤中起协同作用,二者共同促进胶质瘤的发生发展。

关键词：神经胶质瘤/病理学垂体肿瘤癌基因血管生长因子内皮,血管

苯丁酸钠对人脑胶质细胞瘤株SHG-44的抗肿瘤作用及机制研究

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实用肿瘤杂志 2004年第6期19卷 534-537页

作者：潘碧云许金泉陈亚红耿宝琴雍定国浙江大学医学院附属妇产科医院浙江杭州310006 富阳市中医院浙江富阳311400 杭州九源基因工程有限公司浙江杭州310018 浙江大学医学院药理教研室浙江杭州310006

目的　观察苯丁酸钠对人脑胶质细胞瘤株 SHG- 4 4细胞的体外生长抑制作用及细胞形态分化逆转 ,并观察其与常用抗癌药鬼臼噻吩甙 (VM- 2 6 )、顺铂 (DDP)、多柔比星 (阿霉素 )及卡莫司汀 (卡氮芥 ,BCNU)分别联用对 SHG- 4 4细胞生长的影... 详细信息

目的　观察苯丁酸钠对人脑胶质细胞瘤株 SHG- 4 4细胞的体外生长抑制作用及细胞形态分化逆转 ,并观察其与常用抗癌药鬼臼噻吩甙 (VM- 2 6 )、顺铂 (DDP)、多柔比星 (阿霉素 )及卡莫司汀 (卡氮芥 ,BCNU)分别联用对 SHG- 4 4细胞生长的影响和相互作用。方法　根据 MTT法来观察苯丁酸钠及该药与其它药物合用对 SHG- 4 4细胞生长的抑制 ;细胞形态变化直接在倒置显微镜下观察。结果　苯丁酸钠能抑制人脑胶质细胞瘤株 SHG- 4 4细胞的生长 ,其抑制作用呈浓度依赖性和时间依赖性。作用 72小时的 IC50 为 84 0 .4 μg/ m l。形态学观察显示 ,苯丁酸钠能使 SHG- 4 4细胞的突起明显增长 ,并重获细胞生长的接触抑制 ,促使细胞向成熟的胶质细胞分化 ,逆转其恶性表型。苯丁酸钠与 VM- 2 6联用为协同作用 (P0 .0 5 )。结论　苯丁酸钠能抑制 SHG- 4 4细胞的增殖 ,同时促进细胞向较成熟的胶质细胞分化 ;苯丁酸钠与 VM- 2 6联合应用 ,对 SHG- 4 4细胞的肿瘤抑制呈协同作用。

关键词：丁酸类/药理学神经胶质瘤/病理学脑肿瘤/病理学抗肿瘤药多剂联用比色法