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骨髓神经组织定向干细胞性组织工程化神经的构建

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解剖学杂志 2009年第1期32卷 86-89页

作者：任丛莉张志英刘芳张传森李亮第二军医大学解剖学教研室上海200433

目的:为临床周围神经损伤的移植治疗提供生物化的神经移植替代物。方法:将骨髓神经组织定向干细胞(NTC-SCs)种植于犬坐骨神经脱细胞神经支架,构建组织工程化神经,桥接缺损的大鼠坐骨神经,检测所构建生物化组织工程神经中骨髓NTCSCs的增... 详细信息

目的:为临床周围神经损伤的移植治疗提供生物化的神经移植替代物。方法:将骨髓神经组织定向干细胞(NTC-SCs)种植于犬坐骨神经脱细胞神经支架,构建组织工程化神经,桥接缺损的大鼠坐骨神经,检测所构建生物化组织工程神经中骨髓NTCSCs的增殖、分化及神经性基因表达,观察该神经移植到体内后的细胞增殖、分化及对神经缺损功能的修复。结果:由骨髓NTCSCs和异种脱细胞神经支架构建的生物化组织工程神经物理性状相似于神经移植体,骨髓NTCSCs在支架上增殖、迁移,并表达神经性基因及蛋白。该组织工程神经植入体内后,骨髓NTCSCs分化为少量神经元特异性烯醇化酶(NSE)阳性细胞及大量S-100阳性细胞,并可修复缺损的坐骨神经功能。结论:骨髓NTCSCs和异种脱细胞神经支架构建的生物化组织工程神经相似于神经移植体,可应用于周围神经损伤修复中。

关键词：神经组织定向干细胞组织工程脱细胞神经支架神经缺损坐骨神经

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骨髓神经组织定向干细胞的分离培养鉴定

解剖学杂志 2007年第4期30卷 435-437,486页

作者：任丛莉张志英李亮张传森党瑞山第二军医大学解剖学教研室上海200433

目的:为临床中枢神经系统疾患的细胞移植及组织工程修复周围神经提供一种应用广泛、可来源于自体、无免疫排斥和伦理道德等问题的移植用种子细胞。方法:采用DMEM/F12(1∶1)无血清神经干细胞培养液,通过先贴壁、后悬浮的方法从大鼠骨髓... 详细信息

目的:为临床中枢神经系统疾患的细胞移植及组织工程修复周围神经提供一种应用广泛、可来源于自体、无免疫排斥和伦理道德等问题的移植用种子细胞。方法:采用DMEM/F12(1∶1)无血清神经干细胞培养液,通过先贴壁、后悬浮的方法从大鼠骨髓中分离、培养单克隆生长的神经组织定向干细胞(neural tissue-committed stem cells,NTC-SCs),通过免疫细胞化学检测NTCSCs细胞球CXCR4和Nestin蛋白,以及细胞球自然分化后神经元β-TublinⅢ、MAP2ab以及神经胶质细胞CNPase、GFAP等蛋白的表达。结果:NTCSCs细胞球表达神经干细胞标志蛋白Nestin和组织定向干细胞标志蛋白CXCR4;NTCSCs细胞球在含15%胎牛血清的DMEM培养液中可自然分化,免疫荧光显示神经元和神经胶质蛋白β-TublinⅢ、MAP2ab、CNPase、GFAP等标志物阳性。结论:本研究提供了一种操作简便、成本低廉的NTCSCs的分离培养方法,NTCSCs作为种子细胞为脑、脊髓等神经系统疾患和创伤的修复和治疗提供了广阔的应用前景。

关键词：骨髓神经组织定向干细胞细胞分离细胞培养技术

脑缺血后移植骨髓神经组织定向干细胞的分布与分化

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解放军医学杂志 2012年第11期37卷 1031-1035页

作者：李琳张兴秀王健姜容郑敏重庆医科大学干细胞与组织工程研究室组织学与胚胎学教研室重庆400016 重庆医科大学附属第二医院神经内科重庆400016

目的观察骨髓神经组织定向干细胞(NTCSCs)经静脉移植后在脑缺血大鼠脑内的分布和分化情况。方法采用DMEM/F12(1:1)无血清神经干细胞条件培养基,从SD大鼠骨髓中分离、培养NTCSCs,应用免疫组化法对所获细胞及其分化情况进行鉴定,RT-PCR检... 详细信息

目的观察骨髓神经组织定向干细胞(NTCSCs)经静脉移植后在脑缺血大鼠脑内的分布和分化情况。方法采用DMEM/F12(1:1)无血清神经干细胞条件培养基,从SD大鼠骨髓中分离、培养NTCSCs,应用免疫组化法对所获细胞及其分化情况进行鉴定,RT-PCR检测Nestin、CXCR4、CD31、βⅢ-tubulin及GFAP mRNA的表达水平。采用改良Zea-Longa线栓法制作SD大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,造模成功24h后经尾静脉注射1ml DAPI标记的NTCSCs。移植后第1、3、5、7d处死大鼠,制备脑组织冰冻切片,荧光显微镜观察NTCSCs在脑组织的分布,激光共聚焦显微镜观察NTCSCs的分化情况。结果分离培养获得的NTCSCs在神经干细胞培养条件下形成神经球,并表达神经干细胞标志巢蛋白Nestin及SDF-1受体CXCR4,可分化成βⅢ-tubulin、GFAP阳性细胞;RT-PCR检测结果显示NTCSCs表达Nestin、CXCR4、CD31、βⅢ-tubulin、GFAP mRNA。静脉移植后NTCSCs能够进入大鼠脑内,移植后第3天观察到DAPI标记的NTCSCs主要分布在缺血损伤部位,第7天时有少量NTCSCs分化为GFAP阳性细胞。结论分离培养的NTCSCs具有神经干细胞特性,移植后可能进入缺血脑组织,部分细胞表达GFAP。

关键词：骨髓神经组织定向干细胞干细胞移植颅内栓塞

骨髓神经组织定向干细胞性组织工程化神经的实验研究

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骨髓神经组织定向干细胞性组织工程化神经的实验研究

作者：任丛莉第二军医大学

学位级别：硕士

目前,周围神经损伤缺乏理想的治疗方法,利用组织工程化神经进行替代治疗为该类疾病带来了希望,但是目前周围神经组织工程领域在种子细胞、支架材料和构建方法上都存在着不足。本研究从骨髓中分离并纯化了神经组织定向干细胞,并对其进行... 详细信息

目前,周围神经损伤缺乏理想的治疗方法,利用组织工程化神经进行替代治疗为该类疾病带来了希望,但是目前周围神经组织工程领域在种子细胞、支架材料和构建方法上都存在着不足。本研究从骨髓中分离并纯化了神经组织定向干细胞,并对其进行了鉴定,在此基础上将该细胞种植到脱细胞神经支架上构建组织工程化神经,并利用该组织工程构建物移植体内修复大鼠坐骨神经损伤。结果显示经骨髓组织定向干细胞性组织工程化神经桥接后再生神经已恢复传导功能。骨髓神经组织定向干细胞构建的组织工程化神经,不仅为损伤部位提供了充足的雪旺氏细胞,并且为损伤的修复提供了良好的微环境。表明神经组织定向干细胞是构建组织工程化神经理想的种子细胞,脱细胞神经支架可以作为组织工程化神经的支架材料。

关键词：神经组织定向干细胞脱细胞神经支架细胞移植组织工程化神经种子细胞周围神经损伤

骨髓神经组织定向干细胞移植修复噪声性聋豚鼠耳蜗毛细胞的实验研究

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临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2015年第17期29卷 1556-1560页

作者：张莹莹梁耕田刘莉卢岭刘金炎武汉市三医院耳鼻咽喉科武汉430060

目的:观察骨髓神经组织定向干细胞(NTCSCs)移植对噪声性聋听神经损伤豚鼠耳蜗毛细胞的修复作用。方法:将50只豚鼠按随机数字表法分为对照组(10只)、噪声暴露组(10只)和移植组(30只)。移植组及噪声暴露组豚鼠均在白噪声下暴露1周,暴露结... 详细信息

目的:观察骨髓神经组织定向干细胞(NTCSCs)移植对噪声性聋听神经损伤豚鼠耳蜗毛细胞的修复作用。方法:将50只豚鼠按随机数字表法分为对照组(10只)、噪声暴露组(10只)和移植组(30只)。移植组及噪声暴露组豚鼠均在白噪声下暴露1周,暴露结束后将转染绿色荧光蛋白(EGFP)基因的骨髓NTCSCs移植至豚鼠左耳耳蜗蜗轴处(右耳作为自身对照,注射相同体积的0.1%PBS溶液),分别测试噪声暴露前1d和暴露后1、2及4周后的ABR阈值,并通过扫描电镜观察噪声暴露后4周豚鼠耳蜗毛细胞的形态学变化情况。结果:成功分离培养出骨髓NTCSCs,随着移植时间的延长,转染EGFP的骨髓NTCSCs球团和细胞聚集现象,逐渐接近corti器和基膜;耳蜗切片中Nestin(+)细胞的数量明显增多(P细胞的数量无明显变化。与噪声暴露前相比,移植组豚鼠ABR阈移小于噪声暴露组(均P细胞均出现听毛紊乱、融合及缺失;而移植组耳蜗病变较轻,听毛仅有轻微倒伏、融合现象。结论:随着骨髓NTCSCs移植时间的延长,豚鼠ABR阈值得到明显改善。骨髓NTCSCs移植后可逐渐分化成耳蜗螺旋神经节神经元,进而起到改善噪声性聋豚鼠听力的作用。

关键词：神经组织定向干细胞聋噪声性毛细胞

骨髓神经组织定向干细胞移植治疗大鼠听神经损伤的实验研究

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中国耳鼻咽喉颅底外科杂志 2013年第6期19卷 481-484,490页

作者：张莹莹梁耕田刘莉卢岭刘金炎武汉市同仁医院耳鼻咽喉科湖北武汉430060

目的观察骨髓神经组织定向干细胞(nerve tissue committed stem cells,NTCSCs)移植治疗大鼠听神经损伤的作用。方法将60只SD大鼠按数字随机法分为5组,每组各12只,A组为对照组,在平静饲养环境下培养,另外4组(B、C、D、E组)构建感音神经... 详细信息

目的观察骨髓神经组织定向干细胞(nerve tissue committed stem cells,NTCSCs)移植治疗大鼠听神经损伤的作用。方法将60只SD大鼠按数字随机法分为5组,每组各12只,A组为对照组,在平静饲养环境下培养,另外4组(B、C、D、E组)构建感音神经性耳聋动物模型。B组大鼠断头后取出听泡组织行HE常规染色,详细观察耳蜗螺旋神经节神经元(spiral ganglion neurons,SGNs)损伤和内耳毛细胞存活情况,确认造模成功。将绿色荧光蛋白(green fluore scent protein,EGFP)基因表达阳性的骨髓NTCSCs注射至C、D、E 3组大鼠左耳耳蜗蜗轴处,SD大鼠右耳及A组作为对照;采用同一方法注射相同体积的0.1%PBS溶液。HE染色观察耳蜗中轴切片,在荧光显微镜下观察转染EGFP基因的NTCSCS存活、分布部位及表达情况。结果 C组(移植后1周)内耳耳蜗切片上发现转染绿色荧光蛋白(green fluore scent protein,EGFP)基因的骨髓NTCSCs分散在鼓阶的腔隙内,D组(移植后2周)发现转染EGFP基因的骨髓NTCSCs位置靠近基底膜和柯蒂氏器部位,E组(移植后4周)发现转染EGFP基因的骨髓NTCSCs球团和多个在一起的细胞聚集,并且位置靠近基底膜和柯蒂氏器部位,呈现良好的分布,类似有向基底膜和柯蒂氏器迁移行为。随着骨髓NTCSCs移植时间的延长,Nestin(+)细胞数量明显增多(P细胞数量无明显变化(P>0.05)。结论骨髓NTCSCs移植大鼠耳蜗后可在一定程度上修复损伤听神经。

关键词：神经组织定向干细胞感音神经性耳聋听神经病螺旋神经节神经元

骨髓神经组织定向干细胞移植对听神经损伤大鼠听力的修复作用

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现代医学 2013年第12期41卷 890-893页

作者：张莹莹梁耕田刘莉卢岭刘金炎武汉市同仁医院武汉市第三医院耳鼻喉科湖北武汉430060

目的:探讨骨髓神经组织定向干细胞(NTCSCs)移植对听神经损伤大鼠听力的修复作用。方法:将转染绿色荧光蛋白(EGFP)基因的骨髓NTCSCs移植至螺旋神经元特异性损伤模型大鼠左耳耳蜗蜗轴处(右耳作为自身对照,注射相同体积50μl PBS溶液),同... 详细信息

目的:探讨骨髓神经组织定向干细胞(NTCSCs)移植对听神经损伤大鼠听力的修复作用。方法:将转染绿色荧光蛋白(EGFP)基因的骨髓NTCSCs移植至螺旋神经元特异性损伤模型大鼠左耳耳蜗蜗轴处(右耳作为自身对照,注射相同体积50μl PBS溶液),同时设实验对照组(注射相同体积50μl PBS溶液),注射后1周、2周、1个月时检测听性脑干反应(ABR)阈值和畸变产物耳声发射(DPOAE)幅值等变化情况。结果:随着骨髓NTCSCs移植时间的延长,ABR阈值得到明显改善(P神经损伤大鼠的听力。

关键词：神经组织定向干细胞感音神经性聋听神经病螺旋神经节神经元大鼠

骨髓神经组织定向干细胞移植修复听神经损伤模型大鼠的实验研究

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山东大学耳鼻喉眼学报 2013年第5期27卷 32-36页

作者：张莹莹梁耕田刘莉卢岭刘金炎武汉市第三医院耳鼻喉科武汉430060

目的观察骨髓神经组织定向干细胞(NTCSCs)移植对听神经损伤大鼠的修复作用。方法将转染绿色荧光蛋白(EGFP)基因的骨髓NTCSCs移植至螺旋神经元特异性损伤模型大鼠左耳耳蜗蜗轴处(右耳作为自身对照,注射相同体积PBS溶液),同时设对照组(A组... 详细信息

目的观察骨髓神经组织定向干细胞(NTCSCs)移植对听神经损伤大鼠的修复作用。方法将转染绿色荧光蛋白(EGFP)基因的骨髓NTCSCs移植至螺旋神经元特异性损伤模型大鼠左耳耳蜗蜗轴处(右耳作为自身对照,注射相同体积PBS溶液),同时设对照组(A组)、实验组(B^E组),所有组注射相同体积PBS溶液,HE染色观察耳蜗中轴切片,在荧光显微镜下观察感染EGFP的NTCSCs存活、分布部位及表达情况,注射后1周、2周、1个月时检测ABR阈值和DPOAE幅值等变化情况。结果 C组内耳耳蜗切片上发现转染EGFP基因的骨髓NTCSCs分散在鼓阶的腔隙内,D组发现转染EGFP基因的骨髓NTCSCs位置靠近基底膜和柯蒂氏器部位,E组发现转染EGFP基因的骨髓NTCSCs球团和两三个在一起的细胞聚集,并且位置靠近基底膜和柯蒂氏器部位,呈现良好的分布,类似有向基底膜和柯蒂氏器迁移行为;随着骨髓NTCSCs移植时间的延长,Nestin(+)细胞数量明显增多(P细胞数量无明显变化(P>0.05);随着骨髓NTCSCs移植时间的延长,ABR阈值得到明显改善(P神经节神经元(SGNs),进而起到改善听神经损伤大鼠听力的作用。

关键词：神经组织定向干细胞感音神经性耳聋听神经病螺旋神经节神经元