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神经病靶标酯酶与内质网和脂滴的相互作用研究

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神经病靶标酯酶与内质网和脂滴的相互作用研究

作者：何琳重庆邮电大学

学位级别：硕士

作为内质网(endoplasmic reticulum,ER)上的磷脂酶,神经病靶标酯酶(neuropathy target esterase,NTE)催化磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine,PC)和溶血磷脂酰胆碱(lysophosphatidylcholine,LPC)的脱酰基反应。内质网是细胞内脂肪储存细胞器——脂滴(lipid droplet,LD)形成的场所。PC和LPC的代谢与LD的生物发生、脂肪代谢密切相关。本文对NTE与ER、LD的定位进行了深入研究,借助靶向定量脂质组学技术揭示NTE催化区表达对细胞脂质代谢的作用,获得了以下研究结果:1.NTE的N端跨膜结构域足以将NTE定位在内质网上。N端调节域虽然对NTE在内质网上的正常分布起着一定作用,但其并不与内质网结合。调节域对NTE正常内质网定位的作用与其中的3个环核苷酸结合结构域有关。虽然每个环核苷酸结合结构域不是NTE正常内质网定位所必需的,但是它们之间可能存在协同作用,从而影响NTE的正常内质网分布。2.NTE并不结合脂滴,这是由于N端的跨膜结构域始终将其镶嵌在内质网膜上,调节域阻碍着催化域与脂滴结合。相反,NTE的C端催化域,即NTE酯酶活性区(NTE esterase domain,NEST)能与脂滴结合。在人神经母细胞瘤细胞(SK-N-SH)中,NEST的表达影响脂滴形成,抑制脂滴的融合生长。3.NTE的敲减并不影响细胞内脂肪(triacylglycerol,TG)水平和脂滴形成,NEST的稳定表达却能促进细胞内TG的积累。4.靶向定量脂质组学研究发现,NEST的超表达直接降低SK-N-SH细胞内LPC水平,而不改变PC含量。NEST超表达主要是降低了含长链(C原子数量在13-20)、饱和、单不饱和脂肪酰基的LPC水平;同时促进了细胞内TG生成,特别是含油酰基脂肪生成;降低了细胞内脂肪酸(fatty acids,FA)水平,特别是长链和超长链的多不饱和FA。此外,NEST的表达还广泛地影响着其他LPC、PC、神经酰胺、鞘磷脂及胆固醇的代谢。定量PCR结果表明,NEST的表达对细胞脂肪代谢的作用,主要是通过增加二酰基甘油酰基转移酶(diacylglycerol acyltransferase,DGAT)和过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptor,PPAR)基因的表达来实现。这些结果深入阐明了NTE与内质网和脂滴的定位关系,全面揭示了NTE的催化活性增加对细胞脂质代谢的作用,进一步阐明了NTE的结构、亚细胞定位和催化功能。

关键词：内质网脂滴脂质代谢神经病靶标酯酶结构域

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神经病靶标酯酶的调节与功能

生命的化学 2006年第4期26卷 313-315页

作者：常平安温镭杨召军重庆邮电大学生物信息学院重庆400065

神经病靶标酯酶(NTE)是一种只催化经CDP-胆碱途径合成的卵磷脂的磷脂酶B,其表达可能受着卵磷脂、环腺苷酸和泛素-蛋白酶体途径的调节。NTE不仅对于胚胎发育和神经系统中非常重要,还在细胞增殖和细胞分化中起着一定的作用。有机磷酸酯可... 详细信息

神经病靶标酯酶(NTE)是一种只催化经CDP-胆碱途径合成的卵磷脂的磷脂酶B,其表达可能受着卵磷脂、环腺苷酸和泛素-蛋白酶体途径的调节。NTE不仅对于胚胎发育和神经系统中非常重要,还在细胞增殖和细胞分化中起着一定的作用。有机磷酸酯可能通过抑制NTE,破坏膜脂稳态,阻碍神经细胞内的物质运输引发轴突损伤的迟发性神经病。

关键词：神经病靶标酯酶有机磷引起的迟发性神经病

神经病靶标酯酶调控结构域结合蛋白筛选及其在COS-7细胞中的表达

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动物学报 2005年第5期51卷 840-844页

作者：陈瑞杨琳姚智刘承云李晓华李琴刘杰常平安李薇伍一军中国科学院动物研究所农业虫害鼠害综合治理研究国家重点实验室中国科学院研究生院北京100039

本研究采用酵母双杂交系统探寻与神经病靶标酯酶(NTE)调控结构域相互作用的蛋白因子,揭示与NTE信号转导相关的可能机制。通过构建含有NTE调控结构域的诱饵蛋白载体筛选胎脑文库,并将筛选得到的阳性克隆在酵母中进行了验证,随后在哺乳动... 详细信息

本研究采用酵母双杂交系统探寻与神经病靶标酯酶(NTE)调控结构域相互作用的蛋白因子,揭示与NTE信号转导相关的可能机制。通过构建含有NTE调控结构域的诱饵蛋白载体筛选胎脑文库,并将筛选得到的阳性克隆在酵母中进行了验证,随后在哺乳动物细胞中表达了该蛋白。生物信息学分析显示:该阳性克隆为前列腺素受体结合蛋白54(ARA54),具有泛素连接酶活性,提示细胞可能存在依赖于细胞周期的NTE活性调节机制,为阐明NTE生理功能创造了条件[动物学报51(5):840-844,2005]。

关键词：神经病靶标酯酶酵母双杂交系统泛素 ARA54

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神经病靶标酯酶的特性

生命的化学 2004年第5期24卷 424-426页

作者：常平安伍一军中国科学院动物研究所整合生物学研究中心

神经病靶标酯酶 (NTE)是在研究有机磷引起的迟发性神经病的过程中被发现的。研究表明 ,NTE是一种主要存在于神经元内质网上的跨膜蛋白 ,其本质是具有磷脂酶B催化功能的磷脂酶 ,在细胞内调节磷脂酰胆碱的代谢。NTE是哺乳动物胚胎发育所... 详细信息

神经病靶标酯酶 (NTE)是在研究有机磷引起的迟发性神经病的过程中被发现的。研究表明 ,NTE是一种主要存在于神经元内质网上的跨膜蛋白 ,其本质是具有磷脂酶B催化功能的磷脂酶 ,在细胞内调节磷脂酰胆碱的代谢。NTE是哺乳动物胚胎发育所必需的蛋白质 ,脑特异性缺失NTE会导致神经退行性症状的出现。NTE作为有机磷的作用位点 ,在不同的生物中可能通过不同的机制引发不同的毒性症状。

关键词：神经病靶标酯酶 NTE 有机磷迟发性神经病毒性症状神经退行性症状

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神经病靶标酯酶相关性运动神经元疾病

中南医学科学杂志 2012年第6期40卷 624-626,634页

作者：常新荣龙鼎新常平安柳钢医院神经内科广西柳州545002 南华大学公共卫生学院重庆邮电大学生物信息学院

神经病靶标酯酶(NTE)作为有机磷酸酯的靶标是在有机磷酸酯诱导的迟发性神经毒性(OPIDN)中被发现的,然而近年发现NTE基因的突变与一种运动神经元疾病(MND)的发生相关。本文就NTE、NTE突变引起的MND以及NTE突变引起MND的机制等方面进行了... 详细信息

神经病靶标酯酶(NTE)作为有机磷酸酯的靶标是在有机磷酸酯诱导的迟发性神经毒性(OPIDN)中被发现的,然而近年发现NTE基因的突变与一种运动神经元疾病(MND)的发生相关。本文就NTE、NTE突变引起的MND以及NTE突变引起MND的机制等方面进行了综述。

关键词：神经病靶标酯酶运动神经元疾病基因突变

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神经病靶标酯酶与Gβ2蛋白的相互作用

神经病靶标酯酶与Gβ2蛋白的相互作用

神经病靶标酯酶的增强表达抑制哺乳动物细胞的增殖

中国毒理学会第四届全国学术会议

作者：陈瑞刘承芸杨琳常平安李薇伍一军中国科学院动物研究所分子毒理学实验室中国科学院动物研究所分子毒理学实验室中国科学院动物研究所分子毒理学实验室中国科学院动物研究所分子毒理学实验室中国科学院动物研究所分子毒理学实验室中国科学院动物研究所分子毒理学实验室

＜正＞目的神经病靶标酯酶（NTE）被认为是有机磷引发迟发性神经毒性（OPIDN）的主要作用靶标,但NTE 的生理功能并不清楚,妨碍了对OPIDN发生机制的阐明。本研究从信号转导角度出发,以期阐释NTE的生理功能,为揭示OPIDN的产生机制提供依... 详细信息

＜正＞目的神经病靶标酯酶（NTE）被认为是有机磷引发迟发性神经毒性（OPIDN）的主要作用靶标,但NTE 的生理功能并不清楚,妨碍了对OPIDN发生机制的阐明。本研究从信号转导角度出发,以期阐释NTE的生理功能,为揭示OPIDN的产生机制提供依据。方法将NTE蛋白催化活力端对应的cDNA片断克隆至pGBKT7质粒形成诱饵蛋白表达质粒,用酵母双杂交（Y2H）方法筛选人胎脑文库,对筛选到的阳性克隆测序鉴定;用免疫共沉淀验证筛选到的相互作用, 并在分子水平上对这种相互作用相关的生物学功能进

关键词：神经病靶标酯酶 Gβ2 PMA 蛋白激酶C

来源： cnki会议评论

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神经病靶标酯酶的增强表达抑制哺乳动物细胞的增殖

反向重复序列法构建神经病靶标酯酶RNA干涉表达质粒

中国环境诱变剂学会抗诱变剂和抗癌剂专业委员会第三次全国学术会议、中国毒理学会生化与分子毒理专业委员会第五届学术交流会、贵州省环境诱变剂学会成立大会暨首届学术交流会

作者：常平安陈瑞李薇伍一军中国科学院动物研究所分子毒理学实验室

目的:探索神经病靶标酯酶(NTE)在哺乳动物细胞中的生理功能。方法:通过基因重组构建NTE酯酶活性区段(NEST)和GFP标记的NTE表达载体,转染哺乳动物细胞COS-7和人成神经瘤细胞SK-N-SH,利用蛋白质杂交和酶活测定检测NEST和NTE重组载体在细... 详细信息

目的:探索神经病靶标酯酶(NTE)在哺乳动物细胞中的生理功能。方法:通过基因重组构建NTE酯酶活性区段(NEST)和GFP标记的NTE表达载体,转染哺乳动物细胞COS-7和人成神经瘤细胞SK-N-SH,利用蛋白质杂交和酶活测定检测NEST和NTE重组载体在细胞中的表达。用激光共聚焦显微镜观察外源性NTE表达对细胞结构的影响,MTT法测定NTE表达对细胞增殖的作用和对细胞分化的影响以及流式细胞术检测

关键词：神经病靶标酯酶哺乳动物细胞增殖分化细胞周期

来源： cnki会议评论

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毒理学杂志 2007年第1期21卷 4-8页

作者：常平安伍一军重庆邮电学院生物信息学院重庆400065 中国科学院动物研究所

目的构建基于通用真核表达载体的人神经病靶标酯酶双链RNA的稳定表达载体。方法在正义和反义引物两端分别加上EcoRⅠ和BamHⅠ的识别位点扩增得到神经病靶标酯酶活力域序列,构建含有目标基因的倒置重复序列的双链RNA表达载体pcDNA.NTE.ds... 详细信息

目的构建基于通用真核表达载体的人神经病靶标酯酶双链RNA的稳定表达载体。方法在正义和反义引物两端分别加上EcoRⅠ和BamHⅠ的识别位点扩增得到神经病靶标酯酶活力域序列,构建含有目标基因的倒置重复序列的双链RNA表达载体pcDNA.NTE.dsRNA,酶切分析鉴定重组载体。脂质体法转染到Hela细胞中瞬时表达重组载体,酶活力测定其对细胞内神经病靶标酯酶活力的影响。结果成功构建了NTE双链RNA稳定表达载体pcDNA.NTE.dsRNA,表达该载体细胞内NTE活力明显下降至对照细胞的20%左右。结论采用反向重复序列法将靶标基因的编码序列正反向插入到通用真核细胞表达载体中,是构建哺乳细胞基因双链RNA稳定表达载体的有效方法。

关键词：神经病靶标酯酶 RNA干涉表达载体反向重复序列

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神经病靶标酯酶与Gβ2蛋白的相互作用

毒理学杂志 2005年第A3期19卷 212-212页

作者：陈瑞刘承芸杨琳常平安李薇伍一军中国科学院动物研究所分子毒理学实验室

目的神经病靶标酯酶(NTE)被认为是有机磷引发迟发性神经毒性(OPIDN)的主要作用靶标,但NTE的生理功能并不清楚,妨碍了对OPIDN发生机制的阐明.本研究从信号转导角度出发,以期阐释NTE的生理功能,为揭示OPIDN的产生机制提供依据.

关键词：神经病靶标酯酶 Gβ2 PMA 蛋白激酶C