检索结果-南通市图书馆

作者：周于用四川农业大学

学位级别：硕士

乙型脑炎病毒（JEV）是流行性乙型脑炎的病原体。本研究旨在进行JEV关键毒力位点分析、鉴定E-I176R（E蛋白第176位氨基酸由异亮氨酸突变为精氨酸）突变位点能否影响其神经毒力。首先,分析预测了JEV神经毒力相关突变位点6个。在进行了JEV... 详细信息

乙型脑炎病毒（JEV）是流行性乙型脑炎的病原体。本研究旨在进行JEV关键毒力位点分析、鉴定E-I176R（E蛋白第176位氨基酸由异亮氨酸突变为精氨酸）突变位点能否影响其神经毒力。首先,分析预测了JEV神经毒力相关突变位点6个。在进行了JEV SCYA201201-1与SCYA201201-0901毒株的全基因序列测定的基础上,进行了其神经毒力的鉴定,分析获得了JEV神经毒力相关氨基酸突变位点6个:E蛋白A72T、I176R、S251Y、E273K,NS2B蛋白V44A和NS4A蛋白G168E。其次,成功拯救了JEV E-I176R单点突变病毒。利用定点突变和反向遗传操作方法构建并包装了JEV E-I176R单点突变病毒,利用蚀斑形成试验、PCR、序列测定等方法对包装的病毒进行了鉴定,在BHK-21细胞进行了体外生长特性的研究,发现目标点突变对JEV的蚀斑形成特性与生长曲线没有显著影响。最后,阐明了乙型脑炎病毒E-I176R突变位点能够显著降低其神经毒力。将84只小鼠平均分为14组进行神经毒力实验,每个病毒滴度重复3次进行验证,发现200与2000PFU的未突变病毒引起小鼠的死亡率分别为55.56%与88.89%,而200与2000PFU的E-I176R单点突变病毒引起小鼠的死亡率分别为11.11%与50%。荧光定量检测结果显示,未突变病毒在鼠脑内含量在攻毒后3、5、7天逐渐升高,而E-I176R单点突变病毒在3、5、7天保持稳定。本研究分析出了6个JEV神经毒力相关氨基酸突变位点,证实了E-176为影响乙脑病毒毒力的关键位点,E-I176R单点突变能够能显著降低其神经毒力。本研究为乙脑病毒致弱机制的深入研究奠定了基础。

关键词：乙型脑炎病毒 E蛋白第176位氨基酸单点突变神经毒力致弱

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乙型脑炎病毒囊膜蛋白I176R位点突变株的生物学特性比较研究

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农业生物技术学报 2024年第10期32卷 2391-2401页

作者：唐冕耀赵勤石艳萍曹玉琴文翼平伍锐杜森焱黄小波颜其贵曹三杰四川农业大学动物医学院/猪病研究中心四川农业大学国家级动物类实验教学示范中心农业农村部兽用药物与兽医诊断技术四川科学观测站

乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)是一种危害严重的人畜共患病毒，囊膜蛋白(envelope protein, E)对JEV的神经毒力起关键作用。前期研究发现，重组乙型脑炎病毒(recombinant Japanese encephalitis virus, rJEV)囊膜蛋白I176R位点突变可致弱其神经毒力。为鉴定rJEV-EI176R位点突变后其生物学特性的变化，本研究克隆分析了E176位点突变重组病毒rJEV-EI176R的E基因序列和E蛋白的生物信息学特征；利用qPCR、蚀斑试验和间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay, IFA)等技术测定rJEV-EI176R的生长曲线、对多种细胞的吸附差异和rJEV-EI176R诱导小鼠小胶质细胞系(mouse microglia cell line, BV-2)细胞炎性水平差异。结果显示，rJEV-EI176R的E蛋白带正电荷的残基增加1个，等电点升高0.37，不稳定指数升高0.39;E蛋白的α螺旋、β折叠、延伸链以及无规则卷曲的数量及占比均发生了改变，同时E176位点氨基酸与附近氨基酸有了不同的连接；rJEV-EI176R在BV-2细胞上的生长曲线没有显著变化且能够感染不同来源的神经细胞和肾细胞；rJEV-EI176R的吸附能力显著提高(P<0.05)但蚀斑大小变化不显著；rJEV-EI176R接种BV-2细胞后，在12和24 h均引起肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白细胞介素-6 (interleukin-6, IL-6)、干扰素γ诱导蛋白-10 (interferongamma-induced protein-10, IP-10)的水平显著低于亲本株(P<0.05)。本研究丰富了JEV毒株E蛋白的生物学特性研究，为后期深入研究JEV减毒机制和疫苗研发提供基础资料。

关键词：乙型脑炎病毒(JEV) 囊膜蛋白(E) I176R位点突变神经毒力致弱生物学特性

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