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针刺研究 2008年第3期33卷 147-153页

作者：张凤冯异周瑞张玉秋陈伯英复旦大学上海医学院中西医结合系复旦大学脑研究所上海200032 华中农业大学微生物国家重点实验室武汉430070

目的:应用伪狂犬病毒(PRV)作为神经示踪剂研究正常和病理状态下"关元"穴针刺信号从穴位传递到神经中枢的通路,并观察电针对其影响。方法:将SD雌性大鼠随机分为正常组(NC)、正常加电针组(NC+EA)、去卵巢组(OVX)和去卵巢加电针组(OVX+EA)... 详细信息

目的:应用伪狂犬病毒(PRV)作为神经示踪剂研究正常和病理状态下"关元"穴针刺信号从穴位传递到神经中枢的通路,并观察电针对其影响。方法:将SD雌性大鼠随机分为正常组(NC)、正常加电针组(NC+EA)、去卵巢组(OVX)和去卵巢加电针组(OVX+EA)。OVX和OVX+EA组行双侧卵巢切除术,术后4周与NC和NC+EA组同时在"关元"穴注射10μl滴度为108plaque-formingunits(PFU)/ml的PRV。NC+EA和OVX+EA组在注射病毒后30min在"关元"穴给予电针处理(2Hz,2～3mA),每天1次,每次30min,连续3d。用免疫组化法观察PRV免疫阳性细胞在中枢神经系统的分布及数量。结果:1)4组大鼠的脊髓、脑干、下丘脑以及大脑皮层均可观察到PRV免疫阳性细胞,其主要分布为:脊髓腰、胸、颈段的腹侧和背侧角,脑干孤束核、巨细胞网状核、三叉神经脊束核、下橄榄核等,下丘脑室旁核、弓状核、腹内侧核、斜角带核、视前大细胞亚核等,以及皮层的纹状区等。2)在OVX组,与神经内分泌密切相关的核团中PRV免疫阳性细胞数量明显减少,如:隔内侧核、室旁核、弓状核、斜角带核(P0.05)。结论:去卵巢后,机体功能发生异常,正常状态下的神经通路受到影响;针刺"关元"可促进原有神经结构的恢复。

关键词： “关元”穴伪狂犬病毒神经束路示踪电针

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小鼠中缝背核向屏状核投射神经通路的形态学特征

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解剖学报 2024年第4期55卷 414-421页

作者：巩涛蔡志平史娟李云庆包头医学院人体解剖学教研室内蒙古包头014040 空军军医大学人体解剖学与组织学胚胎学教研室梁銶琚脑研究中心西安710032

目的探索小鼠中缝背核(DRN)向屏状核(CLA)投射神经通路的形态学特征。方法分别将逆行示踪剂594 retrobeads和顺行示踪剂生物素化的葡聚糖胺(BDA)注入CLA(n=3)和DRN(n=3),结合5-羟色胺(5-HT)免疫荧光染色,观察逆行标记神经元的分布和神... 详细信息

目的探索小鼠中缝背核(DRN)向屏状核(CLA)投射神经通路的形态学特征。方法分别将逆行示踪剂594 retrobeads和顺行示踪剂生物素化的葡聚糖胺(BDA)注入CLA(n=3)和DRN(n=3),结合5-羟色胺(5-HT)免疫荧光染色,观察逆行标记神经元的分布和神经化学特征以及顺标神经纤维和终末在全脑和CLA内的分布;利用钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)-Cre、谷氨酸脱羧酶67(GAD67)-Cre动物结合狂犬逆行跨突触病毒(RV)标记,观察DRN-CLA通路的下游靶神经元类型。结果DRN的吻、中、尾段均能观察到594 retrobeads阳性神经元的胞体,中段的腹侧亚核(DRV)分布较多,且90%以上的逆行标记神经元为5-HT阳性。BDA顺标纤维密集分布于腹侧被盖区、束旁核、腹侧苍白球、杏仁中央核等区,CLA内的神经纤维和终末相对稀疏。RV跨突触逆行标记结果显示,CaMKⅡ-Cre动物的DRN中含有较多的突触前神经元,而GAD67-Cre动物DRN中突触前逆行标记神经元较少。结论DRN-CLA通路是以DRV分布为主的5-HT能投射通路,其在CLA内的纤维和终末较为稀疏,主要与CLA内的CaMKⅡ阳性神经元形成突触联系。

关键词：中缝背核屏状核 5-羟色胺能神经元钙离子/钙调蛋白依赖蛋白激酶Ⅱ阳性神经元神经束路示踪免疫荧光小鼠

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神经示踪剂与组织透明技术兼容性研究

神经示踪剂与组织透明技术兼容性研究

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作者：王培新中国人民解放军医学院

学位级别：硕士

背景及目的:传统组织切片技术的一个明显弊端在于切片间隔之间组织信息的丢失以及组织完整性的破坏。一种新兴组织学技术-组织透明技术应运而生,并迅速引起广泛关注。组织透明技术是指使用一种试剂或几种试剂组成的混合液,通过浸泡、电... 详细信息

背景及目的:传统组织切片技术的一个明显弊端在于切片间隔之间组织信息的丢失以及组织完整性的破坏。一种新兴组织学技术-组织透明技术应运而生,并迅速引起广泛关注。组织透明技术是指使用一种试剂或几种试剂组成的混合液,通过浸泡、电泳或灌注等处理方式,使大块组织或完整器官达到视觉下或光学仪器下透明的组织学技术。相对于传统的组织学技术,组织透明技术具有在不破坏组织结构的前提下观察其内部结构的优势。尤其适用于具有“长距离传导”特征的神经系统的研究,可以配合神经示踪技术显示完整的神经传导通路。虽然已经有科研工作者使用组织透明技术与个别示踪剂相结合的方式来研究某一具体的科学问题,但目前仍没有文献对不同示踪剂与不同组织透明技术的兼容性进行系统阐述。方法:本研究第一部分首先选择两种不同类型的代表性示踪剂,即荧光染料示踪剂(Fluoro-Gold 和 Fluoro-Ruby)和携带荧光蛋白的病毒示踪剂(rAAV9-hSyn-mCherry-WPRE-pA和rAAV9-hSyn-EGFP-WPRE-pA),分别通过微量注射方式对动物的运动传导束进行示踪,切片后对比使用三种代表性透明方法FRUIT、3DISCO以及uDISCO透明前后的信号变化。第二部分为根据第一部分的结果,微量注射Fluoro-Gold于大鼠脊髓一侧,逆行示踪运动传导束至对侧初级运动皮层;微量注射Fluoro-Ruby于大鼠单侧初级运动皮层,顺行示踪锥体束至脊髓。动物存活2周后完成灌注,取完整脑和脊髓以3DISCO方法进行组织透明,再通过光学显微成像设备完成三维成像。结果:第一部分:(1)逆行示踪剂Fluoro-Gold与三种透明方法兼容性均较好;(2)顺行示踪剂Fluoro-Ruby与三种透明方法兼容性较好;(3)rAAV9-hSyn-mCherry-WPRE-pA和rAAV9-hSyn-EGFP-WPRE-pA与FRUIT法兼容性较好,荧光信号保留完好;(4)实验动物为大鼠时,使用3DISCO与uDISCO进行组织透明可以造成GFP及Cherry蛋白淬灭,其中3DISCO更早导致淬灭;(5)同一实验条件下GFP较Cherry蛋白更早发生淬灭,淬灭也更严重。第二部分:两种示踪剂在组织透明后均可以胜任传导束的三维成像要求,但Fluoro-Gold标记难以连续显示轴索形态,而Fluoro-Ruby标记可显示长距离轴索。在显微成像设备的选择上,普通荧光显微镜仅可进行粗略观察,Lightsheet显微镜和双光子显微镜可以更精确的观察透明组织内部的示踪剂信号。结论:***-Gold与Fluoro-Ruby与组织透明技术兼容性较好。2.除小鼠外,以“脱水脱脂”为核心的组织透明技术容易导致荧光蛋白淬灭,与病毒示踪剂兼容性差。3.配合组织透明技术及光学显微镜,顺行示踪剂Fluoro-Ruby能够立体的展示神经传导的完整路径。***显微镜和双光子显微镜更适宜完成透明组织内的立体成像。

关键词：组织透明技术神经束路示踪荧光蛋白光片显微镜

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三法三穴调节NogoA和NgR促进SNI大鼠运动功能恢复的机理研究

三法三穴调节NogoA和NgR促进SNI大鼠运动功能恢复的机理研究

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作者：李易真北京中医药大学

学位级别：硕士

[目的]本研究以坐骨神经损伤(Sciatic Nerve Injury,SNI)为例,建立坐骨神经夹持损伤模型,研究周围神经损伤。基于行为学、形态学与分子生物学的综合评价,通过三法三穴推拿干预SNI模型大鼠,探究推拿对SNI模型大鼠脊髓运动神经元存活情况... 详细信息

[目的]本研究以坐骨神经损伤(Sciatic Nerve Injury,SNI)为例,建立坐骨神经夹持损伤模型,研究周围神经损伤。基于行为学、形态学与分子生物学的综合评价,通过三法三穴推拿干预SNI模型大鼠,探究推拿对SNI模型大鼠脊髓运动神经元存活情况及小胶质细胞活化状态的影响,继而从脊髓神经再生抑制通路角度,观察推拿是否可以通过抑制Nogo-NgR信号通路中关键蛋白Nogo-A及NgR的表达,抑制生长锥回缩,促进轴突再生。通过研究三法三穴推拿干预促进神经元轴突再生,促进运动功能恢复的机理,探讨推拿治疗周围神经损伤的科学内涵,进而为临床周围神经损伤类疾病的推拿治疗提供理论基础。[方法]建立SNI模型大鼠,使用按摩推拿手法模拟仪,对殷门、承山、阳陵泉三穴进行定性定量点、拨、揉三法干预。运用坐骨神经功能指数评价大鼠的精细动作恢复情况,斜板试验评价大鼠的后肢肌力恢复情况。运用免疫荧光示踪观察脊髓运动神经元存活情况,荧光染色法观察小胶质细胞标记物CD11b的活化状态,以探究推拿对脊髓形态变化的影响;运用分子生物学技术检测脊髓腹角Nogo-A及NgR的表达情况。通过对行为学,形态学和分子生物学结果进行综合分析,评价推拿对SNI大鼠坐骨神经运动功能恢复的影响,并从脊髓神经活性物质形态变化和神经再生抑制通路角度探讨推拿的起效机制。[结果]1.推拿可以促进SNI大鼠运动功能的恢复1.1.坐骨神经功能指数(SFI)造模后7d,模型组SFI表现与假手术组相比显著降低(P0.05)。干预第10d,与模型组比较,推拿组大鼠斜板结果有升高趋势(P>0.05)。经推拿干预15d和20d时,模型组斜板结果仍明显低于假手术组(P神经元数量和小胶质细胞活化状态2.1.脊髓运动神经元免疫荧光示踪结果造模后7d,与假手术组相比,模型组损伤侧脊髓L4-L6节段荧光金逆行示踪神经元计数减少(P神经元计数显著减少(P神经元计数显著增多(P神经元附近,与神经元密切接触;干预20d后,模型组脊髓腹角L4-L6节段CD11b标记的小胶质细胞呈明显的高活化状态,与模型组相比,推拿组小胶质细胞活化程度较弱。3.推拿可以通过降低脊髓腹角NgR的表达促进轴突再生脊髓腹角L4-L6节段Nogo-A及NgR蛋白Western-blot法和免疫组化法检测结果:Western-blot法检测结果显示:干预前(0d),与假手术组相比,模型组NogoA表达水平无显著性差异(P>0.05);干预20d后,与假手术组相比,模型组NogoA表达水平呈升高趋势(P>0.05),模型组与推拿组NogoA表达水平无显著性差异(P>0.05)。免疫组化法检测结果显示:干预Od,与假手术组相比,模型组NogoA表达水平无显著性差异(P>0.05);干预20d后,与假手术组相比,模型组NogoA表达水平呈升高趋势(P0.05)。Western-blot法检测结果显示:干预0d,与假手术组相比,模型组NgR表达水平升高(P神经元的数量,降低脊髓腹角小胶质细胞的活化程度。证明推拿对神经纤维的恢复有促

关键词： NogoA受体神经束路示踪推拿轴突抑制通路坐骨神经损伤

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神经干细胞移植治疗脊髓横断损伤的研究

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中国医学工程 2005年第4期13卷 337-340页

作者：伍军方方陈风华高俊伟柳浩然刘劲芳邓永文方加胜中南大学湘雅医院神经外科湖南长沙410008 中南大学湘雅医院心内科湖南长沙410008

目的研究神经干细胞移植治疗对脊髓横断损伤的修复作用。方法采用成年S-D大鼠,随机分为脊髓(胸10)横断损伤对照组(n=7)和神经干细胞移植治疗组(n=7)。术后10周,感觉运动区皮质注射10%BDA示踪剂。动物再存活两周后取出相应的脑和脊髓组织... 详细信息

目的研究神经干细胞移植治疗对脊髓横断损伤的修复作用。方法采用成年S-D大鼠,随机分为脊髓(胸10)横断损伤对照组(n=7)和神经干细胞移植治疗组(n=7)。术后10周,感觉运动区皮质注射10%BDA示踪剂。动物再存活两周后取出相应的脑和脊髓组织,冰冻切片后,采用自由漂浮法行BDA染色显影,光镜观察。两组实验动物均于脊髓横断术后采用BBB评分法定期评估运动功能。结果神经干细胞移植治疗组所有大鼠BBB运动功能评分在横断损伤4周以后明显高于对照组(P神经束路示踪技术研究显示神经干细胞治疗组7只中的6只大鼠在术后12周有部分BDA阳性标记的皮质脊髓束再生通过脊髓横断损伤部位,而对照组大鼠均未见再生的皮质脊髓束通过。结论在脊髓横断损伤后应用神经干细胞移植治疗,可明显改善损伤的运动功能。神经干细胞移植治疗促进了皮质脊髓束的再生并重新建立了部分神经纤维联系。BDA神经束路示踪技术为脊髓损伤后神经功能的恢复提供了解剖形态学依据。

关键词：神经束路示踪神经干细胞移植脊髓损伤皮质脊髓束

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