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血管性痴呆患者血清神经调节蛋白1、神经元正五聚蛋白2的表达及临床意义

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临床神经病学杂志 2023年第1期36卷 28-33页

作者：钟文清陈晓瑜刘丹丹中山大学附属第八医院神经内科深圳528406

目的探究血清神经调节蛋白1(NRG-1)、神经元正五聚蛋白2(NPTX-2)水平与血管性痴呆(VaD)患者认知功能、神经功能和预后的关系。方法选取100例VaD患者为VaD组,同期选取100名健康体检者为正常对照组。采用ELISA法检测两组血清NRG-1和NPTX-... 详细信息

目的探究血清神经调节蛋白1(NRG-1)、神经元正五聚蛋白2(NPTX-2)水平与血管性痴呆(VaD)患者认知功能、神经功能和预后的关系。方法选取100例VaD患者为VaD组,同期选取100名健康体检者为正常对照组。采用ELISA法检测两组血清NRG-1和NPTX-2水平,应用Pearson相关性分析其与VaD患者MMSE评分、NIHSS评分、蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评分以及日常生活活动量表(ADL)评分的关系,并进行单因素分析。采用Logistic回归分析并绘制ROC曲线,探究其与VaD患者预后功能障碍分级差的关系及其预测意义。结果正常对照组血清NRG-1和NPTX-2水平显著高于VaD组(均P正相关,与NIHSS评分(r=-0.385,P=0.035;r=-0.427,P=0.014)呈负相关。非条件Logistic回归分析显示,血清NRG-1、NPTX-2水平升高是VaD预后差的保护因素(均P1)。血清NRG-1、NPTX-2联合应用时曲线下面积为0.886,高于其单独应用,诊断效能较高。结论VaD患者的血清NRG-1和NPTX-2水平下降,且其改变幅度与认知功能、神经功能和预后具有明显相关性。检测血清NRG-1和NPTX-2可为临床诊治VaD、预测病情进展和评估预后提供一定的参考依据。

关键词：血管性痴呆神经调节蛋白1 神经元正五聚蛋白2 认知功能神经功能预后

人NPTX2基因原核表达载体构建及重组蛋白的表达纯化

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解放军医学杂志 2009年第1期34卷 24-26页

作者：张玲高军李兆申杜奕奇龚燕芳黄文金晶吴洪玉满晓华第二军医大学长海医院消化病研究所上海200433

目的在大肠埃希菌中表达人神经元正五聚蛋白2(NPTX2),并对该重组蛋白进行纯化、鉴定。方法双酶切pReceiv-er-M15 NPTX2质粒获得人NPTX2全长cDNA,经NotI和EcoRI双酶切后,连接至谷胱甘肽-S-转移酶(GST)融合表达载体pGEX-4T-1中,经限制性... 详细信息

目的在大肠埃希菌中表达人神经元正五聚蛋白2(NPTX2),并对该重组蛋白进行纯化、鉴定。方法双酶切pReceiv-er-M15 NPTX2质粒获得人NPTX2全长cDNA,经NotI和EcoRI双酶切后,连接至谷胱甘肽-S-转移酶(GST)融合表达载体pGEX-4T-1中,经限制性酶切、PCR和测序验证正确后,转化至大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导重组蛋白表达,采用Western blotting鉴定表达产物,亲和层析法纯化GST-NPTX2蛋白。结果经酶切与测序鉴定证实原核重组载体pGEX4T-1-NPTX2构建成功,表达产物相对分子量为70kD左右,与预期值相符,Western blotting证实该蛋白具有免疫反应特异性,亲和层析法获得了纯化的GST-NPTX2蛋白。结论构建了pGEX-4T-NPTX2原核表达载体,并在大肠埃希菌BL21中诱导表达了GST-NPTX2融合蛋白。亲和纯化获得较高纯度的GST融合蛋白,为下一步继续研究NPTX2的生物学功能奠定了基础。

关键词：神经元正五聚蛋白2 原核表达克隆,分子

NPTX2基因甲基化与年龄推断的相关性研究

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重庆医科大学学报 2015年第4期40卷 594-598页

作者：邢扬幸宇李倩楠甘丽邓世雄重庆医科大学基础医学院法医学教研室重庆400016

目的:探讨神经元正五聚蛋白2(neuronal pentraxinⅡ,NPTX2)基因启动子区Cp G位点甲基化与年龄的关系。方法:提取170例活体外周血样本的基因组DNA,经甲基化修饰试剂盒修饰后,利用甲基化特异性-PCR(methylation specific-PCR,MSP)检测其NP... 详细信息

目的:探讨神经元正五聚蛋白2(neuronal pentraxinⅡ,NPTX2)基因启动子区Cp G位点甲基化与年龄的关系。方法:提取170例活体外周血样本的基因组DNA,经甲基化修饰试剂盒修饰后,利用甲基化特异性-PCR(methylation specific-PCR,MSP)检测其NPTX2基因启动子区甲基化情况,并分析其与性别、年龄的关系。结果:以每个样本年龄、性别为自变量,是否甲基化为因变量,用二分类的logistic回归分析显示,是否甲基化与性别因素不具有统计学意义(P=0.843),表明性别因素对NPTX2基因甲基化影响不明显;而是否甲基化与年龄因素则具有统计学意义(P=0.000),表明年龄因素显著影响该基因的甲基化。以五岁为一个年龄段,对其定性情况进行线性回归分析显示男性(P=0.001)、女性(P=0.000)、总体(P=0.000)均存在线性关系,表明甲基化率是随年龄段的增加而呈线性增长的。结论:NPTX2基因启动子区甲基化程度随年龄的增加而增加。可进一步研究建立回归模型,进行年龄推断。

关键词：神经元正五聚蛋白2 年龄推断甲基化甲基化特异性-PCR

胰腺癌细胞株中NPTX2基因的甲基化情况研究

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解放军医学杂志 2009年第1期34卷 18-20页

作者：曹佳高军杜奕奇李兆申黄文龚燕芳张玲宋健金晶吴洪玉第二军医大学长海医院消化病研究所上海200433

目的探讨神经元正五聚蛋白2(NPTX2)基因在胰腺癌中低表达的分子机制。方法利用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测2例正常胰腺组织及ASPC1、BxPC3、CFPAC、PaTu8988、PANC-1、SW1990等6株胰腺癌细胞株中NPTX2基因的甲基化情况,并对产物进行... 详细信息

目的探讨神经元正五聚蛋白2(NPTX2)基因在胰腺癌中低表达的分子机制。方法利用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测2例正常胰腺组织及ASPC1、BxPC3、CFPAC、PaTu8988、PANC-1、SW1990等6株胰腺癌细胞株中NPTX2基因的甲基化情况,并对产物进行测序验证。利用DNA甲基化转移酶(DNMT)抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-dC)处理细胞株ASPC1及PANC1,再运用qRT-PCR及SYBR Green荧光掺入甲基化特异性定量PCR法检测NPTX2基因的mRNA水平及甲基化程度。结果MSP结果显示正常胰腺组织中NPTX2基因未发生甲基化,而在6株胰腺癌细胞株中NPTX2基因均有不同程度的甲基化。胰腺癌细胞株ASPC1及PANC-1在5-Aza-dC处理前的甲基化指数(MI)分别为0.964、0.472,mRNA表达的相对值(RQ)分别为5.251和0,而处理后的MI分别为0.531、0.226,RQ分别为5.965和1.076。结论NPTX2基因启动子的高甲基化是该基因在胰腺癌中表达下降的主要原因之一。

关键词：胰腺肿瘤DNA甲基化神经元正五聚蛋白2 CpG岛

急性脑梗死患者血清NFL、NPTX2水平与认知功能的研究

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急性脑梗死患者血清NFL、NPTX2水平与认知功能的研究

作者：程舒心新乡医学院

学位级别：硕士

背景急性脑梗死(acute cerebral infarction,ACI)是全球成人高致残率高死亡率的常见病因,脑梗死急性起病不仅可导致患者出现视野缺损、肢体乏力、感觉异常、吞咽困难等常见神经功能缺损症状,还会使患者出现反应迟钝、记忆力减退、执行... 详细信息

背景急性脑梗死(acute cerebral infarction,ACI)是全球成人高致残率高死亡率的常见病因,脑梗死急性起病不仅可导致患者出现视野缺损、肢体乏力、感觉异常、吞咽困难等常见神经功能缺损症状,还会使患者出现反应迟钝、记忆力减退、执行能力下降、视觉空间能力下降及言语障碍等认知功能障碍。早期干预治疗对于急性脑梗死患者至关重要,可提高患者生活质量,改善神经功能缺损表现。国内外对急性脑梗死后认知功能障碍研究日益增加,未有特异性强的生物学标志物。神经丝轻链(neurofilament light chain,NFL)是神经丝蛋白最重要的亚基,同时也是可溶性的亚基,轴突损伤后,可释放NFL到细胞间质,最终释放到脑脊液和血浆中。因此脑脊液和外周血中的NFL水平可作为许多神经疾病的轴突损伤或神经变性的标志物。神经元正五聚蛋白2(neuronal pentraxins 2,NPTX2)又称神经元活性调节型五肽,是一种分泌型糖蛋白,具有环状多聚体结构,为正五聚蛋白家族的一个成员,NPTX2被认为在传递神经递质和维持突触可塑性方面发挥着至关重要的作用。目的探析急性脑梗死患者血清NFL、NPTX2与认知功能的相关性,为急性脑梗死后认知功能障碍的早期筛查及干预提供客观依据。方法本研究纳入自2019年10月至2021年10月就诊于新乡医学院第二附属医院神经内科以及新乡市中心医院神经内科的入院患者作为研究对象。依据排除及纳入标准,共纳入171例患者,其中114例为ACI组,其余57例为对照组。发病14天时,采用蒙特利尔认知评估表(montreal cognitive assessment,MOCA)评估认知功能,将ACI患者分为患者分为认知功能障碍组及认知功能正常组。入院后收集患者一般人口学资料和临床检测指标,包括年龄、性别、既往病史、MRI和生化指标,期间留存血液标本,行酶联免疫吸附测定法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检验血清中NFL和NPTX2浓度。采用SPSS 26.0软件对收集的数据进行统计分析,符合正态分布的计量资料以均数±标准差(?±)表示,2组间比较使用独立样本t检验;非正态分布的计量资料以中位数及四分位间距[M(P25,P75)]描述,2组间比较采用Mann-Whitney U检验,3组间比较采用Kruskal-Wallis H检验;计数资料以频数和百分数[n(%)]描述,组间比较采用卡方检验。采用ROC曲线、Spearman相关性分析、Logistic回归分析等统计学检验方法,检验水准α=0.05,P蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、尿酸(UA)、超敏C反应蛋白(hs CRP)、空腹血糖(GLU)之间无统计学差异(P>0.05)。2.对照组与ACI组血清游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺激素(FT4)、NFL、NPTX2水平差异均有统计学意义(P0.05),与血清NPTX2为负相关(r=-0.192,P=0.041)。4.对照组与ACI组间血清FT3、FT4、NFL、NPTX2水平进行分析且绘制ROC曲线分析,血清FT3预测急性脑卒中发生的ROC曲线下面积(AUC)为0.607(95%可信区间:0.511～0.704,P<0.05),其临界值为4.85 pmol/L,约登指数(灵敏度与特异度之和)最大,灵敏度为0.434,特异度为0.79;血清FT4预测急性脑卒中发生的ROC曲线下面积为0.845(95%可信区间:0.778～0.913,P<0.001),其临界值为14.17pmol/L,约登指数(灵敏度与特异度之和)最大,灵敏度为0.755,特异度为0.808;血清NFL预测急性脑卒中发生的ROC曲线下面积为0.826(95%可信区间:0.764～0.888,P<0.001),其临界值为2.69ng/m L,约登指数(灵敏度与特异度之和)最大,灵敏度为0.754,特异度为0.842;血清NPTX2预测急性脑卒中发生的ROC曲线下面积为0.803(95%可信区间:0.715～0.891,P<0.001),其临界值为22.02 ng/m L,约登指数(灵敏度与特异度之和)最大,灵敏度为0.904,特异度为0.544。5.对ACI危险因素进行多因素Logistic回归评估血清FT3、FT4、NFL及NPTX2对急性脑梗死的影响,结果显示FT4与ACI之间差异有统计学意义(P<0.001),随着血清FT4水平增高,ACI风险增加。

关键词：急性脑梗死认知功能障碍神经丝轻链蛋白神经元正五聚蛋白2

NPTX2基因甲基化与年龄推断的相关性研究

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NPTX2基因甲基化与年龄推断的相关性研究

作者：邢扬重庆医科大学

学位级别：硕士

目的：探讨神经元正五聚蛋白2(Neuronal pentraxin Ⅱ, NPTX2)基因启动子区CpG位点甲基化与年龄的关系。方法：提取200例活体外周血样本的基因组DNA,经甲基化修饰试剂盒修饰后,利用甲基化特异性-PCR (Methylation specific-PCR, MSP)检... 详细信息

目的：探讨神经元正五聚蛋白2(Neuronal pentraxin Ⅱ, NPTX2)基因启动子区CpG位点甲基化与年龄的关系。方法：提取200例活体外周血样本的基因组DNA,经甲基化修饰试剂盒修饰后,利用甲基化特异性-PCR (Methylation specific-PCR, MSP)检测其NPTX2基因启动子区单个位点甲基化情况,并分析其与性别、年龄的关系。选取三个年龄组的60个样本,对其进行甲基化特异性的高分辨率熔解曲线法(methylation specific-high resolution melting, MS-HRM)分析,检测其启动子区多个位点甲基化与年龄的关系。结果：MSP检测中以每个样本年龄、性别为自变量,是否甲基化为因变量,用二分类的logistic回归分析显示,是否甲基化与性别因素不具有统计学意义(P=0.843),表明性别因素对NPTX2基因甲基化影响不显著;而是否甲基化与年龄因素则具有统计学意义(P=0.000),表明年龄因素显著影响该基因的甲基化。以五岁为一个年龄段,对其定性情况进行线性回归分析显示男性(P=0.001),女性(P=0.000),总体(P=0.000)均存在线性关系,表明甲基化率是随年龄段的增加而呈线性增长的。MS-HRM检测显示各年龄段甲基化程度不同,甲基化程度10%以上的比例为1-5岁组40%,31-35岁组50%,61-65岁组65%。结论：NPTX2基因启动子区甲基化程度随年龄的增加而增加。可进一步研究建立回归模型,进行年龄推断。

关键词：神经元正五聚蛋白2 年龄推断甲基化 MSP MS-HRM

AD患者血清NPTX2、Netrin-4水平与认知障碍的关系

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脑与神经疾病杂志 2023年第7期31卷 397-401页

作者：余舒扬张巍首都医科大学附属北京天坛医院神经病学中心认知障碍性疾病科北京100070

目的分析阿尔茨海默病(AD)患者血清神经元正五聚蛋白2(NPTX2)、轴突生长诱向因子4(Netrin-4)水平与认知障碍的关系。方法选取2021年11月至2022年11月首都医科大学附属北京天坛医院神经病学中心收治的85例存在认知障碍AD患者作为研究组,... 详细信息

目的分析阿尔茨海默病(AD)患者血清神经元正五聚蛋白2(NPTX2)、轴突生长诱向因子4(Netrin-4)水平与认知障碍的关系。方法选取2021年11月至2022年11月首都医科大学附属北京天坛医院神经病学中心收治的85例存在认知障碍AD患者作为研究组,另外选取同期80例认知功能正常的健康体检者作为对照组。所有对象入院后检测血清NPTX2、Netrin-4水平,并进行各组比较。采用Pearson相关性分析血清NPTX2、Netrin-4水平与MMSE评分的关系,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清NPTX2、Netrin-4对AD患者认知障碍的评估价值,采用多因素Logistic回归分析影响AD患者认知障碍的相关因素。结果研究组患者血清NPTX2、Netrin-4水平明显低于对照组(P正相关(rNPTX2=0.485、rNetrin-4=0.425,均P<0.001)。ROC曲线结果显示:血清NPTX2评估AD患者认知障碍的曲线下面积为0.845,截断值为20.52,敏感度、特异度分别为92.94%、61.25%;Netrin-4评估AD患者认知障碍的曲线下面积为0.872,截断值为73.56ng·mL^(-1),敏感度、特异度分别为92.94%、67.50%;血清NPTX2联合Netrin-4评估AD患者认知障碍的曲线下面积为0.929,敏感度、特异度分别为85.88%、86.25%。多因素Logistic回归分析显示,血清NPTX2、Netrin-4、年龄均为影响AD患者认知障碍的相关因素(P<0.05)。结论AD患者血清NPTX2、Netrin-4水平均降低,并与患者认知障碍密切相关,可作为AD患者认知障碍的评估指标。

关键词：阿尔茨海默病神经元正五聚蛋白2 轴突生长诱向因子4 认知障碍