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人脐血间充质干细胞体外诱导分化为神经元样细胞

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基础医学与临床 2007年第3期27卷 298-301页

作者：徐虹马希峰阮丽荣杨波杜英河南省肿瘤研究所河南郑州450003 郑州大学第二附属医院骨科河南郑州450003 郑州大学基础医学院微生物与免疫学教研室河南郑州450052 郑州大学第一附属医院神经外科河南郑州450052

目的从人脐血中分离单个核细胞(MNCs)、体外培养扩增间充质干细胞(MSCs)并研究其生物学特性和定向诱导能力。方法无菌条件下采集脐血,肝素抗凝,分离单个核细胞。用DMEM/F12培养基进行纯化和扩增培养,分别向神经元样细胞诱导,获取MSCs,... 详细信息

目的从人脐血中分离单个核细胞(MNCs)、体外培养扩增间充质干细胞(MSCs)并研究其生物学特性和定向诱导能力。方法无菌条件下采集脐血,肝素抗凝,分离单个核细胞。用DMEM/F12培养基进行纯化和扩增培养,分别向神经元样细胞诱导,获取MSCs,显微镜下观察它的形态、尼氏体染色;取扩增2、5、7代的MSCs,免疫细胞化学法检测nestin表达和神经元样细胞特异性标记。结果诱导扩增后的MSCs尼氏体染色阳性,第2、5、7代MSCs的nestin的阳性表达率分别为(51.2±3.2)%、(34.6±2.7)%、(11.3±3.3)%;神经元特异性烯醇化酶(NSE)在原代细胞无表达,而在2、5、7代MSC的阳性表达率分别为(11.4±2.3)%、(21.78±3.1)%、(40.7±3.4)%。结论人脐血MSCs具有神经干/祖细胞的特性,在一定条件下能向神经元样细胞分化。

关键词：脐血间充质干细胞神经元样细胞诱导分化

体外诱导骨髓基质细胞分化为神经元样细胞的实验研究

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中国老年学杂志 2008年第14期28卷 1385-1387页

作者：薛海菊石玉娜邢台医学高等专科学校临床系内科教研室河北邢台054000 河北防爆电机厂职工医院

目的观察大鼠骨髓基质细胞(MSCs)的生长特点及在体外诱导条件下分化为神经元样细胞的能力,并寻找最佳诱导时间。方法无菌条件下,收集大鼠股骨骨髓,分离出MSCs进行培养、扩增、纯化。用神经妥乐平(NT)进行诱导。在不同时间用巢蛋白(Nest... 详细信息

目的观察大鼠骨髓基质细胞(MSCs)的生长特点及在体外诱导条件下分化为神经元样细胞的能力,并寻找最佳诱导时间。方法无菌条件下,收集大鼠股骨骨髓,分离出MSCs进行培养、扩增、纯化。用神经妥乐平(NT)进行诱导。在不同时间用巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫细胞化学染色鉴定阳性细胞。结果MSCs经诱导后呈神经元样形态。免疫组化鉴定显示Nestin阳性细胞表达在诱导第3天时最多,为48.20%±5.61%,NSE阳性细胞表达在第5天时最多,为31.50%±7.32%。结论MSCs在体外诱导条件下可经神经前体细胞转化为神经元样细胞,且第5天为最佳诱导时间。

关键词：骨髓基质细胞细胞分化神经元样细胞

胞内cAMP浓度的增加可诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞

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中国病理生理杂志 2002年第11期18卷 1324-1327,I001页

作者：项鹏夏文杰张丽蓉陈振光张秀明李艳李树浓中山医科大学病理生理学教研室广东广州510080 广东药学院病理生理学教研室广东广州510224 中山医科大学附属第一医院心胸外科广东广州510089

目的 :探讨胞内cAMP浓度的增加与骨髓间质干细胞 (MSC)分化为神经元样细胞的关系。方法 :采用Ficoll-Paque液 (1 0 77g/L)离心分离成人MSC ,体外扩增 ,采用含腺苷酸环化酶激动剂Forskolin及磷脂酶抑制剂 3-异丁基 - 1 -甲基黄嘌呤 (IBMX... 详细信息

目的 :探讨胞内cAMP浓度的增加与骨髓间质干细胞 (MSC)分化为神经元样细胞的关系。方法 :采用Ficoll-Paque液 (1 0 77g/L)离心分离成人MSC ,体外扩增 ,采用含腺苷酸环化酶激动剂Forskolin及磷脂酶抑制剂 3-异丁基 - 1 -甲基黄嘌呤 (IBMX)的无血清DMEM诱导MSC分化为神经元。免疫组化鉴定神经元烯醇化酶 (NSE)、神经丝蛋白 (NF)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)的表达。结果 :成人骨髓间质干细胞在体外扩增原代可获得 5× 1 0 5,1 0代可获得 2× 1 0 1 0 个细胞。加入Forskolin、IBMX以及两者联用诱导后 ,MSC胞体收缩 ,突起伸出 ,呈典型神经元样形态 ;免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NSE、NF -M表达阳性 ,GFAP阴性。结论

关键词：胞内cAMP浓度骨髓间质干细胞神经元样细胞腺苷环-磷酸福司柯林诱导分化

小鼠间充质祖细胞向神经元样细胞诱导分化的实验研究

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重庆医科大学学报 2010年第6期35卷 801-805页

作者：杨里万立华粟永萍彭毅赵文勇重庆医科大学基础医学院法医学教研室重庆400016 第三军医大学军事预防医学院全军复合伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

目的:体外培养C57小鼠密质骨碎片来源的间充质祖细胞(Mesenchymal progenitor cells,MPC),探讨MPC体外向神经元样细胞定向诱导分化的可行性。方法:取C57小鼠后肢长骨,剪成骨碎片,经Ⅱ型胶原酶消化后体外培养MPC,流式细胞术检测鉴定其免... 详细信息

目的:体外培养C57小鼠密质骨碎片来源的间充质祖细胞(Mesenchymal progenitor cells,MPC),探讨MPC体外向神经元样细胞定向诱导分化的可行性。方法:取C57小鼠后肢长骨,剪成骨碎片,经Ⅱ型胶原酶消化后体外培养MPC,流式细胞术检测鉴定其免疫学表型。取生长良好的第三代MPC,神经元原代培养上清液定向诱导,对诱导后的MPC,以神经元特异性标志物神经元特异性烯醇化酶(Neuron specific enolase,NSE)及神经丝蛋白(Neurofilament protein,NF)为对照,应用免疫细胞化学染色法,检测神经元标志物的表达。结果:成功培养原代MPC,传代后生长良好,流式细胞术检测CD29、CD44组阳性率与其同型对照组相比有明显差异(P神经元原代培养上清液诱导后,MPC可表达神经元特异性标志物NSE及NF。结论:从小鼠密质骨碎片分离培养出的间充质祖细胞获得率高,并可诱导分化为神经元样细胞。

关键词：间充质祖细胞分化神经元样细胞诱导

NT_3基因修饰施万细胞促进移植的神经干细胞在损伤脊髓内分化为神经元样细胞

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解剖学报 2005年第6期36卷 577-581页

作者：郭家松曾园山李海标黄文林中山大学中山医学院组织学胚胎学教研室神经科学研究室第一军医大学分校广州510315 中山大学中山医学院肿瘤防治中心广州510080

目的探讨神经营养素-3(NT-3)基因修饰施万细胞(SCs)对植入全横断性脊髓损伤处的神经干细胞(NSCs)分化为神经元样细胞的影响。方法将NSCs单独移植或与NT-3基因修饰SCs、LacZ基因修饰SCs和SCs联合移植到全横断性脊髓损伤处,67 d后用免疫... 详细信息

目的探讨神经营养素-3(NT-3)基因修饰施万细胞(SCs)对植入全横断性脊髓损伤处的神经干细胞(NSCs)分化为神经元样细胞的影响。方法将NSCs单独移植或与NT-3基因修饰SCs、LacZ基因修饰SCs和SCs联合移植到全横断性脊髓损伤处,67 d后用免疫组织化学方法观测NSCs的分化,并计算其中神经元样细胞的分化率。结果NSCs在损伤脊髓内可分化为神经元样细胞和神经胶质样细胞,与未基因修饰的SCs的作用相比,NT-3基因修饰的SCs能更有效地提高NSCs向神经元样细胞的分化率,而LacZ基因修饰的SCs与未修饰SCs没有明显区别。结论NT-3基因修饰SCs能促进NSCs在损伤脊髓内向神经元样细胞分化。

关键词：神经干细胞神经营养素-3 基因修饰施万细胞分化神经元样细胞脊髓损伤免疫组织化学大鼠

不同培养代数大鼠骨髓基质细胞向神经元样细胞转分化能力的比较

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神经解剖学杂志 2009年第1期25卷 1-5页

作者：陈谦陈静崔颜宏庄琴胡萍萍龚爱华张志坚江苏大学基础医学与医学技术学院组织胚胎学教研室镇江212013 江苏大学基础医学与医学技术学院细胞生物学教研室镇江212013

为确定诱导大鼠骨髓基质细胞(BMSCs)向神经元样细胞转分化的适宜培养代数,本研究比较了不同培养代数的BMSCs的转分化潜能。首先体外培养大鼠BMSCs并传代,于不同的培养代数利用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、神经生长因子(NGF)、全反式... 详细信息

为确定诱导大鼠骨髓基质细胞(BMSCs)向神经元样细胞转分化的适宜培养代数,本研究比较了不同培养代数的BMSCs的转分化潜能。首先体外培养大鼠BMSCs并传代,于不同的培养代数利用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、神经生长因子(NGF)、全反式维甲酸(RA)、音猬因子(Shh)诱导分化,随后运用免疫荧光法和免疫印迹法检测诱导细胞中的神经元样细胞。结果显示骨髓基质细胞体外培养1至3代时能够被诱导分化为神经元样细胞,培养至第7代时丧失转分化为神经元样细胞的潜能。上述结果提示:传代次数增多将引起BMSCs自发分化,使其向神经元样细胞转分化的能力下降,因而BMSCs培养至第3代时适宜进行诱导分化。

关键词：骨髓基质细胞分化神经元样细胞传代大鼠

NT-3基因修饰施万细胞促进神经干细胞体外分化为神经元样细胞

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中国病理生理杂志 2005年第1期21卷 26-30页

作者：郭家松曾园山李海标黄文林刘然义中山大学中山医学院组织胚胎学教研室神经科学研究室中山大学肿瘤防治中心广东广州510080

目的观测神经营养素-3(NT-3)基因修饰施万细胞(SCs)对神经干细胞体外分化为神经元样细胞的影响。方法神经干细胞(NSCs)分别与NT-3基因修饰SCs(NT-3-SCs)、LacZ基因基因修饰SCs(LacZ-SCs)和SCs在体外共培养,7d后用免疫组化方法观测NSCs... 详细信息

目的观测神经营养素-3(NT-3)基因修饰施万细胞(SCs)对神经干细胞体外分化为神经元样细胞的影响。方法神经干细胞(NSCs)分别与NT-3基因修饰SCs(NT-3-SCs)、LacZ基因基因修饰SCs(LacZ-SCs)和SCs在体外共培养,7d后用免疫组化方法观测NSCs的分化并计算其中神经元样细胞的分化率。结果NSCs在体外可分化为神经元样细胞(NF阳性)和神经胶质样细胞(GFAP阳性),与未基因修饰的SCs相比,NT-3-SCs能更有效地提高神经元样细胞的分化率,而LacZ-SCs与SCs没有明显区别。结论NT-3-SCs能促进NSCs向神经元样细胞分化。

关键词：干细胞许旺细胞,神经营养素3 神经元样细胞

骨髓源及脂肪源干细胞向神经元样细胞诱导分化潜力的比较研究

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中华神经医学杂志 2009年第5期8卷 441-445页

作者：马旭姜晓丹张洪钿林建浩闫中杰秦玲莎南方医科大学珠江医院神经外科广东神经外科研究所广东省脑功能修复与再生重点实验室广州501282

目的比较骨髓源基质干细胞（BMSCs）和脂肪源间充质干细胞（ADSCs）向神经元样细胞诱导分化的潜力。方法体外分离培养来自成年SD大鼠的BMSCs和ADSCs．传至第5代时加入表皮生长因子（EGF，10ng／mL）和碱性成纤维细胞生长因子fbFGF，20ng... 详细信息

目的比较骨髓源基质干细胞（BMSCs）和脂肪源间充质干细胞（ADSCs）向神经元样细胞诱导分化的潜力。方法体外分离培养来自成年SD大鼠的BMSCs和ADSCs．传至第5代时加入表皮生长因子（EGF，10ng／mL）和碱性成纤维细胞生长因子fbFGF，20ng／mL），诱导6h、12h、24h、72h、1周、2周后，用免疫荧光染色和Western blot检测两种细胞的神经细胞特异性标志（巢蛋白和B．微管蛋白Ⅲ）的表达，并做统计学分析。结果BMSCs和ADSCs经诱导后，细胞形态发生变化，均表达神经细胞特异性标志。免疫荧光染色结果显示诱导后各时间点BMSCs和ADSCsnstin^J性率或B．tubulinllI阳性率比较差异均有统计学意义（P〈O．05），且诱导后ADSCs表达nestin阳性细胞或B—mbulinIII的能力在各个时间点都EE诱导后BMSCs强，说明诱导后的ADSCs向神经元样细胞方向分化的能力更强。Westernblot结果也与免疫荧光染色结果类似。结论两种不同来源的干细胞在分化成神经元样细胞方面的能力不同，ADSCs比BMSCs具有相对更强的神经元样细胞分化能力。

关键词：骨髓源基质干细胞脂肪源间充质干细胞神经元样细胞细胞分化

26S蛋白酶体参与人骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化

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中国病理生理杂志 2010年第3期26卷 498-503页

作者：陆利张卫国杨桂姣闫八一白丽敏山西医科大学人体解剖学教研室山西太原030001 北京中医药大学人体解剖学教研室北京100029

目的:研究人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)向神经元样细胞逐步分化过程中26S蛋白酶体的作用。方法:贴壁分离获得的hBMSCs先经β-巯基乙醇(β-ME)预诱导24h,随后用视黄酸(RA)诱导3d,最后再用生长因子(GF,10μg/LbFGF、20μg/LNGF)持续培养3d... 详细信息

目的:研究人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)向神经元样细胞逐步分化过程中26S蛋白酶体的作用。方法:贴壁分离获得的hBMSCs先经β-巯基乙醇(β-ME)预诱导24h,随后用视黄酸(RA)诱导3d,最后再用生长因子(GF,10μg/LbFGF、20μg/LNGF)持续培养3d。免疫荧光染色观察不同诱导阶段神经前体细胞标志物nestin、早期神经元标志物Tuj1、成熟神经元标志物NF的表达。免疫荧光染色和RT-PCR分析不同诱导阶段26S蛋白酶体的表达变化。应用含26S蛋白酶体抑制剂的培养液(5μmol/LMG132、10μg/LbFGF、20μg/LNGF)作用于经β-ME/RA诱导后的细胞,NF免疫荧光染色观察蛋白酶体抑制剂对hBMSCs向神经元样细胞分化的影响。结果:未诱导的hBMSCs几乎不表达nestin、Tuj1和NF;经β-ME/RA诱导后神经前体细胞标志物nestin和早期神经元标志物Tuj1表达率增高(34.41%±1.27%,27.79%±1.27%);经β-ME/RA/GF诱导后成熟神经元标志物NF表达率迅速升高(56.72%±2.40%)。免疫荧光染色和RT-PCR结果证实,未诱导hBMSCs26S蛋白酶体表达水平较低;经β-ME/RA诱导后个别细胞26S蛋白酶体染色增强,26S蛋白酶体mRNA表达水平增至1.33倍;经β-ME/RA/GF诱导后26S蛋白酶体深染细胞增多,26S蛋白酶体mRNA表达水平增至1.77倍。应用26S蛋白酶体抑制剂MG132后,NF阳性细胞表达率显著降低(37.59%±1.52%)。结论:hBMSCs在β-ME/RA/GF诱导下可逐步向神经元样细胞分化,26S蛋白酶体在诱导过程中表达水平逐步增高,26S蛋白酶体抑制剂能够抑制hBMSCs向成熟神经元分化,提示26S蛋白酶体可能参与诱导hBMSCs向神经元样细胞的成熟分化。

关键词：人骨髓间充质干细胞 26S蛋白酶体神经元样细胞细胞分化