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基于cAMP/PKA/CREB通路的神牡安神胶囊延长深度睡眠作用机制探讨

中国现代中药 2025年

作者：尤诗晴徐畅陈静婷肖驿泽刘莹杨晓菲吴嘉怡王金朝褚福浩张薇北京中医药大学中药学院瀚天生物(北京)科技有限公司

目的：探讨神牡安神胶囊对对氯苯丙氨酸（PCPA）致失眠小鼠睡眠的改善作用。方法：通过腹腔注射PCPA制备C57雄性小鼠失眠模型，随机分为对照组，模型组，阳性药地西泮组，神牡安神胶囊低、中、高剂量(0.41、1.23、3.69 g·kg–1)组，造... 详细信息

目的：探讨神牡安神胶囊对对氯苯丙氨酸（PCPA）致失眠小鼠睡眠的改善作用。方法：通过腹腔注射PCPA制备C57雄性小鼠失眠模型，随机分为对照组，模型组，阳性药地西泮组，神牡安神胶囊低、中、高剂量(0.41、1.23、3.69 g·kg–1)组，造模后连续给药7 d，观察小鼠精神状态、体质量等指标，通过旷场实验和高架十字迷宫实验观察各组小鼠自发活动情况，反映其焦虑状态；苏木素-伊红（HE）染色法观察各组小鼠海马区神经元形态变化；酶联免疫吸附（ELISA）法检测各组小鼠脑组织中γ-氨基丁酸（GABA）、多巴胺（DA）、皮质醇（Cort）、褪黑素（MT）、环磷酸腺苷（cAMP）、脑源性神经营养因子（BDNF）含量；蛋白质免疫印迹（Western blot）法检测各组小鼠脑组织中γ-氨基丁酸A型受体亚基β3（GABRA3）、蛋白激酶A（PKA）、cAMP反应元件结合蛋白（CREB）蛋白质表达水平；通过脑电图（EEG）协同肌电图（EMG）监测和分析失眠小鼠给药后8 h内的睡眠结构，分别记录各组小鼠的苏醒时长、非快眼动睡眠时长（NREM）和快眼动睡眠（REM）时长。结果：造模成功后失眠小鼠出现暴躁易怒、昼夜节律紊乱的表现。与对照组比较，旷场实验中模型组小鼠穿格数减少（P神牡安神胶囊各剂量组及地西泮组小鼠穿格数增加（P神牡安神胶囊各剂量组小鼠进入开放臂次数占比和开臂时间占比均升高（P神牡安神胶囊中、高剂量组均可使失眠小鼠脑组织中GABA、MT、BDNF与cAMP的表达水平升高（P神牡安神胶囊中、高剂量组小鼠脑组织中GABRA3、PKA、CREB蛋白质表达水平升高（P神牡安神胶囊高剂量组小鼠的苏醒时长缩短（P神牡安神胶囊对PCPA诱导的失眠小鼠具有良好的镇静催眠作用，可缓解失眠所致的紧张焦虑情绪，调节内源性物质Cort、MT、GABA、DA、BDNF的分泌及影响cAMP/PKA/CREB通路，延长睡眠总时长、非快眼动睡眠时长及快眼动睡眠时长，从而改善小鼠睡眠结构来发挥改善睡眠、镇静催眠和延长深度睡眠的作用。

关键词：神牡安神胶囊失眠神经衰弱镇静催眠深度睡眠环磷酸腺苷/蛋白激酶A/cAMP反应元件结合蛋白信号通路

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基于液质联用技术和网络药理学方法探讨神牡安神胶囊改善失眠的潜在药效成分和作用机制

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中南药学 2024年第9期22卷 2355-2362页

作者：尤诗晴徐畅刘莹陈静婷肖驿泽陈曦王金朝张薇褚福浩北京中医药大学中药学院北京102488 北京中医药大学东方医院枣庄医院山东枣庄277000 瀚天生物(北京)科技有限公司北京100020

目的研究神牡安神胶囊治疗神经衰弱引起失眠的药效物质基础及潜在作用机制。方法运用UPLC-QE-Orbitrap-MS并结合文献,对神牡安神胶囊的主要化学成分进行分析鉴定;通过TCMSP数据库及文献查阅对神牡安神胶囊的潜在有效成分进行筛选及补充... 详细信息

目的研究神牡安神胶囊治疗神经衰弱引起失眠的药效物质基础及潜在作用机制。方法运用UPLC-QE-Orbitrap-MS并结合文献,对神牡安神胶囊的主要化学成分进行分析鉴定;通过TCMSP数据库及文献查阅对神牡安神胶囊的潜在有效成分进行筛选及补充;通过Swiss Target Prediction数据库预测活性成分潜在靶点;搜索OMIM、GeneCards及TTD数据库获取失眠症相关靶点;使用Venny软件收集成分靶点-疾病靶点交集,在Cytoscape软件中构建药物-成分-靶点网络图;利用STRING平台构建PPI网络,借助Metascape数据库对交集靶点进行GO富集分析与KEGG通路分析,利用Cytoscape构建成分-靶点-通路图。进一步建立对氯苯丙氨酸(PCPA)诱导的失眠小鼠模型,通过延长戊巴比妥钠睡眠时间实验考察神牡安神胶囊改善失眠动物模型睡眠的作用,通过ELISA法检测各组小鼠血清中5-羟色胺(5-HT)水平,考察神牡安神胶囊改善睡眠的可能机制。结果通过与数据库对比、文献分析以及质谱裂解规律解析,从神牡安神胶囊样品中鉴定出40个化合物;通过网络药理学共筛选出122个候选成分和917个预测靶点,与失眠共同靶点185个,关键靶点主要涉及TP53、EP300、HDAC1、TNF、APP等;KEGG富集分析预测神牡安神胶囊主要通过神经退行性病变相关信号通路(pathways of neurodegeneration-multiple diseases)、多巴胺能突触信号通路(dopaminergic synapse)、帕金森病信号通路(Parkinson disease)及5-羟色胺能神经突触信号通路(serotonergic synapse)等信号通路发挥治疗失眠作用。延长戊巴比妥钠睡眠时间实验中,与模型组相比,神牡安神胶囊中、高剂量组小鼠睡眠时间显著延长(P神牡安神胶囊的化学组成及其治疗神经衰弱失眠症的作用机制,其改善小鼠失眠作用可能是通过激活脑内抑制性单胺类神经递质,增加中枢对睡眠中枢的控制而发挥作用。

关键词：神牡安神胶囊失眠网络药理学超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法神经衰弱

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