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华中科技大学学报（医学版） 2009年第3期38卷 281-285页

作者：沈建英徐桂香左斌甘辉肖娟娟张敏海汪薇曦李宏莲华中科技大学同济医学院基础医学院解剖学系组织胚胎学教研室武汉430030

目的探讨磷酸酯酶活性降低致tau过度磷酸化与细胞凋亡的关系。方法稳定表达人tau cDNA的鼠成神经瘤细胞(N2a/tau)分3组,对照组不处理;十字孢碱(staurosporine,STP,凋亡诱导剂)处理6h为STP组;用磷酸酯酶pp-2a的抑制剂冈田酸(okadaic acid... 详细信息

目的探讨磷酸酯酶活性降低致tau过度磷酸化与细胞凋亡的关系。方法稳定表达人tau cDNA的鼠成神经瘤细胞(N2a/tau)分3组,对照组不处理;十字孢碱(staurosporine,STP,凋亡诱导剂)处理6h为STP组;用磷酸酯酶pp-2a的抑制剂冈田酸(okadaic acid,OA)处理4h,再用STP处理6h为OA+STP组。流式细胞仪检测凋亡率,免疫印迹检测Ser396位点磷酸化tau(Ser396 p-tau)和总tau的表达,免疫荧光双标检测Ser396 p-tau的阳性产物与活化的半胱氨酸蛋白酶(Cleaved Caspase-3)阳性产物的共定位关系。结果①凋亡率:对照组为(4.37±1.47)%,STP组为(19.84±3.25)%,OA+STP组为(12.12±2.46)%;②免疫印迹:OA+STP组Ser396 p-tau的表达明显高于另两组,总tau表达组间无差异;③免疫荧光双标:进一步印证免疫印迹结果,且3组均显示活化的Caspase-3和Ser396 p-tau阳性产物大多不共定位于相同细胞。结论pp-2a活性降低所致tau Ser396位点的过度磷酸化可抑制细胞凋亡,结合前期的实验进一步明确特殊位点过度磷酸化的tau可抑制细胞进入快速的凋亡程序。

关键词：阿尔茨海默病 tau蛋白磷酸酯酶pp-2a 细胞凋亡

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