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联合磷酸肌醇3激酶／哺乳动物雷帕霉素靶蛋白抑制剂NVP—BEZ235增强奥沙利铂诱导的结肠癌细胞凋亡

中华实验外科杂志 2018年第2期35卷 222-225页

作者：王延楠戚少龙姜春晓陈雪松张佳宇沈可欣吉林大学中日联谊医院胃肠结直肠肛门外科长春130033 吉林省永吉县医院 132200

目的观察磷酸肌醇3激酶（PI3K）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）抑制剂NVP-BEZ235对奥沙利铂诱导的人结肠癌HCT116细胞凋亡的影响。方法不同浓度的奥沙利铂和（或）PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235处理体外培养的结肠癌HCT116细胞，采用噻... 详细信息

目的观察磷酸肌醇3激酶（PI3K）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）抑制剂NVP-BEZ235对奥沙利铂诱导的人结肠癌HCT116细胞凋亡的影响。方法不同浓度的奥沙利铂和（或）PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235处理体外培养的结肠癌HCT116细胞，采用噻唑蓝（MTT）法检测奥沙利铂和（或）PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235对HCT116细胞生存率的影响。流式细胞术（FCM）检测奥沙利铂和（或）PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235对HCT116细胞凋亡率的影响。免疫荧光检测奥沙利铂和（或）PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235对HCT116细胞核形态的影响。Western blot检测奥沙利铂和（或）PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235对DNA损伤标志基因磷酸化组蛋白H2AX（γ-H2AX）及凋亡相关蛋白表达水平的影响。结果MTT结果显示，2、4、8、16、32、64 μg/ml奥沙利铂以剂量依赖的方式抑制了HCT116细胞增殖，且约16 μg/ml奥沙利铂能够抑制50%的HCT116细胞增殖；流式细胞术的结果显示，4、16、64 μg/ml奥沙利铂作用HCT116细胞24 h后，凋亡率分别是11%、36%和80%（P＝0.026）；免疫荧光结果显示，奥沙利铂和NVP-BEZ235联合应用明显地增加了HCT116细胞凋亡率，观察到HCT116细胞核明显地发生皱缩；Western blot结果显示，凋亡相关蛋白裂解的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3（Cleaved Caspase-3）的表达水平明显升高（P＝0.026），同时也检测到DNA损伤标志基因γ-H2AX表达明显上调（P＝0.017）。结论PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235明显地增强了奥沙利铂诱导的结肠癌细胞凋亡作用，并增强了奥沙利铂导致的结肠癌细胞DNA损伤效果。

关键词：结肠癌磷酸肌醇3激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白奥沙利铂脱噬作用 DNA损伤

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