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刀鲚磷酸烯醇式丙酮酸羧基酶基因的分子克隆和饥饿作用下的表达分析

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安徽农业科学 2019年第23期47卷 107-114页

作者：王美垚李全杰南京农业大学无锡渔业学院江苏无锡214081 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业农村部淡水渔业和种质资源利用重点实验室江苏无锡214081 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心水生动物基因中心江苏无锡214081

采用同源克隆法获得了刀鲚PEPCK基因全长cDNA序列,其具有高度保守的结构序列及功能位点,进化分析表明其与同属鲱形目的大西洋鲱具有最近的进化距离。在饥饿作用下刀鲚肝组织表达研究表明,PEPCK在糖异生调节方面,在对于饥饿作用下协调糖... 详细信息

采用同源克隆法获得了刀鲚PEPCK基因全长cDNA序列,其具有高度保守的结构序列及功能位点,进化分析表明其与同属鲱形目的大西洋鲱具有最近的进化距离。在饥饿作用下刀鲚肝组织表达研究表明,PEPCK在糖异生调节方面,在对于饥饿作用下协调糖类代谢平衡,进而维持能量代谢供给上发挥了积极作用。该研究为今后进一步开展刀鲚抗环境因子变化调控机制提供了理论参考。

关键词：刀鲚磷酸烯醇式丙酮酸羧基酶克隆饥饿表达

西伯利亚鲟糖异生途径关键酶基因全长 cDNA的克隆和序列分析

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动物营养学报 2013年第7期25卷 1504-1518页

作者：宫官薛敏王嘉苏晓鸥吴秀峰郑银桦韩芳中国农业科学院饲料研究所国家水产饲料安全评价基地北京100081 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所北京100081

本试验采用简并引物反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆西伯利亚鲟(Acipenser baerii)肝脏糖异生途径关键酶———C型和M型磷酸烯醇式丙酮酸羧基酶(PEPCK-C和PEPCK-M)、果糖-1,6-二磷酸酶(FBPase)和葡萄糖-6... 详细信息

本试验采用简并引物反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆西伯利亚鲟(Acipenser baerii)肝脏糖异生途径关键酶———C型和M型磷酸烯醇式丙酮酸羧基酶(PEPCK-C和PEPCK-M)、果糖-1,6-二磷酸酶(FBPase)和葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)基因cDNA全长序列。结果显示:西伯利亚鲟PEPCK-C基因(GenBank登录号JQ995143)cDNA全长2 598 bp,开放阅读框1 869 bp,编码622个氨基酸,预测其分子质量为69.62 ku,与其他物种的相似性为77.3%～80.5%;PEPCK-M基因(GenBank登录号JQ995142)cDNA全长3 277 bp,开放阅读框1 935 bp,编码644个氨基酸,预测其分子质量为71.11 ku,与其他物种的相似性为64.6%～78.3%;FBPase基因(GenBank登录号JF834908)cDNA全长1 372 bp,开放阅读框1 017 bp,编码338个氨基酸,预测其分子质量为36.60 ku,与其他物种的相似性为73.4%～88.7%;G6Pase基因(GenBank登录号JF834907)cDNA全长2 625 bp,开放阅读框1 080 bp,编码359个氨基酸,预测其分子质量为40.62 ku,与其他物种的相似性为67.2%～72.7%。西伯利亚鲟糖异生途径关键酶基因全长cDNA序列的获得将为进一步研究其糖异生调控机理,比较其与典型肉食性鱼类和哺乳动物的异同奠定基础。

关键词：基因克隆糖异生磷酸烯醇式丙酮酸羧基酶果糖-1,6-二磷酸酶葡萄糖-6-磷酸酶西伯利亚鲟

胃转流手术对糖尿病大鼠肝脏糖代谢相关因子表达的影响

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胃转流手术对糖尿病大鼠肝脏糖代谢相关因子表达的影响

作者：李旭忠苏州大学

学位级别：硕士

目的:通过建立肥胖性2型糖尿病(T 2 D M)胃转流手术(G B P)大鼠模型,探讨G B P手术对肝脏糖代谢相关因子表达的影响。方法:将1 2只6周龄S D大鼠随机分为正常对照组(N C D,n=4)、高脂组(H F D,n=4)和高脂手术组(H F D-G B P,n=4)。H F D... 详细信息

目的:通过建立肥胖性2型糖尿病(T 2 D M)胃转流手术(G B P)大鼠模型,探讨G B P手术对肝脏糖代谢相关因子表达的影响。方法:将1 2只6周龄S D大鼠随机分为正常对照组(N C D,n=4)、高脂组(H F D,n=4)和高脂手术组(H F D-G B P,n=4)。H F D组大鼠经高脂饲料喂养4周后,通过腹腔注射链脲佐菌素构建T 2 D M模型,术前比较两组体质量、空腹血糖(F P G)、葡萄糖耐受、胰岛素敏感性的变化。2周后,构建H F D-G B P组胃转流手术模型,连续观察2周,比较手术前后两组体质量、空腹血糖、血清胆汁酸(B A)、总胆固醇(T C H)、甘油三酯(T G)的变化,并分别提取3组大鼠肝组织的总R N A和蛋白,通过R T-P C R、W e s t e r n印迹法检测法呢醇X受体(F X R)、磷酸烯醇式丙酮酸羧基激酶(P E P C K)、葡萄糖-6-磷酸酶(G 6 P a s e)、葡萄糖转运体2(G L U T 2)和成纤维细胞生长因子-2 1(F G F-2 1)的表达水平。结果:与N C D和H F D组大鼠相比,H F D-G B P大鼠血清总胆汁酸水平显著升高(p酸水平明显升高;F X R、P E P C K、G L U T 2和F G F-2 1的表达变化可能参与G B P术后的血糖调节过程。

关键词：胃转流术 2型糖尿病胆汁酸法呢醇X受体磷酸烯醇式丙酮酸羧基酶

雌二醇和黄体酮联用对STZ所致卵巢切除小鼠糖尿病发生的预防作用研究

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雌二醇和黄体酮联用对STZ所致卵巢切除小鼠糖尿病发生的预防作用...

作者：剡媛兰州大学

学位级别：硕士

目的:雌激素和孕激素与糖尿病发生关系密切,其在糖尿病发生发展过程中的作用与机体所处的生理状态及血中雌、孕激素水平有关,而且二者联用作用如何还不完全清楚。因此,本文通过腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ),建立小鼠1型糖尿... 详细信息

目的:雌激素和孕激素与糖尿病发生关系密切,其在糖尿病发生发展过程中的作用与机体所处的生理状态及血中雌、孕激素水平有关,而且二者联用作用如何还不完全清楚。因此,本文通过腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ),建立小鼠1型糖尿病模型,探讨雌、孕激素在糖尿病发生发展中的相互作用和关系,为糖尿病诊治及性激素在糖、脂代谢中的作用提供理论依据。方法:购买雌性昆明小鼠,切除卵巢,术后恢复一周,随机分为11组,分别为:(1)卵巢切除组(OVX),(2)卵巢切除+腹腔注射STZ(OVX+STZ),(3)卵巢切除+腹腔注射STZ+皮下注射0.01mg/kg体重17β-雌二醇(E0.01),(4)卵巢切除+腹腔注射STZ+皮下注射0.1mg/kg体重17β-雌二醇(E0.1),(5)卵巢切除+腹腔注射STZ+皮下注射1mg/kg体重17β-雌二醇(E1),(6)卵巢切除+腹腔注射STZ+皮下注射0.1mg/kg体重黄体酮(P0.1),(7)卵巢切除+腹腔注射STZ+皮下注射2mg/kg体重黄体酮(P2),(8)卵巢切除+腹腔注射STZ+皮下注射8mg/kg体重黄体酮(P8),(9)卵巢切除+腹腔注射STZ+皮下合并注射0.1mg/kg体重雌二醇和0.1mg/kg体重黄体酮组(EP0.1),(10)卵巢切除+腹腔注射STZ+皮下合并注射0.1mg/kg体重17β-雌二醇和2mg/kg体重黄体酮(EP2),(11)卵巢切除+腹腔注射STZ+皮下合并注射0.1mg/kg体重17β-雌二醇和8mg/kg体重黄体酮(EP8)。STZ按每天50mg/kg体重的剂量连续腹腔注射5天,同时隔天皮下注射黄体酮、17β-雌二醇或联合注射17β-雌二醇和黄体酮。每周测血糖和体重1次。给药五周后,进行糖耐量和胰岛素抵抗实验,同时部分小鼠摘眼球采血后颈椎脱臼处死,分别冻存和固定组织,采用HE染色对胰岛细胞进行观察,利用化学发光法和Elisa技术检测血清中黄体酮、17β-雌二醇、C肽(C-Peptide)及胰岛素(Insulin)水平,通过RT-PCR及免疫荧光技术检测骨骼肌糖转运蛋白4(GLUT4),肝脏糖转运蛋白2(GLUT2),葡萄糖激酶(Gck),葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P),磷酸烯醇式丙酮酸羧基酶(PCK)及胰岛素受体(Insulin receptor,IR)的表达水平。结果:STZ所致的1型糖尿病小鼠血糖明显升高,体重下降,出现糖尿症;糖耐量明显受损,胰岛细胞萎缩,C肽和胰岛素分泌明显减少;骨骼肌GLUT4和肝脏Gck表达下调,肝脏GLUT2、G-6-p和PCK表达明显上调,但无明显的胰岛素抵抗,胰岛素受体表达也无明显变化。中剂量(0.1mg/kg体重)和大剂量(1mg/kg体重)17β-雌二醇可明显延缓STZ所致小鼠1型糖尿病的发生,使其血糖降低;低剂量(0.01mg/kg体重)17β-雌二醇无明显影响。中剂量(0.1mg/kg体重)的17β-雌二醇还可改善糖耐量,保护胰岛细胞,使C肽和胰岛素分泌增加,骨骼肌GLUT4和肝脏Gck表达上调,肝脏GLUT2、PCK和G-6-P表达显著下调。中剂量(2mg/kg体重)黄体酮单独给药可明显延缓STZ所致小鼠1型糖尿病的发生,保护胰岛细胞,使C肽和胰岛素分泌增加,降低血糖;黄体酮还可使骨骼肌GLUT4和肝脏Gck表达上调,肝脏GLUT2、PCK和G-6-P表达显著下调,但剂量不同,作用效果不同,且不表现剂量效应关系,对糖耐量也无明显改善作用。低剂量(0.1mg/kg体重)和中剂量(2mg/kg体重)黄体酮与17β-雌二醇(0.1mg/kg体重)联合给药对STZ所致小鼠1型糖尿病发生的延缓作用、胰岛细胞的保护作用、C肽和胰岛素的分泌及血糖降低作用均具有一定的协同效应;但对于骨骼肌GLUT4及肝脏GLUT2、Gck、PCK和G-6-P的表达,低剂量(0.1mg/kg体重)和大剂量(8mg/kg体重)黄体酮与17β-雌二醇0.1mg/kg体重联用主要表现出拮抗效应,而中剂量(2mg/kg体重)黄体酮与0.1mg/kg体重17β-雌二醇联用主要表现出协同效应。结论:1.17β-雌二醇和黄体酮单独给药均可延缓STZ所致小鼠1型糖尿病的发生,但不表现剂量效应关系;皮下注射中剂量的17β-雌二醇(0.1mg/kg体重)和黄体酮(2mg/kg体重)可使血药浓度达到生理剂量范围,可明显抑制STZ所致小鼠血糖的升高。2.17β-雌二醇和黄体酮延缓糖尿病发生机制是多方面的,可能与其保护胰岛细胞、促进胰岛素释放、改变骨骼肌葡萄糖转运及肝脏糖代谢有关。3.生理剂量的黄体酮与17β-雌二醇联用对17β-雌二醇延缓糖尿病的发生及影响糖转运和糖代谢具有一定的协同效应,可加强17β-雌二醇对糖尿病的预防作用。

关键词： 17β-雌二醇黄体酮 1型糖尿病胰岛素抵抗糖耐量葡萄糖转运体2、4 磷酸烯醇式丙酮酸羧基酶葡萄糖激酶葡萄糖6-磷酸酶

内脏脂肪素对糖尿病小鼠肝组织AKT、FoxO1及PEPCK表达的影响

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遵义医学院学报 2018年第2期41卷 145-149页

作者：袁世英杨丽弘张琳张晗高琳遵义医学院附属医院内分泌科贵州遵义563099

目的观察内脏脂肪素(visfatin)对糖尿病小鼠肝脏蛋白激酶B(AKT)、叉头转录因子1(FoxO1)及磷酸烯醇式丙酮酸羧基酶(PEPCK)表达的影响,探讨visfatin在肝组织糖异生过程中的作用。方法 16只C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组及饮食诱导高脂组... 详细信息

目的观察内脏脂肪素(visfatin)对糖尿病小鼠肝脏蛋白激酶B(AKT)、叉头转录因子1(FoxO1)及磷酸烯醇式丙酮酸羧基酶(PEPCK)表达的影响,探讨visfatin在肝组织糖异生过程中的作用。方法 16只C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组及饮食诱导高脂组,24只KKAy小鼠随机分为糖尿病模型组、visfatin组及visfatin+LY294002组,分别予PBS、PBS、PBS、visfatin(6μg/kg,0.05m L/10g)、visfatin(6μg/kg,0.05 m L/10g)+LY294002(0.35μg/g,0.05 m L/10g)干预3 d后,测定血糖、血脂及胰岛素,计算HOMA-IR,RT-PCR测定肝组织AKT、FoxO1、PEPCK的mRNA表达,免疫组化测定肝脏组织AKT、FoxO1蛋白表达。结果糖尿病模型组AKT mRNA及蛋白表达较正常对照组及高脂组均显著降低(P<0.01),FoxO1mRNA及其蛋白、PEPCK mRNA表达较正常对照组均显著增高(P<0.01);visfatin组AKT mRNA及蛋白表达较糖尿病模型组显著增高(P<0.05),FoxO1 mRNA及其蛋白、PEPCK mRNA表达较糖尿病模型组均显著降低(P<0.01);visfatin+LY294002组AKT mRNA及蛋白表达较visfatin组显著降低(P<0.01),FoxO1蛋白表达较visfatin组显著增高(P<0.05)。结论 Visfatin可能通过PI3K/AKT途径调节FoxO1的表达,参与到肝组织糖异生过程中。

关键词：内脏脂肪素蛋白激酶B 叉头转录因子1 磷酸烯醇式丙酮酸羧基酶