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磷酸化肌球蛋白轻链在大鼠非酒精性脂肪性肝纤维化中的表达

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安徽医科大学学报 2012年第4期47卷 370-374页

作者：路燕宋育林季巍巍许建明安徽医科大学第一附属医院消化内科安徽省高校消化疾病重点实验室合肥230022

目的探讨运用高脂饮食联合小剂量四氯化碳(CCl4)复制大鼠肝纤维化模型的特点,以及磷酸化肌球蛋白轻链[P-MLC(Thr18/Ser19)]在该纤维化模型中的作用。方法 70只SD大鼠随机分为正常对照组(N)、CCl4组(M1)和高脂饮食联合小剂量CCl4组(M2)。... 详细信息

目的探讨运用高脂饮食联合小剂量四氯化碳(CCl4)复制大鼠肝纤维化模型的特点,以及磷酸化肌球蛋白轻链[P-MLC(Thr18/Ser19)]在该纤维化模型中的作用。方法 70只SD大鼠随机分为正常对照组(N)、CCl4组(M1)和高脂饮食联合小剂量CCl4组(M2)。N组皮下注射花生油3 ml/kg,2次/周;M1组采用400 ml/L CCl4花生油混合液,3 ml/kg,2次/周皮下注射;M2组采用高脂饮食联合小剂量CCl4造模,其CCl4用量2 ml/kg,浓度和频次同M1组。造模后8周末、10周末分批处死,检测肝功能、血脂、光镜观察大鼠肝脏脂肪变性及肝纤维化程度。免疫组化法检测肝脏P-MLC的表达。结果与N组比较,8周和10周末,M1组血浆球蛋白(GLO)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平,P-MLC的表达及肝脂肪变性,纤维化程度均升高,但白球比(A/G)下降。与M1组比较,8周末,M2组ALT、AST下降,但脂肪变性增强;10周末,M2组白蛋白(ALB)、A/G下降,而ALT、AST上升明显;8周和10周末M2组P-MLC的表达及肝纤维化程度均强于M1组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论高脂饮食联合小剂量CCl4皮下注射复制大鼠肝纤维化模型,具有造模时间短,成功率高的优点。P-MLC的表达随着肝纤维化的进展而增加,P-MLC在非酒精性脂肪性肝纤维化中起着一定的作用。

关键词：肝纤维化模型大鼠高脂饮食四氯化碳磷酸化肌球蛋白轻链

缺氧诱导因子1α对大鼠血管内皮细胞通透性的调控作用及相关机制

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中华烧伤杂志 2019年第3期35卷 209-217页

作者：胡德林余又新梁荣周舜英段声梁蒋智永孟承颖蒋薇王欢孙业祥方林森安徽医科大学第一附属医院烧伤科合肥230022 安徽省肥西县上派镇中心卫生院烧伤科 231200

目的探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)对大鼠血管内皮细胞通透性的调控作用及相关机制。方法取12只雄性SD大鼠,35~38d龄,分离主动脉培养血管内皮细胞,4d后观察细胞形态,并取第2或3代细胞进行以下实验。(1)取大鼠血管内皮细胞,采用随机数字... 详细信息

目的探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)对大鼠血管内皮细胞通透性的调控作用及相关机制。方法取12只雄性SD大鼠,35~38d龄,分离主动脉培养血管内皮细胞,4d后观察细胞形态,并取第2或3代细胞进行以下实验。(1)取大鼠血管内皮细胞,采用随机数字表法(分组方法下同)分为空白对照组、阴性对照组、HIF-1α干扰序列1组、HIF-1α干扰序列2组和HIF-1α干扰序列3组,每组3孔。阴性对照组和HIF-1α干扰序列1组、HIF-1α干扰序列2组和HIF-1α干扰序列3组细胞经脂质体2000分别转染GV248空质粒和含HIF-1α干扰序列1、干扰序列2、干扰序列3的GV248重组质粒,空白对照组细胞仅加入脂质体2000。转染24h后,采用实时荧光定量反转录PCR法和蛋白质印迹法(检测方法下同)分别检测各组细胞HIF-1α的mRNA和蛋白的表达,选取干扰效率最高的序列。(2)另取大鼠血管内皮细胞,分为空白对照组、阴性对照组和HIF-1α低表达组,每组3孔。空白对照组细胞仅加入脂质体2000,阴性对照组和HIF-1α低表达组细胞经脂质体2000分别转染GV248空质粒及实验(1)中筛选的低表达HIF-1α重组质粒。培养14d,检测各组细胞HIF-1α的mRNA和蛋白表达水平。(3)另取大鼠血管内皮细胞,分为空白对照组、阴性对照组、HIF-1α高表达组,每组3孔。空白对照组细胞仅加入脂质体2000,阴性对照组、HIF-1α高表达组细胞经脂质体2000分别转染GV230空质粒和HIF-1α高表达重组质粒。培养14d,检测各组细胞HIF-1α的mRNA和蛋白表达水平。(4)取实验(1)中3组、实验(2)中3组细胞,检测肌球蛋白轻链激酶(MLCK)、磷酸化肌球蛋白轻链(p-MLC)和带状闭合蛋白1(ZO-1)的mRNA和蛋白表达水平。对数据行单因素方差分析、t检验。结果培养4d,细胞呈梭形,成功培养出大鼠血管内皮细胞。(1)HIF-1α干扰序列1组、HIF-1α干扰序列2组和HIF-1α干扰序列3组细胞HIF-1α的干扰效率分别为47.66%、45.79%、62.62%,干扰序列3组细胞干扰效率最高。转染24h后,HIF-1α干扰序列3组细胞HIF-1α的mRNA和蛋白表达水平明显低于空白对照组(t=18.404、9.140,P蛋白表达水平明显低于空白对照组(t=21.140、5.440,P蛋白表达水平明显高于空白对照组(t=19.160,7.710,P蛋白表达水平显著低于空白对照组(t=2.652、3.983,P蛋白表达显著高于空白对照组和阴性对照组(t=3.881、3.570,P蛋白表达水平为1.18±0.24、0.68±0.22,显著高于空白对照组的0.41±0.21、0.35±0.14(t=5.011、3.982,P蛋白表达水平为0.08±0.06,显著低于空白对照组的0.20±0.09和阴性对照组的0.19±0.09(t=4.178、3.830,P<0.05或P<0.01)。结论HIF-1α通过上调MLCK、p-

关键词：缺氧诱导因子,α亚基血管通透性内皮细胞肌球蛋白轻链激酶磷酸化肌球蛋白轻链带状闭合蛋白1

补中益气汤治疗脾气虚证大鼠肌无力的机制研究

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中国实验方剂学杂志 2015年第3期21卷 92-95页

作者：周昕欣王彩霞辽宁中医药大学附属第二医院沈阳110034 辽宁中医药大学沈阳110101

目的：研究脾气虚证大鼠体重、肛温、耐寒冷存活百分率、游泳时间和骨骼肌磷酸化肌球蛋白轻链表达变化,明确补中益气汤治疗脾气虚证大鼠肌无力的可能机制。方法：清洁级Wistar大鼠,采用饮食不节和劳倦过度结合法建立脾气虚证模型,单日... 详细信息

目的：研究脾气虚证大鼠体重、肛温、耐寒冷存活百分率、游泳时间和骨骼肌磷酸化肌球蛋白轻链表达变化,明确补中益气汤治疗脾气虚证大鼠肌无力的可能机制。方法：清洁级Wistar大鼠,采用饮食不节和劳倦过度结合法建立脾气虚证模型,单日喂食甘蓝15-20 g/只,双日胃饲猪油脂3 m L/只,共15 d10造模成功后,实验分为正常组、脾气虚组和补中益气汤组（高、中、低3个剂量组,剂量分别为7.10,3.55,1.78 g·kg^-1）,灌胃给药10 d10分别检测大鼠体重、肛温、耐寒冷存活率、游泳时间,Western blot检测骨骼肌中磷酸化肌球蛋白轻链的表达,比较实验结束前后数值变化。结果：与正常组相比,脾气虚组大鼠的体重、肛温、耐寒冷存活率、游泳时间及磷酸化肌球蛋白轻链表达均显著下降（P〈0.05）;与脾气虚组相比,中、高剂量补中益气汤组的体重、肛温、耐寒冷存活率、游泳时间及磷酸化肌球蛋白轻链表达均显著上升（P〈0.05）。结论：补中益气汤使磷酸化肌球蛋白轻链均表达升高可能是其治疗脾气虚大鼠肌无力的一个重要机制。

关键词：补中益气汤脾气虚磷酸化肌球蛋白轻链肌无力

自噬相关蛋白及P-MLC在大鼠非酒精性脂肪性肝纤维化中的表达及意义

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自噬相关蛋白及P-MLC在大鼠非酒精性脂肪性肝纤维化中的表达及意义

作者：路燕安徽医科大学

学位级别：硕士

目的 (1)探讨运用高脂饮食联合小剂量四氯化碳(CCl)复制大鼠肝纤维化模型的特点。 (2)观察自噬标记物微管相关蛋白轻链3(LC3)和溶酶体相关膜蛋白LAMP-2A在该纤维化模型中的表达及意义。 (3)观察磷酸化肌球蛋白轻链[P-MLC (Thr18/Ser19)... 详细信息

目的 (1)探讨运用高脂饮食联合小剂量四氯化碳(CCl)复制大鼠肝纤维化模型的特点。 (2)观察自噬标记物微管相关蛋白轻链3(LC3)和溶酶体相关膜蛋白LAMP-2A在该纤维化模型中的表达及意义。 (3)观察磷酸化肌球蛋白轻链[P-MLC (Thr18/Ser19)]在该纤维化模型中的表达及意义。方法 (1)70只SD大鼠随机分为正常对照组(N)、CCl组(M1)和高脂饮食联合小剂量CCl组(M2)。N组皮下注射花生油3ml/kg,2次/周;M1组采用400ml/L CCl花生油混合液,3ml/kg,2次/周皮下注射;M2组采用高脂饮食联合小剂量CCl造模，其CCl用量2ml/kg,浓度和频次同M1组。造模后8周末、10周末分批处死，检测肝功能、血脂、光镜观察大鼠肝脏脂肪变性及肝纤维化程度。 (2)免疫组化法检测肝脏P-MLC及LC3的表达;ELISA法测肝脏LAMP-2A的含量。结果 (1)与N组比较，8周和10周末，M1及M2组血清球蛋白(GLO)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平及肝脂肪变性和纤维化程度均升高(P蛋白(ALB)、A/G低于M1组(P<0.05)，而ALT、AST高于M1组(P<0.01);8周和10周末M2组肝纤维化程度均强于M1组(P<0.05)。8周和10周末M2组TC显著高于N组及M1组(P<0.05,P<0.01),但N组与M1组之间无显著差异。8周末血清TG在N、M1、M2三组之间无显著差异。10周末血清M1、M2组TG均显著低于N组(P<0.01)，但M1、M2之间无显著差异。 (2)在8周和10周末，M1、M2组LC3表达水平均高于N组，且M1组高于M2组(P<0.05, P<0.01);而随着时间的进展，M1和M2组在10周末的LC3表达水平均低于8周末(P<0.01)。 (3)在8周和10周末，M1、M2组LAMP-2A的含量均高于N组(P<0.05, P<0.01)，但M2组LAMP-2A的含量低于M1组(P<0.01);而随着时间的进展，同一组大鼠在10周末LAMP-2A的含量低于8周末(P<0.05, P<0.01)。 (4)在8周和10周末，M1组P-MLC表达水平高于N组(P<0.05, P<0.01)，但均明低于M2组(P<0.05, P<0.01);而随着时间的进展，M1和M2组在10周末的P-MLC表达水平均高于8周末P<0.01)。结论 (1)高脂饮食联合小剂量CCl皮下注射复制大鼠肝纤维化模型，具有造模时间短，成功率高的优点。 (2)随着肝纤维化的进展，LC3的表达减弱，提示在非酒精性脂肪性肝纤维化的发展中存在肝脏自噬能力下降，自噬在肝纤维化中可能起到保护作用。 (3)随着肝纤维化的进展，LAMP-2A的含量下降，并与LC3的表达减弱相一致，提示引起LAMP-2A的降低可能是导致非酒精性脂肪性肝纤维化肝脏自噬下降的原因之一。 (4)P-MLC的表达随着肝纤维化的进展而增加，P-MLC在非酒精性脂肪性肝纤维化的发展中起着一定的作用。 (5)高脂饮食可加重CCl所致的非酒精性脂肪性肝纤维化，可能与其进一步降低LC3表达和LAMP-2A含量和升高P-MLC表达有关。

关键词：肝纤维化模型大鼠高脂饮食四氯化碳磷酸化肌球蛋白轻链自噬自噬微管相关蛋白轻链3 溶酶体相关膜蛋白LAMP-2A

电针对糖尿病神经源性膀胱大鼠肌球蛋白系统的影响

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中国中医药信息杂志 2023年第8期30卷 87-93页

作者：韩栩珂周冬祺王佳艺朱婵邱现良陈一丁陈秋陕西中医药大学针灸推拿学院陕西咸阳712046 成都中医药大学附属医院四川成都610072 泰康西南医学中心四川成都610213 四川大学华西第二医院四川成都610021

目的观察电针对糖尿病神经源性膀胱(DNB)大鼠肌球蛋白系统的影响,并探讨其效应机制。方法采用高脂高糖饲料喂养结合单次腹腔注射链脲佐菌素制备DNB大鼠模型,将大鼠分为正常组、模型组、电针组和假电针组,每组10只。电针组电针“肾俞”... 详细信息

目的观察电针对糖尿病神经源性膀胱(DNB)大鼠肌球蛋白系统的影响,并探讨其效应机制。方法采用高脂高糖饲料喂养结合单次腹腔注射链脲佐菌素制备DNB大鼠模型,将大鼠分为正常组、模型组、电针组和假电针组,每组10只。电针组电针“肾俞”“膀胱俞”“中髎”“三阴交”,连续8周。检测大鼠糖耐量、尿流动力学及膀胱质量,电镜观察膀胱组织线粒体变化,ELISA检测膀胱组织垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)38、环磷酸腺苷(cAMP)和蛋白激酶A(PKA)含量,Western blot检测膀胱组织磷酸化肌球蛋白轻链激酶(p-MLCK)和磷酸化肌球蛋白轻链(p-MLC)表达。结果与正常组比较,模型组大鼠糖耐量降低,膀胱最大容量、膀胱顺应性明显升高(P蛋白表达明显降低(P蛋白表达明显升高(P0.05),膀胱最大容量、膀胱顺应性明显降低(P蛋白表达明显升高(P蛋白表达明显降低(P肌球蛋白系统相关收缩元件磷酸化水平,修复逼尿肌细胞受损的线粒体,调节能量代谢,改善膀胱肥大,调控膀胱内压和顺应性,修复DNB模型大鼠受损的膀胱功能。

关键词：电针糖尿病神经源性膀胱磷酸化肌球蛋白轻链激酶磷酸化肌球蛋白轻链 PACAP/cAMP/PKA信号通路肌球蛋白大鼠

大鼠脊髓损伤后肌球蛋白轻链激酶的表达及意义

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中国实用神经疾病杂志 2023年第10期26卷 1286-1290页

作者：崔敏刘阳唐小勇邓永兵重庆市急救医疗中心重庆市第四人民医院重庆400010

目的研究肌球蛋白轻链激酶(MLCK)在大鼠脊髓损伤后的表达变化及意义。方法成年雄性SD大鼠100只,按随机数字表分为对照组(n=50)和损伤组(n=50),通过改良Allen’s的方法构建动物模型,建模后于12 h、1 d、3 d、5 d、7 d 5个时间点分别随机... 详细信息

目的研究肌球蛋白轻链激酶(MLCK)在大鼠脊髓损伤后的表达变化及意义。方法成年雄性SD大鼠100只,按随机数字表分为对照组(n=50)和损伤组(n=50),通过改良Allen’s的方法构建动物模型,建模后于12 h、1 d、3 d、5 d、7 d 5个时间点分别随机选取10只大鼠,处死后取损伤区脊髓组织,伊文斯蓝检测血-脊髓屏障通透性,通过RT-PCR及Western blot法检测MLCK的m RNA与蛋白表达和磷酸化肌球蛋白轻链(P-MLC)的蛋白表达。结果损伤组血-脊髓屏障通透性较对照组显著增高(P蛋白表达以及P-MLC蛋白表达较对照组显著增高(P<0.05)。结论大鼠脊髓损伤后MLCK表达增加可能参与血-脊髓屏障功能损害的发生机制。

关键词：脊髓损伤血-脊髓屏障肌球蛋白轻链激酶磷酸化肌球蛋白轻链