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枳术丸对脾虚证慢传输型便秘小鼠肠道运动及PLc-γ_1/PLc-γ_2信号通路的影响

中国实验方剂学杂志 2019年第10期25卷 8-14页

作者：王伟松夏旭婷刘富林王文凤陈雨波滕广飞王婷涂琴蓉湖南中医药大学第一附属医院长沙410000 湖南中医药大学中医学院长沙410000 湖南中医药大学招生就业处长沙410000 湖南中医药大学第二附属医院长沙410000

目的:探讨枳术丸对脾虚证慢传输型便秘(STc)小鼠肠道传导功能的干预作用,及对小鼠结肠组织磷脂酶c-γ_1(PLc-γ_1)/磷脂酶c-γ_2(PLc-γ_2)信号通路表达的影响。方法:将无特定病原体(SPF)健康小鼠随机分为正常组与造模组。采用番泻叶灌... 详细信息

目的:探讨枳术丸对脾虚证慢传输型便秘(STc)小鼠肠道传导功能的干预作用,及对小鼠结肠组织磷脂酶c-γ_1(PLc-γ_1)/磷脂酶c-γ_2(PLc-γ_2)信号通路表达的影响。方法:将无特定病原体(SPF)健康小鼠随机分为正常组与造模组。采用番泻叶灌胃造成脾虚状态,然后控制饮食饮水的方法造成脾虚便秘的小鼠模型,造模完成后将模型组小鼠随机分为模型组、枳术丸组、莫沙必利组,枳术丸组按9. 0 g·kg^(-1)·d^(-1)给药,莫沙必利组按2. 5 mg·kg^(-1)·d^(-1)给药,模型组和正常组给予等剂量的蒸馏水,连续给药7 d,治疗完成后用印度墨水在结肠中推进的长度计算小鼠肠道推进率;用D-木糖试剂盒测定小鼠血清D-木糖含量;用苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠结肠组织病理改变;采用免疫组化法及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠结肠组织PLc-γ_1,PLc-γ_2蛋白的表达水平;采用实时荧光定量PcR(Real-time PcR)检测PLc-γ_1,PLc-γ_2mRNA表达水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠肠道推进率及血清D-木糖值均显著降低(P c-γ_1,PLc-γ_2蛋白与mRNA表达水平均显著减少(P c-γ_1,PLc-γ_2蛋白与mRNA表达水平均显著升高(P c-γ_1与PLc-γ_2的表达有关。

关键词：枳术丸便秘慢传输型便秘磷脂酶C-γ1/磷脂酶C-γ2信号通路

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枳术丸汤剂含药血清对大鼠结肠cajal间质细胞增殖及PLc-γ信号通路的影响

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中医杂志 2021年第21期62卷 1923-1929页

作者：夏旭婷王婷刘富林涂琴蓉滕广飞湖南中医药大学湖南省410208 湖北省襄阳市中医医院湖南师范大学附属湘东医院中国中医科学院望京医院

目的探讨枳术丸治疗慢传输型便秘的可能作用机制。方法20只SD雄性大鼠随机分为枳术丸汤剂组、空白组,每组10只。枳术丸汤剂组大鼠每日给予浓度为2 g/ml枳术丸汤剂5.8 g灌胃,连续7天,空白组正常饲养。末次给药后1 h腹主动脉采血离心制备... 详细信息

目的探讨枳术丸治疗慢传输型便秘的可能作用机制。方法20只SD雄性大鼠随机分为枳术丸汤剂组、空白组,每组10只。枳术丸汤剂组大鼠每日给予浓度为2 g/ml枳术丸汤剂5.8 g灌胃,连续7天,空白组正常饲养。末次给药后1 h腹主动脉采血离心制备含药血清。采用ccK8法观察磷脂酶c-γ(PLc-γ)特异性抑制剂U73122对大鼠结肠原代cajal间质细胞的细胞抑制率来筛选药物浓度,观察5%、10%、15%、20%浓度的枳术丸汤剂含药血清对cajal间质细胞的细胞增殖率筛选药物浓度,并分别培养12、24、48 h来筛选用药时间。取二或三代cajal间质细胞接种至96孔板中,每孔1×10^(4)个细胞,每组重复3孔。实验分为正常组、模型组(正常细胞+筛选浓度的U73122)、空白血清组(模型组+10%空白血清)、枳术丸汤剂血清组(模型组+筛选浓度枳术丸含药血清)。干预时间为实验筛选出的时间。免疫组化法检测磷脂酶c-γ1(PLc-γ1)、磷脂酶c-γ2(PLc-γ2)阳性表达,Western blot法检测PLc-γ1、PLc-γ2蛋白表达,RT-PcR法检测PLc-γ1、PLc-γ2基因表达。结果筛选出U73122最佳实验药物浓度为30μmol/L,枳术丸汤剂组最佳用药浓度为5%,实验最佳干预时间为24 h。与正常组比较,模型组PLc-γ1、PLc-γ2平均光密度值、蛋白及基因表达均降低(P1);与模型组比较,枳术丸汤剂血清组、空白血清组PLc-γ1、PLc-γ2平均光密度值、蛋白及基因表达均升高(P1);与空白血清组比较,枳术丸汤剂血清组PLc-γ1、PLc-γ2阳性表达、蛋白及基因表达明显增多(P1)。结论枳术丸汤剂可能通过激活cajal间质细胞PLc-γ信号通路,调控细胞增殖,从而促进胃肠运动。

关键词：慢传输型便秘枳术丸 cajal间质细胞肠道动力细胞增殖磷脂酶C-γ1/磷脂酶C-γ2信号通路

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