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磷脂酶c对大肠杆菌细胞膜通透性的影响

现代食品科技 2015年第7期31卷 32-36 31,31页

作者：刘睿杰幸新干于榛榛芮丽莲常明金青哲王兴国食品科学与技术国家重点实验室食品安全与营养协同创新中心江南大学食品学院江苏无锡214122

本文在大肠杆菌(*** BL21 DE3)中分别克隆表达了产气荚膜梭菌(clostridium perfringens)和单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes)来源的磷脂酶c(PLc)基因,并系统研究了内源表达的重组PLc对大肠杆菌BL21(DE3)内外膜通透性的影... 详细信息

本文在大肠杆菌(*** BL21 DE3)中分别克隆表达了产气荚膜梭菌(clostridium perfringens)和单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes)来源的磷脂酶c(PLc)基因,并系统研究了内源表达的重组PLc对大肠杆菌BL21(DE3)内外膜通透性的影响。结果表明内源表达的产气荚膜梭菌和单核细胞增生性李斯特菌重组PLc对宿主菌内膜通透性影响较大,但对宿主菌外膜通透性的影响相对较弱。此外,本文对两种不同来源重组表达的磷脂酶c蛋白进行了分离纯化,分析了外源添加重组磷脂酶c对大肠杆菌BL21(DE3)细胞膜通透性的影响。结果表明外源PLc对大肠杆菌外膜通透性影响较大,而对内膜通透性影响相对较小。综上所述,产气荚膜梭菌和单核细胞增生性李斯特菌来源的磷脂酶c可以改善大肠杆菌细胞膜的通透性,为进一步提高大肠杆菌工程菌株蛋白异源表达提供新的思路。

关键词：磷脂酶c 大肠杆菌细胞膜通透性

磷脂酶cε1的过表达可抑制结肠癌SW6 20细胞的迁移并诱导其凋亡

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肿瘤 2011年第11期31卷 972-976页

作者：王晓亮周崇治裘国强樊军卫邢同海李涛孙星唐华美彭志海上海交通大学附属第一人民医院普通外科上海200080 上海交通大学附属第一人民医院病理科上海200080

目的:探讨磷脂酶cε1(phospholipase c epsilon-1,PLcE1)基因过表达对结肠癌细胞迁移、细胞周期及凋亡等生物学特性的影响。方法:采用脂质体转染的方法建立PLcE1过表达的SW620细胞株,实验分为3组:亲本细胞组(未转染基因),对照组[转染含... 详细信息

目的:探讨磷脂酶cε1(phospholipase c epsilon-1,PLcE1)基因过表达对结肠癌细胞迁移、细胞周期及凋亡等生物学特性的影响。方法:采用脂质体转染的方法建立PLcE1过表达的SW620细胞株,实验分为3组:亲本细胞组(未转染基因),对照组[转染含绿色荧光蛋白(greenfluorescent protein,GFP)的空质粒],实验组(转染质粒pcDNA-DEST53-PLcE1)。分别采用实时荧光定量-PcR(real-time fluorogenic quantitative-PcR,RFQPcR)和蛋白质印迹法检测PLcE1 mRNA和蛋白在SW620细胞中的表达;Transwell小室法检测PLcE1过表达对SW620细胞迁移能力的影响,FcM法检测对细胞周期及凋亡率的影响,DNA Ladder法检测对细胞凋亡的影响。结果:PLcE1过表达可抑制结肠癌SW620细胞的迁移能力,实验组迁移细胞数为(8.80±1.72)个,而亲本组和对照组分别为(32.6±2.42)和(32.2±3.25)个,3组间差异有统计学意义(PcE1过表达可导致结肠癌细胞周期G1期延长,并出现凋亡。结论:PLcE1过表达可抑制结肠癌细胞的迁移能力,并引起细胞凋亡。PLcE1基因过表达使SW620结肠癌细胞恶性程度降低,该基因可能是新的结肠癌相关抑癌基因。

关键词：结肠肿瘤磷脂酶c 转染细胞凋亡 SW620细胞

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诱变蜡状芽孢杆菌产磷脂酶c的研究

中国食品学报 2018年第3期18卷 141-149页

作者：宋玉卿王彤李丹闫世长于殿宇张康逸王俊国吉林工商学院长春130507 东北农业大学食品学院哈尔滨150030 河南省农科院农副产品加工研究所郑州450002

采用3种诱变方法处理出发菌株蜡状芽孢杆菌,得到1株高产磷脂酶c菌株蜡状芽孢杆菌-3。选用沉淀圈直径及活菌数作为参考指标,响应面法优化蜡状芽孢杆菌-3菌株培养条件,结果:接种量2.5%,转速160 r/min,发酵温度30℃,发酵时间18.5 h。此条件... 详细信息

采用3种诱变方法处理出发菌株蜡状芽孢杆菌,得到1株高产磷脂酶c菌株蜡状芽孢杆菌-3。选用沉淀圈直径及活菌数作为参考指标,响应面法优化蜡状芽孢杆菌-3菌株培养条件,结果:接种量2.5%,转速160 r/min,发酵温度30℃,发酵时间18.5 h。此条件下,沉淀圈直径最大,磷脂酶c活力达26.23 U/m L。对粗酶液进行分离纯化,利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定纯化后的磷脂酶c分子质量,其分子质量在29~34 ku之间。

关键词：蜡状芽孢杆菌诱变磷脂酶c 酶活力

磷脂酶c分子在结核分枝杆菌触发树突状细胞细胞骨架重排中的作用

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浙江大学学报（医学版） 2013年第2期42卷 184-191页

作者：徐水凌徐妍黄佳范宏彦金梦媚嘉兴学院医学院病原生物学教研室浙江嘉兴314001 遵义医学院.珠海校区广东珠海519041

目的:研究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)侵入小鼠树突状细胞株(Dc2.4)时细胞骨架微丝、微管变化及其与磷脂酶c(PLc)分子的关系。方法:建立人结核分枝杆菌H37Rv株Dc2.4细胞混合培养模型。采用罗丹明标记的鬼笔环肽(Palloidin... 详细信息

目的:研究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)侵入小鼠树突状细胞株(Dc2.4)时细胞骨架微丝、微管变化及其与磷脂酶c(PLc)分子的关系。方法:建立人结核分枝杆菌H37Rv株Dc2.4细胞混合培养模型。采用罗丹明标记的鬼笔环肽(Palloidin-TRITc)染细胞F-actin,用抗微管蛋白β亚单位的小鼠一抗和荧光素标记的兔抗小鼠二抗染细胞微管,检测H37Rv株侵入Dc2.4细胞时细胞骨架的变化情况,并计算F-actin重排率。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测Dc2.4细胞浆和细胞膜中PLc分子的表达。采用PLc分子抑制剂U73122预处理Dc2.4细胞,观察H37Rv株侵入率变化以及对细胞骨架变化的影响。结果:结核分枝杆菌H37Rv株与Dc2.4细胞共育2 h,即见有细菌侵入,共育4、6、8、10、12 h后,H37Rv侵入率分别为(26.1±4.5)%、(39.9±5.6)%、(51.2±5.9)%、(57.9±6.1)%和(63.9±6.8)%;H37Rv侵入2、4、6、8、10、12 h时,F-actin重排百分率分别为(26.9±1.5)%、(59.3±2.8)%、(72.7±4.8)%、(78.2±5.9)%、(63.3±2.9)%和(43.2±2.6)%,而PLc信号分子阻断后,Dc2.4细胞的侵入率则分别为(13.6±3.1)%、(14.2±3.9)%、(15.1±4.3)%、(16.8±4.0)%和(18.3±5.2)%,F-actin重排率也分别为(18.5±1.2)%、(22.3±1.7)%、(23.6±2.5)%、(24.8±2.3)%、(22.3±1.3)%和(23.8±1.8)%,而微管变化不大;混合培养4、6、8、10 h,PLc信号通路阻断前的侵入率和F-actin重排率明显高于PLc分子阻断后(Pc2.4细胞膜中的PLc分子表达即开始升高,至8 h时达最高;U73122可抑制Dc2.4细胞膜中PLc分子的表达,而对细胞浆中的PLc分子影响不大。结论:结核分枝杆菌可通过激活Dc2.4细胞PLc分子触发F-actin细胞骨架重排,从而侵入Dc2.4细胞,且PLc分子的表达主要存在于Dc2.4细胞膜上。

关键词：分枝杆菌,结核树突细胞细胞学 c型磷脂酶类细胞骨架超微结构基因重排小鼠树突状细胞细胞骨架,重排磷脂酶c

磷脂酶c参与ParA1诱导的烟草悬浮细胞死亡和防卫反应

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中国农业科学 2010年第20期43卷 4176-4182页

作者：魏芳芳王蕾王莲莲柳金伟梁元存王玉军山东农业大学植物保护学院

【目的】研究寄生疫霉Phytophthora parasitica分泌的蛋白激发子ParA1诱导烟草悬浮细胞后,磷脂酶c(phospholipase c,PLc)参与ParA1诱导烟草过敏细胞死亡(hypersensitive cell death,HcD)和防卫反应。【方法】采用药理学方法,在烟草悬浮... 详细信息

【目的】研究寄生疫霉Phytophthora parasitica分泌的蛋白激发子ParA1诱导烟草悬浮细胞后,磷脂酶c(phospholipase c,PLc)参与ParA1诱导烟草过敏细胞死亡(hypersensitive cell death,HcD)和防卫反应。【方法】采用药理学方法,在烟草悬浮细胞中添加PLc抑制剂,比较烟草悬浮细胞受ParA1诱导后细胞死亡和多种防卫反应的差别。【结果】PLc特异性抑制剂U73122能完全抑制ParA1引起的烟草悬浮细胞死亡,氧迸发、胞外基质碱化和植保素scopoletin(7-羟基-6-甲氧基香豆素)积累都能显著地被抑制,5种防卫基因hin1、hsr203J、PR(pathogenesis-related)-1a、PR-1b和PAL等的转录表达也都受到U73122不同程度的抑制。【结论】ParA1处理烟草悬浮细胞后,PLc参与了ParA1诱导细胞死亡和防卫反应的信号传导过程。

关键词：磷脂酶c ParA1 烟草细胞死亡防卫反应

磷脂酶c通过抑制T-ALL细胞凋亡发挥促癌作用

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中国实验血液学杂志 2023年第4期31卷 931-938页

作者：曾腊梅舒逸朱丹马德禹 Filippus I Tshavuka 张虹洋邹琳重庆医科大学附属儿童医院临床分子医学中心国家儿童健康与疾病临床医学研究中心儿童发育疾病研究教育部重点实验室儿科学重庆市重点实验室重庆400014 上海交通大学医学院附属儿童医院临床研究中心上海交通大学医学院儿童感染免疫与重症医学研究院上海200062

目的:探讨磷脂酶c(PLc)家族各成员在急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)进展中的作用。方法:泛PLc抑制剂U73122和Edelfosine处理T-ALL细胞,AnnexinV-PE/7-AAD双染法检测细胞凋亡。cox回归和Kaplan-Meier法分析PLc蛋白对T-ALL患者无事件生存率(EFS)的影响。单因素方差分析PLc在各亚型T-ALL中的表达。构建PLcβ1、PLcγ1、PLcη1siRNA逆转录质粒,HEK-293T细胞包装逆转录病毒感染T-ALL细胞。利用RT-PcR和Westernblot检测基因表达。结果:4种T-ALL细胞系中,P12-IcH和ccRF-cEM对U73122和Edelfosine敏感,Jurkat和MOLT4对其耐药。TARGET-ALL数据库中,PLcβ1、PLcγ1、PLcη1高表达T-ALL患者预后不良,PLcβ1、PLcγ1、PLcη1在T-ALL各亚型中分布不均。在P12-IcH和ccRF-cEM中,PLcβ1、PLcγ1和PLcη1分别维持白血病细胞生存,而在MOLT4中,PLcβ1、PLcγ1和PLcη1对细胞生存无影响。结论:PLcβ1、PLcγ1和PLcη1能维持T-ALL细胞株体外生长,促进T-ALL恶性进展,是潜在的治疗靶点。

关键词：磷脂酶c 急性T淋巴细胞白血病细胞凋亡预后

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磷脂酶c诱导膜融合的初步研究

生物物理学报 1996年第1期12卷 43-50页

作者：公衍道丁凤李菲赵南明清华大学生物科学与技术系生物膜与膜生物工程国家重点实验室

用光散射、电镜和荧光共振能量转移技术研究了ＰＬＣ诱导两种单一膜脂组分的模型膜即二油酸磷脂酰胆碱（ＤＯＰＣ：ｄｉｏｌｅｏｙｌｐｈａｐｈｅｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ）脂质体和二豆蔻酰磷脂酰胆碱（ＤＭＰＣ：ｄｉｍｙｒｉｓｔｏ... 详细信息

用光散射、电镜和荧光共振能量转移技术研究了ＰＬＣ诱导两种单一膜脂组分的模型膜即二油酸磷脂酰胆碱（ＤＯＰＣ：ｄｉｏｌｅｏｙｌｐｈａｐｈｅｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ）脂质体和二豆蔻酰磷脂酰胆碱（ＤＭＰＣ：ｄｉｍｙｒｉｓｔｏｙｌｐｈｏｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｅｌｏｎｅ）脂质体膜融合的可能性。结果表明：ＰＬＣ可以引起ＤＯＰＣ脂质体的融合。在相同的条件下，未见到ＤＭＰＣ脂质体的融合。这就首次证明了ＰＬＣ诱导单一组分脂质体融合的可能性。结果还表明：ＰＬＣ诱导脂质体膜融合的可能性大小与膜脂结构有关。用大鼠血影膜、人红细胞膜、大鼠巨噬细胞膜和大花萱草花瓣原生质体膜等天然生物膜作为材料，研究了磷脂酶Ｃ（ＰＬＣ：ｐｂｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅＣ）诱导上述各种天然膜融合的可能性，均未观察到膜融合现象。提示ＰＬＣ不易诱导天然细胞膜的融合。

关键词：磷脂酶c 膜融合天然膜

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磷脂酶c在酶法脱胶中的研究进展

中国油脂 2013年第7期38卷 19-22页

作者：余榛榛常明刘睿杰金青哲刘元法王兴国江南大学食品学院江苏无锡214122

磷脂酶c(PLc)是一种作用于甘油磷脂c3位上甘油磷酸酯键的脂类水解酶,水解产物为甘油二酯及有机磷酸酯(磷酸胆碱、磷酸乙醇胺或磷酸肌醇等)。应用PLc进行酶法脱胶因具有显著提高毛油精炼率的优点而得到越来越广泛的关注。主要介绍了PLc... 详细信息

磷脂酶c(PLc)是一种作用于甘油磷脂c3位上甘油磷酸酯键的脂类水解酶,水解产物为甘油二酯及有机磷酸酯(磷酸胆碱、磷酸乙醇胺或磷酸肌醇等)。应用PLc进行酶法脱胶因具有显著提高毛油精炼率的优点而得到越来越广泛的关注。主要介绍了PLc酶法脱胶的原理、研究进展及PLc酶法脱胶中存在的问题,以期推动PLc酶法脱胶在我国的研究及应用。

关键词：磷脂酶c 植物油酶法脱胶

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脂质体荧光探针检测磷脂酶c的活性

分析化学 2017年第9期45卷 1278-1283页

作者：谷巧荣艾俊杰张倩云董雅男高强陕西师范大学化学化工学院

建立了一种以荧光标记脂质体为探针检测磷脂酶c（PLc）活性的新方法。此荧光探针是由二棕榈酰磷脂酰胆碱（DPPc）和丽丝胺罗丹明B标记的荧光磷脂（Liss Rhod PE）通过自组装形成有序的荧光标记脂质体,探针脂质体中Liss Rhod PE由于相互... 详细信息

建立了一种以荧光标记脂质体为探针检测磷脂酶c（PLc）活性的新方法。此荧光探针是由二棕榈酰磷脂酰胆碱（DPPc）和丽丝胺罗丹明B标记的荧光磷脂（Liss Rhod PE）通过自组装形成有序的荧光标记脂质体,探针脂质体中Liss Rhod PE由于相互之间距离靠近产生自猝灭效应,因而作为探针的脂质体并不表现出荧光性质。当在此探针溶液中加入目标物PLc,PLc可以水解切割标记在磷脂酰基二位上的荧光团罗丹明,使其从脂质体释放到溶液中,导致自猝灭效应的减弱,溶液荧光信号增强,以此实现对PLc活性的检测。使用此探针检测PLc活性,荧光强度的增加值与PLc浓度在5;00 U/L范围内呈良好的线性关系,检出限为2 U/L（S/N=3）。此外,此探针还可用于PLc抑制剂的筛选。

关键词：荧光脂质体探针磷脂酶c 抑制剂