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基于mRNA测序筛选先天性膈疝大鼠模型肺PI3K/AKT/eNOS/VEGF的基因表达差异

中华小儿外科杂志 2023年第3期44卷 259-266页

作者：黄晓松靳茜雅谭诚蒋琴侯昉李瑶悦刘文英电子科技大学附属四川省人民医院儿童医学中心小儿外科成都610072 四川省德阳市人民医院基本外科德阳618000

目的研究除草醚诱导的先天性膈疝大鼠模型的肺组织中磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶b/内皮型一氧化氮合酶/血管内皮生长因子(PI3K/AKT/eNOS/VEGF)基因表达情况。方法制作先天性膈疝大鼠模型,将10只SPF级雌性SD大鼠在怀孕9.5 d时通过随机数... 详细信息

目的研究除草醚诱导的先天性膈疝大鼠模型的肺组织中磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶b/内皮型一氧化氮合酶/血管内皮生长因子(PI3K/AKT/eNOS/VEGF)基因表达情况。方法制作先天性膈疝大鼠模型,将10只SPF级雌性SD大鼠在怀孕9.5 d时通过随机数字表法分组,分为对照组5只及膈疝组5只,于孕21.5 d时解剖出胎鼠肺组织,通过HE染色检测胎鼠肺组织发育情况;α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)免疫荧光技术检测肺小动脉肌化程度;对照组与膈疝组各取3份胎鼠左肺组织样本行mRNA测序,进行差异表达基因分析,并对差异表达基因行KEGG功能富集分析;采用qRT-PCR技术检测两组胎鼠肺组织PI3K/AKT/eNOS/VEGF mRNA表达水平;采用酶联免疫吸附试验及一氧化氮(NO)试剂盒分别检测eNOS和NO生成量。结果本研究中,对照组获取78只活胎,膈疝组获取64只活胎,膈疝组中37只胎鼠形成膈疝,膈疝率57.8%(37/64);HE染色后膈疝组相较于对照组存在明显肺发育不全及血管重构;免疫荧光显示膈疝组α-SMA表达增高(P<0.01),提示膈疝组胎鼠肺血管中膜厚度增厚且血管肌化水平增加。mRNA测序结果膈疝组与对照组相比,差异基因有4871个,其中下调基因有3741个,上调基因有1130个。这些差异基因主要富集于PI3K/AKT信号通路、MAPK信号通路、Rap1信号通路、cAMP信号通路、催产素信号通路、Apelin信号通路、松弛素(Relaxin)信号通路、环磷酸鸟苷(cGMP-PKG)信号通路等。qRT-PCR显示,膈疝组与对照组相比PI3K/AKT/eNOS/VEGF均下调(P<0.05)。测定eNOS膈疝组浓度(8.720±0.729)ng/ml相比于对照组浓度(11.084±0.605)ng/ml降低;膈疝组NO浓度(2.811±0.213)μmol/gprot相比于对照组浓度(4.598±0.588)μmol/gprot降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论除草醚诱导的先天性膈疝大鼠模型肺组织中,PI3K/AKT/eNOS/VEGF基因表达下调以及NO生成减少,肺血管重塑及新生血管减少可能与之相关。

关键词：疝,横膈,先天性 mRNA测序磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶b途径内皮型一氧化氮合酶血管内皮生长因子

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