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氟砷联合染毒对仔鼠空间学习记忆能力及海马和大脑皮质组织中磷脂酰肌醇激酶和苏氨酸激酶蛋白表达的影响

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环境与健康杂志 2016年第2期33卷 103-108页

作者：朱玉鹏丁婷婷刘晓静李明艳曾洋曹福源佟俊旺蒋守芳华北理工大学公共卫生学院河北省煤矿卫生与安全实验室河北唐山063000 华北理工大学医学实验动物中心

目的探讨氟、砷及其联合染毒对仔鼠空间学习记忆能力及脑组织中磷脂酰肌醇激酶(PI3K)和苏氨酸激酶(AKT)蛋白表达的影响。方法将32只SPF级SD孕鼠随机分为4组,分别为对照(自来水)组、氟(100 mg/L Na F)染毒组、砷(75 mg/L亚砷酸钠)染毒组... 详细信息

目的探讨氟、砷及其联合染毒对仔鼠空间学习记忆能力及脑组织中磷脂酰肌醇激酶(PI3K)和苏氨酸激酶(AKT)蛋白表达的影响。方法将32只SPF级SD孕鼠随机分为4组,分别为对照(自来水)组、氟(100 mg/L Na F)染毒组、砷(75 mg/L亚砷酸钠)染毒组和联合(100 mg/L Na F+75 mg/L亚砷酸钠)染毒组,每组8只。从妊娠第0天至仔鼠出生后21 d(postnatal day 21,PND21),孕鼠经自由饮水方式进行染毒,断乳(PND21)后仔鼠饮用与母鼠相同浓度的染毒溶液继续染毒至PND42。采用Morris水迷宫检测PND21和PND42仔鼠的空间学习记忆能力,采用Western blot方法检测海马和大脑皮质组织中PI3K、AKT和磷酸化AKT(p-AKT)蛋白的表达水平。结果训练第1天时,仅砷染毒组PND21仔鼠的逃避潜伏期长于对照组;训练第11天时,仅联合染毒组PND21仔鼠的逃避潜伏期长于氟染毒组,差异均有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,除PND42氟染毒组AKT蛋白的表达水平较高(P<0.05)外,PND21和PND42氟、砷染毒组及联合染毒组仔鼠海马组织中PI3K、AKT及p-AKT蛋白的表达水平均较低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与氟染毒组相比,PND21时联合染毒组及PND42时砷染毒组和联合染毒组仔鼠海马组织中AKT蛋白的表达水平均较低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,除PND42氟、砷染毒组AKT蛋白外,PND21和PND42氟、砷染毒组及联合染毒组仔鼠大脑皮质组织中PI3K、AKT及p-AKT蛋白的表达水平均较低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与联合染毒组比较,仅氟、砷染毒组PND42仔鼠大脑皮质组织中AKT蛋白的表达水平较高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论氟、砷单独及其联合染毒可能通过降低仔鼠海马和大脑皮质组织PI3K、AKT和p-AKT蛋白的表达水平,损伤其空间学习记忆能力。

关键词：氟砷磷脂酰肌醇激酶苏氨酸激酶

磷脂酰肌醇激酶-3小干扰RNA真核表达载体的构建和鉴定

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广州医学院学报 2010年第3期38卷 24-27页

作者：谢晓谰项红兵陈研生洪庆雄招伟贤党雪芹广东省中医院麻醉科广东广州510120 北京本原正阳公司北京100176

目的：构建和鉴定靶向磷脂酰肌醇激酶-3（PI3K）亚单位编码基因PI3Kcb （catalytic,beta polypeptide）基因的小干扰RNA真核表达载体.方法：根据siRNA设计原则,在PI3Kcb mRNA序列中选择1个特异性靶序列,体外合成对应发卡样DNA片段,经... 详细信息

目的：构建和鉴定靶向磷脂酰肌醇激酶-3（PI3K）亚单位编码基因PI3Kcb （catalytic,beta polypeptide）基因的小干扰RNA真核表达载体.方法：根据siRNA设计原则,在PI3Kcb mRNA序列中选择1个特异性靶序列,体外合成对应发卡样DNA片段,经退火后,将其定向克隆入siRNA载体pDC316-EGFP-U6,重组后获得siRNA载体质粒pDC316-PI3Kcb siRNA-EGFP,采用PCR检测和DNA测序以保证siRNA的方向和序列正确.结果：得到阳性重组克隆pDC316-PI3Kcb siRNA,经过PCR鉴定和测序,结果正确.结论：成功构建靶向PI3Kcb基因的siRNA载体pDC316-PI3Kcb siRNA-EGFP,为PI3Kcb的基因沉默研究奠定了可靠的基础.

关键词：小干扰RNA 磷脂酰肌醇激酶基因表迭

葡萄糖刺激胰岛素分泌中活性氧及磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B通路的变化情况

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中国慢性病预防与控制 2013年第3期21卷 322-324页

作者：肖玲袁倩施冬云周湘兰周连华刘珊林胡仁明复旦大学附属金山医院内分泌科上海200540 复旦大学上海医学院生物化学教研室复旦大学附属华山医院内分泌科

目的研究葡萄糖刺激后胰岛素分泌过程中活性氧(ROS)及磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B通路的变化。方法不同浓度葡萄糖(0、5、10、15、20、25mmol/L)分别干预胰岛β细胞瘤细胞(INS-1)细胞24、48h后,采用2,7-二氯二氢荧光素乙酰乙酸(DCFH-DA)... 详细信息

目的研究葡萄糖刺激后胰岛素分泌过程中活性氧(ROS)及磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B通路的变化。方法不同浓度葡萄糖(0、5、10、15、20、25mmol/L)分别干预胰岛β细胞瘤细胞(INS-1)细胞24、48h后,采用2,7-二氯二氢荧光素乙酰乙酸(DCFH-DA)荧光法检测细胞内ROS水平,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测胰岛素分泌,采用蛋白印迹(Western blot)法检测磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)、蛋白激酶B(AKT)及磷酸化蛋白激酶B(P-AKT)的表达。结果随葡萄糖浓度的升高,INS-1细胞分泌胰岛素水平增加,细胞内ROS水平上升,不同葡萄糖浓度刺激组间比较,差异均有统计学意义(P磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B通路可能为参与调节葡萄糖刺激胰岛素分泌的信号通路之一。

关键词：葡萄糖胰岛素活性氧磷脂酰肌醇激酶蛋白激酶B

麦冬皂苷D通过上调CYP2J3/EET减轻H2O2诱导的H9c2细胞氧化应激损伤

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中国药理学与毒理学杂志 2020年第3期34卷 161-170页

作者：黄小燕张照研陈伯钧高月广州中医药大学第二附属医院广东广州510120 北京工业大学生命科学与生物工程学院北京100124 军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所北京100850

目的探讨麦冬皂苷D(OP-D)对H2O2诱导的H9c2细胞氧化应激损伤的保护作用及机制。方法通过H2O2诱导建立H9c2细胞氧化损伤模型,细胞分为正常对照组(予以无血清培养基培养28 h)、H2O2损伤模型组(H2O2400μmol·L-1处理3 h)、OP-D 5,10和20μ... 详细信息

目的探讨麦冬皂苷D(OP-D)对H2O2诱导的H9c2细胞氧化应激损伤的保护作用及机制。方法通过H2O2诱导建立H9c2细胞氧化损伤模型,细胞分为正常对照组(予以无血清培养基培养28 h)、H2O2损伤模型组(H2O2400μmol·L-1处理3 h)、OP-D 5,10和20μmol·L-1预处理组(OP-D预处理24 h后+H2O2400μmol·L-1处理3 h)、花生四烯酸CYP环氧酶活性抑制剂6-(2-炔丙基羟苯基)己酸(PPOH)干预组(OP-D20μmol·L-1+PPOH 10μmol·L-1,PPOH于OP-D处理前1 h加入细胞)。MTT法测定细胞活性,酶联免疫吸附法(ELISA)检测环氧-二十碳-三烯酸(11,12-DHET和14,15-DHET)含量,ELISA法检测细胞内丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量及乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性,流式细胞术(FCM)检测活性氧(ROS)水平及细胞凋亡水平、Western印迹法检测细胞色素P450 2J3(CYP2J3)、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白和磷酸化内皮型一氧化氮合酶(p-e NOS)蛋白在细胞中的表达,利用PPOH进一步验证OP-D减轻细胞氧化应激的可能内在机制。结果 H2O2400μmol·L-1明显抑制H9c2细胞存活率(P<0.01),OP-D可明显增加H2O2损伤后细胞存活率(P<0.01);不同浓度OP-D增加11,12-DHET和14,15-DHET含量(P<0.05,P<0.01);OP-D增加H2O2损伤后细胞NO含量(P<0.05,P<0.01)、增强SOD活性(P<0.05)及降低MDA、LDH含量(P<0.05,P<0.01);OP-D显著降低H2O2损伤后细胞氧化应激及凋亡水平(P<0.05,P<0.01);OP-D预处理上调H2O2损伤后细胞CYP2J3蛋白和m RNA表达(P<0.05,P<0.01)、激活PI3K/Akt-e NOS通路的磷酸化水平(P<0.05,P<0.01);提前给予PPOH后,OP-D保护效应被抑制(P<0.05,P<0.01)。结论 OP-D能减轻H2O2所致的H9c2细胞损伤,可能是通过诱导CYP2J3表达及增加11,12-DHET和14,15-DHET含量,激活PI3K通路促进其下游因子Akt和e NOS磷酸化发挥作用。

关键词：麦冬皂苷D 细胞色素P4502J3 磷脂酰肌醇激酶氧化应激

KLF4在弥漫性大B细胞淋巴瘤组织中的表达及其作用机制研究

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中国免疫学杂志 2020年第4期36卷 445-450页

作者：林志美李建饶进邹忠晴余晓玲成都大学附属医院血液科成都610081 成都大学临床医学院成都610106

目的:探讨KLF4在弥漫性大B细胞淋巴瘤组织中的表达及其对弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响及作用机制。方法:选择弥漫性大B细胞淋巴瘤石蜡组织标本60例和淋巴结反应增生患者的淋巴结石蜡组织标本60例,免疫组化法测定... 详细信息

目的:探讨KLF4在弥漫性大B细胞淋巴瘤组织中的表达及其对弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响及作用机制。方法:选择弥漫性大B细胞淋巴瘤石蜡组织标本60例和淋巴结反应增生患者的淋巴结石蜡组织标本60例,免疫组化法测定组织中KLF4表达。Western blot和RT-PCR测定弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞系ly1细胞和人B淋巴母细胞系***细胞中KLF4蛋白、mRNA水平。ly1细胞分为空白对照组(不转染病毒)、阴性对照组(转染阴性对照病毒)和过表达KLF4组(转染过表达KLF4病毒),Western blot和RT-PCR测定ly1细胞中KLF4蛋白、mRNA水平,CCK-8测定转染后ly1细胞增殖情况,Transwell小室法测定转染后ly1细胞侵袭和迁移能力,Western blot法测定转染后三组ly1细胞Akt、p-Akt、PI3K、p-PI3K蛋白水平。结果:弥漫性大B细胞淋巴瘤组织B细胞中KLF4阳性表达率(30.0%)低于对照组织B细胞(100.0%)(P0.05)。结论:弥漫性大B细胞淋巴瘤组织中KLF4水平降低,过表达KLF4可能通过PI3K/Akt信号通路抑制弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞增殖和侵袭迁移。

关键词：人锌指转录因子Krüppel样因子4 弥漫性大B细胞淋巴瘤磷脂酰肌醇激酶蛋白激酶B 增殖侵袭迁移

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白桦脂酸对乳腺癌的干预作用及核心通路预测

中药药理与临床 2024年第6期40卷 50-58页

作者：倪雯婷邢中夫孙成宏姚景春张晓平张贵民山东中医药大学济南250355 鲁南制药集团股份有限公司经方与现代中药融合创新全国重点实验室临沂276006

目的:探索白桦脂酸治疗乳腺癌的潜在作用机制。方法:分别通过PharmMapper、Genecards、Drugbank和Therapeutic Target Database (TTD)数据库获得药物和疾病靶点,用String数据库构建蛋白之间的相互作用关系,通过Metascape数据库获得基因... 详细信息

目的:探索白桦脂酸治疗乳腺癌的潜在作用机制。方法:分别通过PharmMapper、Genecards、Drugbank和Therapeutic Target Database (TTD)数据库获得药物和疾病靶点,用String数据库构建蛋白之间的相互作用关系,通过Metascape数据库获得基因本体(GO)和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。用Autodock vina软件进行分子对接并使用Pymol对其进行可视化分析。使用Kaplan-Meier Plotter对关键核心靶点进行预后生存分析。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、克隆形成试验、细胞划痕试验、Transwell试验观察白桦脂酸对乳腺癌MCF-7细胞增殖和迁移能力的影响;AO/EB染色及Annexin V-FITC/PI染色观察白桦脂酸对细胞凋亡的影响;Western blot法观察白桦脂酸对PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响。结果:筛选出白桦脂酸与乳腺癌的交集靶点的蛋白相互作用网络共有33个节点和100条边,平均节点度值为6.06,筛选得到的关键核心靶点为NR3C1、SRC、ALB、MAPK8、PGR和GRB2,其与白桦脂酸对接得到的结合能均激酶活性、转录因子结合等,细胞组分得到7个条目,主要涉及受体复合物、转录因子复合物、膜阀等;KEGG富集分析中共得到172条信号通路,主要有PI3K/AKT通路、Ras通路、ErbB通路、GnRH通路和EGFR通路等。体外实验验证显示:白桦脂酸可以抑制乳腺癌细胞的增殖,且具有剂量依赖性和时间依赖性;白桦脂酸可抑制乳腺癌细胞的迁移、侵袭能力;从定性、定量两个方面证实白桦脂酸可以促进细胞凋亡;白桦脂酸可以显著下调PI3K、AKT和mTOR蛋白表达(P<0.01)。结论:白桦脂酸可抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖、迁移等恶性生物学行为,其机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路蛋白表达相关。

关键词：白桦脂酸网络药理学乳腺癌磷脂酰肌醇激酶蛋白激酶雷帕霉素

可溶性环氧化物水解酶抑制剂经微小RNA-1调节PI3K通路机制的研究

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可溶性环氧化物水解酶抑制剂经微小RNA-1调节PI3K通路机制的研究

作者：刘琼中南大学

学位级别：硕士

目的：1.研究可溶性环氧化物水解酶抑制剂(soluble epoxide hydrolase inhibitor sEHi) t-AUCB(trans-4-(4-(3-adamantan-1-yl-ureido)-cyclohexyloxy)-bensoic acid)干预对原代乳小鼠心肌细胞心肌缺血模型中内向整流型钾电流(IK1)幅度的影响。2.探讨t-AUCB调控微小RNA-1(microRNA-1miR-1)机制,明确miR-1参与P13K通路的调控。方法：体外部分：选取出生1天的昆明小鼠乳鼠,培养原代心肌细胞,分5组进行不同的干预：(1)空白对照组(Ctl);(2) micrONTM mmu-miR-1a-3p agomir (agomiR-1)转染组(agomiR-1);(3) agomiR-1转染+t-AUCB干预组(agomiR-1+t-AUCB);(4) micrONTM mmu-miR-1a-3p agomir negative control组(Neg Ctl);(5) agomiR-1转染+DMSO干预组(agomiR-1+DMSO)。最后以全细胞模式记录钾电流(IK1)。体内部分：1.8周雄性昆明小鼠分成5组：(1)饮用水+假手术组(饮用水+sham);(2)饮用水+心肌梗死组(饮用水--MI);(3) t-AUCB0.2mg/L+心肌梗死组(t-AUCB0.2mg/L+MI);(4)t-AUCB1mg/L+心肌梗死组(t-AUCB1mg/L+MI);(5)t-AUCB5mg/L+心肌梗死组(t-AUCB5mg/L+MI)。24小时后取出心梗后缺血区心肌,运用Western Blot检测缺血区心肌p-AKT、p-GSK3β的表达。2.8周雄性昆明小鼠,用含t-AUCB5mg/L饮用水喂养7天,建立心梗模型后以尾静脉注射转染agomiR-1或阴性对照物agomiR-1Neg Ctl,具体分组如下：(1)饮用水+假手术组(饮用水+sham);(2)饮用水+心肌梗死组(饮用水+MI);(3)饮用水+心肌梗死组+agomiR-1组(饮用水+MI+agomiR-1);(4)饮用水+心肌梗死+agomiR-1Neg Ctl组(饮用水+MI+Neg Ctl);(5)t-AUCB5mg/L+心肌梗死组(t-AUCB5mg/L+MI);(6)t-AUCB5mg/L+心肌梗死+agomiR-1组(t-AUCB5mg/L+MI+agomiR-1)。24小时后取出心梗后缺血区心肌,运用Western Blot检测缺血区心肌p-AKT、p-GSK3β蛋白的表达。3.8周雄性昆明小鼠,用含t-AUCB5mg/L饮用水喂养7天,建立心梗模型后以尾静脉注射或腹腔注射P13K抑制剂wortmannin,具体分组如下：(1)饮用水+假手术组(饮用水+sham);(2)饮用水+心肌梗死组(饮用水+MI);(3)t-AUCB5mg/L+心肌梗死组(t-AUCB5mg/L+MI):(4)t-AUCB5mgL+心肌梗死+wortmannin0.3mg/kg(尾静脉注射)(t-AUCB5mg/L+MI+0.3W[尾]);(5)t-AUCB5mg/L+心肌梗死+wortmannin0.3mg/kg(腹腔注射)(t-AUCB mg/L+MI+O.3W[腹腔])。24小时后取出心梗后缺血区心肌,运用Real-time PCR检测缺血心肌KCNJ2,GJA1mRNA的变化。结果体外部分：1.所测电流的Ⅰ-Ⅴ曲线随着电压增加,其电流偏向于X轴,符合内向整流型钾电流的特点。2.在-100mV,正常对照组的IK1电流密度为-4.62±0.24pA/pV。3.使用miR-1激动剂agomiR-1200nM转染心肌细胞以模拟心肌缺血状态,在-100mV时,IK1电流密度为-0.05±0.06pA/pV,与正常对照组相比明显减小,差异具有显著性(n=6,p0.05)。6.使用miR-1激动剂agomir miR-1200nM转染心肌细胞48小时后再使用DMSO干预组,在-100mV时,IK1电流密度为-0.16±

关键词：可溶性环氧化物水解酶抑制剂微小RNA 内向整流型钾电流磷脂酰肌醇激酶蛋白激酶B 糖原合成酶激酶-3β

猪繁殖与呼吸综合征病毒感染Marc-145细胞的膜泡运输机制的研究

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猪繁殖与呼吸综合征病毒感染Marc-145细胞的膜泡运输机制的研究

作者：董顺利华中农业大学

学位级别：硕士

PRRSV是正链带囊膜的RNA病毒,PRRSV感染先与易感细胞表面硫酸乙酞肝素结合发生吸附,随后与唾液酸粘附素的结合引发网格蛋白介导内化进入细胞形成内体小泡。内化进入细胞后PRRSV需要解聚将其基因组释放并进入细胞浆才能产生感染性病毒粒... 详细信息

PRRSV是正链带囊膜的RNA病毒,PRRSV感染先与易感细胞表面硫酸乙酞肝素结合发生吸附,随后与唾液酸粘附素的结合引发网格蛋白介导内化进入细胞形成内体小泡。内化进入细胞后PRRSV需要解聚将其基因组释放并进入细胞浆才能产生感染性病毒粒子。在此过程中除了清道夫受体CD163和pH的降低等因素外,一些蛋白酶活性的分子也是PRRSV感染侵入所必须的。然而相对于PRRSV的吸附内吞过程,PRRSV借助何种膜泡运输机制最终突破囊膜屏障释放其基因组进入细胞浆还一无所知。目前大多数病毒,包括PRRSV,在感染宿主细胞的过程中是通过特异性的吸附在细胞表面而被细胞以“主动胞饮”的方式内吞,然后进入细胞内主要分选站早期内含体,之后走向经典的内吞—溶酶体途径,或循环内含体膜泡转运途径。然而许多病毒在进入内吞—溶酶体死亡途径前在内膜系统中pH、离子浓度等因素作用下引发病毒穿刺进入细胞浆产生感染性病毒粒子。Rab蛋白是介导细胞内膜泡运输的具有GTP酶活性的开关分子,同时也是作为各内含体膜泡的标志性蛋白,已广泛用于定位细胞内各种内含体膜泡的研究,如Rab5定位早期内含体、Rab7定位晚期内含体、Rab11定位近核循环内含体。因此我们以Rab蛋白与PRRSV的共定位实验结合Rab蛋白负调控突变体对PRRSV感染的抑制试验确定PRRSV内吞后膜泡运输途径,DsRED-Rab5/7/11与PRRSV的共定位实验结果显示PRRSV能与Rab5/7共定位,另外Rab5/7蛋白负调控突变体实验也显示Rab5/7负调控突变体能明显抑制PRRSV感染,抑制效果分别为70%、30%-80%,因此PRRSV感染依赖于早期内含体和晚期内含体的膜泡运输,而近核循环内含体膜泡运输与PRRSV感染无关。另外与囊泡运输相关的PI3K途径(磷脂酰肌醇激酶途径),通过与Rab5互作共同调节早期内含体的膜泡运输与融合,为了更好的解析PRRSV感染过程中的早期内含体膜泡运输过程,我们以PI3K的抑制剂LY294002干扰细胞早期内含体膜泡运输过程来确定其在PRRSV感染中的作用,结果表明LY294002对PRRSV在Marc-145中的感染无明显抑制作用,因此PRRSV的感染可能通过不依赖于PI3K的非经典早期内含体膜泡运输途径介导。PKC是另一与囊泡运输相关的信号分子,与Rab11共同调节近核循环内含体的运输。同样为了更好的解析PRRSV感染与近核循环内含体膜泡运输的关系,我们以PKC的抑制剂bisindolylmaleimide (BIM) I干扰细胞近核循环内含体膜泡运输过程来确定其在PRRSV感染中的作用,结果表明PRRSV在Marc-145中的感染与BIM-I无关,与之前Rab11介导的循环内含体膜泡运输与PRRSV感染无关相吻合。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒膜泡运输内含体磷脂酰肌醇激酶蛋白激酶C

1、人宫颈癌基因（HCCR）促进胃癌发生相关机制的初步探讨 2、根除幽门螺杆菌对胃食管反流病相关症状的影响-Meta分析

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1、人宫颈癌基因（HCCR）促进胃癌发生相关机制的初步探讨 2、根...

作者：杨杨南京医科大学

学位级别：硕士

目的观察HCCR2基因稳转永生化人胃粘膜上皮细胞GES-1后其细胞的生物学变化;研究在永生化人胃粘膜上皮细胞GES-1和人胃癌细胞SGC-7901中,表皮生长因子EGF经PI3K/Akt和MAPK信号转导通路诱导HCCR表达上调的分子机制。方法1、用脂质体法分别... 详细信息

目的观察HCCR2基因稳转永生化人胃粘膜上皮细胞GES-1后其细胞的生物学变化;研究在永生化人胃粘膜上皮细胞GES-1和人胃癌细胞SGC-7901中,表皮生长因子EGF经PI3K/Akt和MAPK信号转导通路诱导HCCR表达上调的分子机制。方法1、用脂质体法分别将HCCR2-pcDNA3.1及空载体质粒pcDNA3.1转染永生化人胃粘膜上皮细胞GES-1,G418筛选,克隆环挑取细胞克隆,Western blot技术筛选阳性克隆,并检测转染细胞中HCCR蛋白水平,流式细胞仪检测转染细胞的细胞周期,MTT法检测转染细胞的增殖能力。2、永生化人胃粘膜上皮细胞GES-1和人胃癌细胞SGC-7901分别以不同浓度EGF(0、25、50、100ng/ml)培养24h;EGF(100ng/ml浓度)培养不同时间(0、8、16、24h);用EGFR抑制剂PD153035分别处理GES-1、SGC-7901细胞1h后,再加入诱导剂EGF(100ng/ml浓度)诱导24h,用Western blot法检测细胞中HCCR蛋白的表达变化。3、用PI3K抑制剂LY294002分别处理GES-1、SGC-7901细胞1h后,再加入诱导剂EGF(100ng/ml浓度)诱导,用Western blot法检测细胞中HCCR蛋白的表达变化;用脂质体法分别将活性型Akt(CA-Akt-pcDNA3.1)、缺陷型Akt(DN-Akt-pcDNA3.1)及空载体质粒转染GES-1和SGC-7901细胞,G418筛选,克隆环挑取细胞克隆,Western blot技术筛选阳性克隆,并检测转染细胞中Akt和HCCR蛋白水平,流式细胞仪检测转染细胞的细胞周期,MTT法检测转染细胞的增殖能力。4、用MEK1抑制剂PD98059分别处理GES-1、SGC-7901细胞1h后,再加入诱导剂EGF(100ng/ml浓度)诱导,用Western blot法检测细胞中HCCR蛋白的表达变化。结果1、HCCR的过表达促进永生化人胃粘膜上皮细胞GES-1的增殖HCCR2基因转染细胞GES-1后,流式细胞法检测转染HCCR2组细胞细胞周期中S期较对照组(转染空载体质粒)延长,MTT法检测转染组细胞增值能力较对照组增强。2、EGF诱导GES-1和SGC-7901中的HCCR的表达GES-1细胞在无血清培养条件下,HCCR表达量很低,用EGF(50ng/ml)刺激24h后HCCR蛋白的表达升高,且随剂量的增加而增加,用EGF(100ng/ml)刺激24h后HCCR的表达量明显增加,提示EGF诱导GES-1细胞中HCCR的表达具有剂量和时间依赖性。用EGF刺激SGC-7901细胞后得到类似的结果。用EGFR抑制剂PD153035分别处理GES-1、SGC-7901细胞1h后,再加入诱导剂EGF诱导24h,HCCR的表达水平明显降低。3、EGF经PI3K/Akt信号通路诱导HCCR的表达用PI3K抑制剂LY294002分别处理GES-1、SGC-7901细胞1h后,再加入诱导剂EGF诱导24h,HCCR的表达水平明显降低;活性型Akt(CA-Akt-pcDNA3.1)基因转染GES-1细胞后,细胞中HCCR的表达上调,流式细胞法和MTT法检测转染组细胞增值能力较对照组增强。缺陷型Akt(DN-Akt-pcDNA3.1)基因转染SGC-7901细胞后,细胞中HCCR的表达下降,流式细胞法和MTT法检测转染组细胞增值能力较对照组减弱。4、EGF经MAPK信号通路诱导HCCR的表达用MEK1抑制剂PD98059分别处理GES-1、SGC-7901细胞1h后,再加入诱导剂EGF诱导24h,HCCR的表达水平明显降低。结论1、HCCR过表达能促进永生化人胃粘膜上皮细胞GES-1的增殖。2、EGF能诱导永生化人胃粘膜上皮细胞GES-1和人胃癌细胞SGC-7901中HCCR表达增加,并具有时间、剂量依赖性。3、EGF通过PI3K/Akt信号转导通路诱导HCCR的表达。4、EGF通过MAPK信号转导通路诱导HCCR的表达。目的评价根除幽门螺杆菌(Hp)治疗对胃食管反流病相关症状的影响。方法在Pubmed,Embase数据库中检索2008年3月以前研究根除Hp与胃食管反流病关系的病例对照临床研究,对这些文献进行资料质量评价,并对符合的文献进行Meta-分析。结果1、14篇文献(包括4662例患者)符合入选标准。2、Hp根除对GERD患者烧心症状的影响

关键词： GES-1 胃癌 HCCR 表皮生长因子磷脂酰肌醇激酶蛋白激酶B MAPK 幽门螺杆菌胃食管反流病根除病例对照研究 Meta-分析