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磁珠分选法与密度梯度离心法分离精子对辅助生殖结局的影响

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中华医学杂志 2018年第40期98卷 3263-3267页

作者：方力叶英辉李恩书冯国芳浙江大学医学院附属妇产科医院生殖内分泌科杭州310000

目的比较新型磁珠分选法（MACS-DGC）与传统的密度梯度离心法（DGC）分离精子对辅助生殖（ART）结局的影响。方法回顾分析2014年1至12月在浙江大学医学院附属妇产科医院生殖中心进行精子DNA碎片率（DFI）检测并进入体外受精-胚胎移植（I... 详细信息

目的比较新型磁珠分选法（MACS-DGC）与传统的密度梯度离心法（DGC）分离精子对辅助生殖（ART）结局的影响。方法回顾分析2014年1至12月在浙江大学医学院附属妇产科医院生殖中心进行精子DNA碎片率（DFI）检测并进入体外受精-胚胎移植（IVF-ET）周期的病例。根据DFI将病例分为3组：DFI异常（DFI≥120）且使用新型精子磁珠分选法（A组）；DFI异常（DFI≥120）且使用传统精子密度梯度离心法（B组）；DFI正常（DFI〈20）且使用传统精子密度梯度离心法（C组）。根据受精方式的不同，将常规体外受精（IVF）标记为1组，卵细胞质内单精子显微注射（ICSD标记为2组。对各组的正常受精率、优胚率、临床妊娠率，胚胎种植率、抱婴率等临床结果进行统计分析。结果在IVF三组中（A1、B1、C1）正常受精（2PN）率、优胚率、临床妊娠率，胚胎种植率、抱婴率差异均无统计学意义（均P〉0．05）。在高DFI的ICSI患者（A2、B2）中，A2组对比B2组发现优胚率（87．8％比46．3％，P〈0．001）、临床妊娠率（66．7％比29．2％，P=0．031）、胚胎种植率（50．0％比19．5％，P=0．010）、抱婴率（66．7％比25．0％，P=0．016）差异均有统计学意义。结论新型精子磁珠分选法对比传统梯度分离法对于IVF的临床结果差异无统计学意义，但在ICSI受精周期中临床结局得到了显著改善。

关键词：精子 DNA碎片磁珠分选体外受精

基于磁珠分选及多肽自组装介导的SARS-CoV-2抗体荧光定量检测方法的建立及验证

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中国生物制品学杂志 2023年

作者：金育何春艳罗忠瑞张玉芳马云飞刘野中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所

目的建立基于磁珠分选及多肽自组装介导的严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)抗体荧光定量检测方法，并进行验证。方法通过点击化学反应将磁珠和SARS-CoV-2核衣壳(nucleocapsi... 详细信息

目的建立基于磁珠分选及多肽自组装介导的严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)抗体荧光定量检测方法，并进行验证。方法通过点击化学反应将磁珠和SARS-CoV-2核衣壳(nucleocapsid,N)蛋白特异性结合，采用Western blot和BCA法检测其结合效果。用N蛋白标记的磁珠作为包被抗原，碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)标记的驴抗人IgG作为酶标抗体，结合可组装的多肽及硫磺素-T(thioflavine-T,ThT)发光系统，建立SARS-CoV-2抗体定量检测方法，并验证其特异性、线性范围、最低检测限(limit of detection,LOD)、精密性和耐用性。采用建立的方法和市售ELISA试剂盒分别检测8份已知背景的血清样本，并计算二者的一致性。结果大部分SARS-CoV-2 N蛋白均已稳定结合至磁珠上。建立的方法可特异性检测阳性血清样本；SARS-CoV-2抗体IgG标准品浓度在2.5～80 ng/mL范围内，与荧光值呈良好的线性关系，线性方程为y=182.11 x+5 095.5,R2=0.99;LOD为2.5 ng/mL；批内变异系数(coefficient of variation,CV)在3.9%～10.6%之间，批间CV在6.0%～13.8%之间；耐用性CV在1.3%～6.2%之间。建立的方法与市售ELISA试剂盒定量检测结果具有较高的一致性(R2=0.99,P 磁珠分选及多肽自组装介导的荧光定量检测方法具有良好的特异性、精密性和耐用性，可用于SARS-CoV-2抗体水平的定量检测。

关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒2 抗体磁珠分选多肽自组装

一种手动解离、免疫磁珠分选加TIC培养液改良的小鼠原代海马小胶质细胞培养法

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生理学报 2019年第6期71卷 883-893页

作者：许雅南周利君揭英桃麦春林张珺林震嘉谈智中山大学中山医学院生理教研室及中山大学疼痛研究中心

本文旨在研究手动解离、免疫磁珠分选加TIC培养液改良原代小胶质细胞的培养方法,获得高活性、高纯度且与在体状态更接近的小鼠海马原代小胶质细胞,以用于小胶质细胞的相关研究。选取2~4周龄SPF级C57BL/6J小鼠,PBS灌注后取海马组织剪碎,... 详细信息

本文旨在研究手动解离、免疫磁珠分选加TIC培养液改良原代小胶质细胞的培养方法,获得高活性、高纯度且与在体状态更接近的小鼠海马原代小胶质细胞,以用于小胶质细胞的相关研究。选取2~4周龄SPF级C57BL/6J小鼠,PBS灌注后取海马组织剪碎,使用成年鼠脑组织解离试剂盒手动解离海马组织,获得单细胞悬液,再经去碎片试剂去除髓鞘等组织碎片。在4℃孵育CD11b免疫磁珠15 min后,细胞悬液经免疫磁珠细胞分选(magnetic activated cell sorting, MACS)两次过柱提高小胶质细胞纯度。将分选后细胞离心重悬,种在多聚赖氨酸包被后的24孔培养板中,用完全培养基或TIC培养液(以TGF-β、IL-34和胆固醇为主要营养成分的无血清培养基)培养4 d后进行其他检测。结果显示:(1)使用成年鼠脑组织解离试剂盒手动解离可得到含有(56.03±2.10)%活细胞的单细胞悬液;(2)与免疫抗体包被筛选法(immunopanning)相比,经过MACS两步分选后,可得到更多且纯度高达(86.20±0.68)%的小胶质细胞;(3)使用TIC培养液培养4 d后,可获得分枝状、形态类似静息状态的原代小胶质细胞;(4) q RT-PCR检测显示,与完全培养基培养相比,TIC培养液培养的小胶质细胞在4 d和7 d后TNF-α、IL-1β及CCL2 m RNA表达水平更接近急性分离后的小胶质细胞。上述结果提示,采用手动解离海马组织,经MACS两步分选及TIC培养后,可以获得高纯度、高活性且接近在体静息状态的小胶质细胞。

关键词：小胶质细胞海马磁珠分选原代培养细胞因子

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小鼠精原细胞分选方法改良的研究

中华男科学杂志 2019年第11期25卷 963-970页

作者：李堃刘悦黄鹏杨智昉胡茜张颖李志宏吕叶辉梁乐上海健康医学院基础医学院上海201318 上海交通大学医学院人体解剖与组织胚胎学教研室上海200025 上海健康医学院临床医学院上海201318

目的:通过特异抗体结合的磁珠分选,改进小鼠未分化和分化中两类精原细胞分选方法。方法:利用Thy1和c-Kit两个特异抗体结合的磁珠分选技术,分别将出生后7 d雄性小鼠睾丸中的Thy1^+细胞和c-Kit^+细胞分别做为未分化和分化中的精原细胞分... 详细信息

目的:通过特异抗体结合的磁珠分选,改进小鼠未分化和分化中两类精原细胞分选方法。方法:利用Thy1和c-Kit两个特异抗体结合的磁珠分选技术,分别将出生后7 d雄性小鼠睾丸中的Thy1^+细胞和c-Kit^+细胞分别做为未分化和分化中的精原细胞分选出来,利用免疫荧光技术和流式细胞术,检测两种精原细胞的纯度,利用实时荧光定量PCR检测两种精原细胞中Gfrα1、Plzf、c-kit和sohlh2 mRNA的表达差异来鉴定两种精原细胞,并将Thy1^+细胞进行原代细胞培养。结果:Thy1^+细胞和c-Kit^+细胞的分选纯度分别达到(85.6±8.35)%和(89.40±2.77)%(P磁珠分选技术可以有效地将未分化和分化中的精原细胞分选出来,并将未分化的精原细胞进行体外培养。

关键词：精原细胞分化中未分化磁珠分选小鼠

CD138磁珠分选结合间期荧光原位杂交在浆细胞病遗传学诊断中的应用价值

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中国实验血液学杂志 2016年第5期24卷 1437-1442页

作者：梅建刚李翰卿曹红琴邵靓婧翟勇平南京军区南京总医院血液科江苏南京210002

目的:通过CD138磁珠分选(MACS)结合间期荧光原位杂交(I-FISH)技术研究浆细胞病的细胞遗传学特征,阐明MACS-FISH在浆细胞病遗传学诊断中的应用价值,以及探讨我国浆细胞病FISH检测标准化的问题。方法:收集初诊浆细胞病患者232例,其中MM 20... 详细信息

目的:通过CD138磁珠分选(MACS)结合间期荧光原位杂交(I-FISH)技术研究浆细胞病的细胞遗传学特征,阐明MACS-FISH在浆细胞病遗传学诊断中的应用价值,以及探讨我国浆细胞病FISH检测标准化的问题。方法:收集初诊浆细胞病患者232例,其中MM 203例,AL淀粉样变性24例,意义未明单克隆免疫球蛋白血症(MGUS)5例。应用MACS-FISH检测浆细胞病的细胞遗传学异常。比较染色体核型分析、常规间期FISH(C-FISH)与MACS-FISH细胞遗传学异常检出率的差异。按骨髓浆细胞比例分组,比较C-FISH与MACS-FISH的检测敏感性。分析C-FISH、MACS-FISH异常阳性细胞率与浆细胞比例的相关性,以及比较C-FISH和MACS-FISH克隆大小的检出差异。结果:MACS-FISH检出MM、AL淀粉样变性、MGUS的细胞遗传学异常的发生率为分别为85.9%、62.5%和60%。应用染色体核型分析和C-FISH检出MM细胞遗传学异常的发生率分别为20.0%和64.7%,均显著低于MACS-FISH(P<0.001)。MACS-FISH检出14q32异位、del(14q32)、t(11;14)、+17p13和并存2种及≧3种细胞遗传学异常的阳性率均显著高于C-FISH检测结果(P<0.05)。当骨髓浆细胞比例≦5%时,MACS-FISH的阳性检出率显著高于C-FISH(P=0.001),且MACS-FISH在不同浆细胞比例分组的阳性检出率均无统计学差异;而C-FISH在浆细胞比例≦5%时的阳性检出率显著低于其余3组(P=0.013,P=0.001,P<0.001)。C-FISH组各遗传学异常和MACS-FISH组中+1q21、14q32异位的阳性细胞率与浆细胞比例呈显著正相关(P<0.05)。MACSFISH组各种细胞遗传学异常的克隆大小显著大于C-FISH组(P<0.001)。结论:MACS-FISH可以显著提高浆细胞病细胞遗传学异常的检出率,能更好的反映浆细胞病的细胞遗传学异常发生情况及其克隆大小。MACS-FISH可推荐作为国内浆细胞病遗传学诊断的标准方法,用于MM和SMM的危险分层,以及MGUS、AL淀粉样变性的遗传学诊断和研究。

关键词：浆细胞病多发性骨髓瘤系统性轻链型淀粉样变性磁珠分选荧光原位杂交细胞遗传学

磁珠分选半相合基因鼠效应细胞免疫治疗黑色素瘤的研究

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磁珠分选半相合基因鼠效应细胞免疫治疗黑色素瘤的研究

作者：梁文波河北医科大学

学位级别：硕士

目的:本实验以黑色素瘤B16细胞接种于C57BL/6雌鼠背部,建立小鼠黑色素瘤模型。体外应用C57BL/6鼠及半相合基因鼠CB6F1（BABL/C×C57BL/6的杂交子一代,雌性）脾脏来源的树突状细胞负载肿瘤全抗原与半相合效应性淋巴细胞共培养,随后检测... 详细信息

目的:本实验以黑色素瘤B16细胞接种于C57BL/6雌鼠背部,建立小鼠黑色素瘤模型。体外应用C57BL/6鼠及半相合基因鼠CB6F1（BABL/C×C57BL/6的杂交子一代,雌性）脾脏来源的树突状细胞负载肿瘤全抗原与半相合效应性淋巴细胞共培养,随后检测效应细胞体外杀伤黑色素瘤效应。然后经过磁珠分选纯化后富集分泌IFN-γ的半相合效应细胞,将其作用于荷瘤C57BL/6雌鼠体内,检测纯化后的半相合效应细胞对肿瘤微环境中炎性因子IL-2及IFN-γ的影响,观察各组小鼠肿瘤体积变化,生存期,GVHD程度,为肿瘤微环境干扰介导的细胞免疫治疗技术在临床的应用提供新的理论依据和实验数据。方法:1体外培养小鼠黑色素瘤B16细胞,建立C57BL/6小鼠黑色素瘤模型。2 C57BL/6鼠及半相合基因鼠CB6F1来源负载全肿瘤抗原DC的制备:取C57BL/6、CB6F1小鼠骨髓细胞,体外贴壁分选后加入rm GM-CSF、rm IL-4、黑色素瘤B16细胞冻融抗原,TNF-α诱导培养肿瘤抗原致敏的成熟DC（matured DC,m DC）。3磁珠分选效应性T细胞的制备:将CB6F1小鼠脾细胞,经淋巴分离液分离获得淋巴细胞,尼龙毛柱吸附法收集T淋巴细胞。培养T淋巴细胞2天后,加入肿瘤抗原致敏的成熟DC,混合培养3-4天,即可获得肿瘤抗原刺激后的活化效应性T细胞。应用磁珠阳性分选方法富集上述活化半相合基因效应T细胞中分泌IFN-γ的半相合效应细胞。4 CCK-8法检测三组效应性T细胞体外杀伤实验:将（A组）CB6F1来源DC和（B组）C57BL/6来源DC及（C组）二者混合的DC诱导产生的CTL（作为效应细胞,E）分别与小鼠黑色素瘤B16细胞（作为靶细胞,T）按E∶T=50∶1、20∶1和10∶1的比例混合后孵育24 h,加入CCK-8试剂（20μL/孔）,酶标仪检测各孔450 nm波长的A值,并计算效应性T细胞对肿瘤细胞的杀伤率。5实验动物分组及治疗:将荷瘤小鼠C57BL/6完全随机分至3组,每组40只。（A组）荷瘤对照组:每只荷瘤小鼠鼠尾静脉注射0.2ml生理盐水;（B组）环磷酰胺治疗组:每只荷瘤小鼠腹腔注入（100mg/kg）环磷酰胺;（C组）磁珠分选纯化半相合CTL治疗组:每只荷瘤小鼠鼠尾静脉注射0.2ml（1×106个/0.2ml）磁珠分选富集的IFN-γ阳性CB6F1来源效应性T细胞。观察治疗后各组荷瘤鼠肿瘤体积变化及生存期。6分别在细胞治疗后的第1、4、7、10、14天取小鼠的血清,采用ELISA法检测观察治疗后血清中IL-2、IFN-γ含量及其变化,并比较不同治疗方法对荷瘤鼠外周血中两细胞因子产生的影响。7磁珠分选纯化效应细胞治疗后第14天,HE染色观察各组小鼠瘤组织以及肝、脾和小肠组织的形态学变化。结果:1 C57BL/6小鼠经皮下接种5×106 B16黑色素瘤细胞株7天后可见小鼠皮下明显的黑色结节,直径达0.5cm。2小鼠骨髓来源DC细胞培养至第6天,倒置相差显微镜下观察发现大量具有典型毛刺状形态的成熟DC细胞悬浮在上清液中聚集成团,提示DC已经发育成熟,具备提呈抗原能力。3 CCK-8法检测不同来源DC提呈肿瘤抗原激活产生的效应性T细胞体外杀伤效率:效靶比为50:1及20:1条件下A组（CB6F1来源DC）诱导的效应性T细胞对B16细胞杀伤率优于B组（C57BL/6来源DC）及C组（混合DC）,且差异具有统计学意义（P＜0.05）,B组及C组的杀伤率之间无显著差别（P＞0.05）;效靶比10:1条件下A、B、C三组效应T细胞对B16细胞杀伤率比较差异无统计学意义（P＞0.05）。4各组荷瘤小鼠肿瘤体积变化:单纯注射PBS的对照组和环磷酰胺组小鼠肿瘤生长迅速,给予磁珠分选纯化的半相合基因型DC-CTL过继治疗后,小鼠肿瘤生长速度从第7天至第20天较对照组显著下降。5各组小鼠生存期:A组（荷瘤对照组）,B组（环磷化疗组）,C组（细胞治疗组）间生存期比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。6 ELISA法检测治疗后不同时间小鼠外周血中IL-2和IFN-γ的浓度:在磁珠分选效应细胞治疗组中血清IL-2及IFN-γ的含量明显高于荷瘤对照组（P＜0.05）。荷瘤小鼠给予磁珠分选效应细胞治疗后,血清IL-2和IFN-γ含量伴随着时间的变化,出现逐渐升高的趋势,三组外周血中IL-2的浓度均存在显著性差异（P＜0.05）。7 HE染色结果:各组荷瘤小鼠瘤组织内坏死面积,磁珠分选细胞治疗组和环磷化疗组明显大于对照组;观察磁珠分选细胞治疗后小鼠肝、小肠、脾脏组织中未见明显组织损伤形态学变化。结论:1在体外实验中,分别来源于CB6F1及C57BL/6的DC及两种混合DC诱导的半相合基因效应性T细胞对小鼠黑色素瘤B16细胞均能产生杀伤效应,且CB6F1来源的DC诱导的半相合基因效应性T细胞的杀伤率明显高于其他两种诱导方式,另外两种诱导方式之间的杀伤率

关键词：过继细胞免疫治疗半相合基因磁珠分选环磷酰胺恶性黑色素瘤移植物抗宿主反应

人胎盘来源的造血干细胞和间充质干细胞的分离及鉴定

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中国生物制品学杂志 2019年第1期32卷 95-99,105页

作者：李欣赵中利罗晓彤李珈莹曹阳于永生吉林省农业科学院畜牧科学分院吉林公主岭136100 吉林省银丰生物工程技术有限公司吉林长春130012

目的建立人胎盘来源的造血干细胞(placenta hematopoietic stem cells,hP-HSCs)和间充质干细胞(placentaderived mesenchymal stem cells,hP-MSCs)的分离方法,并进行鉴定和组分分析。方法选取10份新生健康婴儿胎盘组织,采用机械破碎法... 详细信息

目的建立人胎盘来源的造血干细胞(placenta hematopoietic stem cells,hP-HSCs)和间充质干细胞(placentaderived mesenchymal stem cells,hP-MSCs)的分离方法,并进行鉴定和组分分析。方法选取10份新生健康婴儿胎盘组织,采用机械破碎法联合磁珠分选法分离h P-HSCs,胎盘绒毛膜组织块贴壁法分离hP-MSCs,利用形态学观察、集落培养、流式细胞术等进行鉴定。结果 hP-HSCs:分离后有核细胞数(total nucleated cell number,TNC)为(11. 82±2. 46)×10~8个,TNC回收率≥80%;细胞活性为(99. 7±0. 3)%;细胞表面抗体CD34^+CD45dim表达率为(8. 69±0. 36)%,CD34^+总数为(108. 0±6. 48)×10~6个;集落形成总数为(1. 88±1. 07)×10~6。hP-MSCs:冻存细胞总数为(40. 78±9. 35)×10~7个;细胞活性为(99. 0±1. 5)%;细胞表面抗体CD34^+CD45^+表达率为(0. 1±0. 1)%,CD44^+CD105^+为(99. 6±0. 2)%,CD14^+CD19^+为(0. 1±0. 1)%,CD90^+CD73+为(98. 9±0. 2)%;且具有良好成脂、成骨分化潜能。结论成功建立了hP-HSCs和hP-MSCs体外分离培养方法,为胎盘的临床应用奠定了基础,并提供了细胞种子资源。

关键词：胎盘造血干细胞间充质干细胞组织块法磁珠分选

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干细胞表面标志物在牙髓干细胞中的表达

上海口腔医学 2015年第3期24卷 257-262页

作者：高丽江文欣牛晨光何智妍朱彩莲黄正蔚上海交通大学医学院附属第九人民医院·口腔医学院牙体牙髓病科上海市口腔医学重点实验室上海200011

目的:探讨磁珠分选后培养的人牙髓干细胞的表面标记抗原随培养代数增加的变化情况。方法:改良组织块法培养的人牙髓细胞,至第2代(P2)时,用磁珠方法分选出STRO-1阳性细胞,用流式细胞术分别检测P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8代的干细胞表面... 详细信息

目的:探讨磁珠分选后培养的人牙髓干细胞的表面标记抗原随培养代数增加的变化情况。方法:改良组织块法培养的人牙髓细胞,至第2代(P2)时,用磁珠方法分选出STRO-1阳性细胞,用流式细胞术分别检测P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8代的干细胞表面标志物CD73、CD90、CD105、CD166、STRO-1。取P3代细胞,分别进行成骨诱导和成脂诱导。21 d后,分别行茜素红染色和油红O染色,观察矿化物形成情况和脂滴形成情况,同时以未诱导细胞为对照。结果:STRO-1在牙髓干细胞表面随代数增加而下降,CD73、CD90、CD105、CD166的表达比较稳定,茜素红染色可见矿化结节形成,油红O染色显示形成大量脂滴。结论:STRO-1在牙髓干细胞表面随代数增加而下降,其他干细胞标志物比较稳定。

关键词：牙髓干细胞磁珠分选间充质干细胞表面标志物

关节软骨细胞与CD105阳性滑膜间充质干细胞共培养并促进其成软骨分化

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华中科技大学学报（医学版） 2020年第4期49卷 408-413页

作者：张松王鹏程胡海清武汉大学附属同仁医院(武汉市第三医院)骨科武汉430060 武汉大学中南医院急救中心武汉430071

目的使用Transwell小室将大鼠关节软骨细胞(ACC)和CD105阳性滑膜间充质干细胞(CD105+SMSC)进行间接共培养,研究共培养体系下CD105+SMSC成软骨分化的能力和伴随的炎症反应情况。方法在体外分离培养大鼠SMSC,通过形态学观察和成骨、成脂... 详细信息

目的使用Transwell小室将大鼠关节软骨细胞(ACC)和CD105阳性滑膜间充质干细胞(CD105+SMSC)进行间接共培养,研究共培养体系下CD105+SMSC成软骨分化的能力和伴随的炎症反应情况。方法在体外分离培养大鼠SMSC,通过形态学观察和成骨、成脂、成软骨三系分化鉴定。使用磁珠分选方法(MACS)筛选出表面标记为CD105阳性的细胞,并用免疫荧光和流式细胞学方法鉴定。体外分离培养大鼠ACC,用形态学观察及甲苯胺蓝染色鉴定。ACC按一定比例(4∶1,2∶1,1∶1,1∶2,1∶4)与CD105+SMSC在Transwell小室中间接共培养,另设单独培养的CD105+SMSC作阴性对照,CD105+SMSC+成软骨诱导培养液(chondrogenic culture medium,CCM)作阳性对照。在培养的第14天提取各组CD105+SMSC总RNA,使用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测二型胶原(Col2A1),蛋白聚糖(aggrecan)、性别决定区Y框蛋白9(SOX-9)、转化生长因子-β3(TGF-β3)等相应的成软骨指标表达,检测聚蛋白多糖酶-5(ADAMTS-5)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、Runt相关转录因子-2(RUNX-2)等炎症指标的表达。结果分离培养后的SMSC可进行成骨、成脂、成软骨三系分化。MACS分选后可见免疫荧光和流式细胞学鉴定均提示CD105阳性。与软骨细胞间接共培养14 d后,Real-time PCR检测结果示,与阴性对照组相比,2∶1和1∶1实验组的各成软骨指标较阴性对照组上升,ADAMTS-5和RUNX-2炎症指标无明显改变,MMP-3和MMP-13指标显著下降。结论与ACC间接共培养可以促进CD105+SMSC向成软骨方向分化,并能够在一定程度上降低其分化过程中的炎症反应。

关键词：滑膜间充质干细胞磁珠分选成软骨分化间接共培养