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阿尔茨海默病中Aβ1-42磁微粒化学发光免疫检测方法的建立和应用

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北华大学学报（自然科学版） 2023年第3期24卷 332-337页

作者：毛骞李迎牧晓梅马鸿雁北华大学附属医院吉林吉林132011

目的建立一种定量检测血清中β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)的磁微粒化学发光免疫检测方法.方法制备活化磁性微球,并标记抗Aβ1-42抗体;制备Aβ1-42抗体-吖啶酯发光试剂,建立一步式定量检测Aβ1-42浓度的磁微粒化学发光免疫检测方法,组装成... 详细信息

目的建立一种定量检测血清中β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)的磁微粒化学发光免疫检测方法.方法制备活化磁性微球,并标记抗Aβ1-42抗体;制备Aβ1-42抗体-吖啶酯发光试剂,建立一步式定量检测Aβ1-42浓度的磁微粒化学发光免疫检测方法,组装成试剂盒,并评估其灵敏度、准确度、重复性、特异性、稳定性等,推测血清Aβ1-42正常参考区间.结果该方法对血清Aβ1-42检测灵敏度评估的空白限(LoB)为0.03 pg/mL,检测限(LoD)为0.05 pg/mL,功能灵敏度(FS)为0.11 pg/mL,线性范围0.1~5000 pg/mL,加标回收率为103.78%~106.10%;试剂盒检测的分析内精密度为1.06%~2.70%,分析间精密度为3.61%~5.21%,总不精密度为5.93%~8.60%.在试剂盒特异性方面,与血清中常见蛋白的交叉反应率低于2%;同时,样本中常见的3种干扰物在胆红素、甘油三酯、血红蛋白浓度分别低于40 U/L、2 mmol/L、3 g/L时,检测结果基本不受影响.试剂盒在37℃下可稳定保存7 d以上,说明2~8℃下产品有效期不低于12个月.且100例正常人血清检测所得Aβ1-42正常参考区间>654.2 pg/mL.结论本方法建立的Aβ1-42磁微粒化学发光免疫检测方法具有灵敏度高、准确性强、重复性和特异性高等优点,可为血清中Aβ1-42精准定量检测提供新的技术手段.

关键词：阿尔茨海默病 β淀粉样蛋白1-42 化学发光磁微粒定量检测

胸苷激酶1磁微粒化学发光检测方法的建立和性能评估

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当代医药论丛 2022年第17期20卷 143-148页

作者：刘凤林郭金双柴谦杨阳孙秋艳山东省食品药品审评查验中心山东济南250022 中国科学院福建物质结构研究所结构化学国家重点实验室福建福州350002 山东省菏泽市单县中心医院山东菏泽274399

目的:建立一种定量检测血清中胸苷激酶1(TK1)的磁微粒化学发光检测方法,并对其检测性能进行初步评价。方法:基于双抗体夹心检测方法的实验原理,先活化磁微粒并标记抗TK1单克隆抗体,然后制备TK1检测抗体与吖啶酯发光剂的偶联物,以构建定... 详细信息

目的:建立一种定量检测血清中胸苷激酶1(TK1)的磁微粒化学发光检测方法,并对其检测性能进行初步评价。方法:基于双抗体夹心检测方法的实验原理,先活化磁微粒并标记抗TK1单克隆抗体,然后制备TK1检测抗体与吖啶酯发光剂的偶联物,以构建定量检测样本中TK1浓度的磁微粒化学发光液相检测系统。通过灵敏度、准确度、重复性、特异性、稳定性等试验来评价其检测性能。结果:该方法对血清中TK1的检测灵敏度为:空白限(LoB)0.70 pmol/L;检测限(LoD)1.02 pmol/L、功能灵敏度(FS)1.50 pmol/L;线性范围为1.25~40 pmol/L;加标回收率在99.24%~106.91%之间;分析内精密度为1.02%~2.82%,分析间精密度(变异系数)为3.12%~5.35%,总不精密度(变异系数)为6.30%~8.12%;样本中三种干扰物在胆红素、甘油三酯、血红蛋白浓度不高于30 U mol/L、1.5 mmol/L、2.5 g/L时,检测结果基本不受影响。与血清中常见蛋白的交叉反应率均低于2%;试剂在37℃下可稳定保存7 d以上。结论:本TK1磁微粒化学发光检测方法具有高灵敏度、高准确性、高重复性和强特异性等优点,可为TK1精准定量检测提供新的技术手段和技术基础。

关键词：胸苷激酶1 化学发光磁微粒定量检测

磁微粒酶联免疫吸附法测定玉米中的伏马毒素B1

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食品科学 2014年第8期35卷 208-211页

作者：管笛潘灿平王文武会娟北京市理化分析测试中心北京100089 北京市食品安全分析测试工程技术研究中心北京100089 中国农业大学理学院北京100094

将磁微粒的偶联物替代酶标板作为固定相,用于酶联免疫吸附（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）法检测玉米中的伏马毒素B1（fumonisin B1,FB1）.在直接竞争ELISA反应中,分别引入羊抗兔抗体-磁微粒、蛋白A-磁微粒,并比较二者替... 详细信息

将磁微粒的偶联物替代酶标板作为固定相,用于酶联免疫吸附（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）法检测玉米中的伏马毒素B1（fumonisin B1,FB1）.在直接竞争ELISA反应中,分别引入羊抗兔抗体-磁微粒、蛋白A-磁微粒,并比较二者替代效果.通过对检测方法的优化,使用羊抗兔抗体、蛋白A与磁微粒的偶联物作为固定相的检出限分别为0.024μg/mL和0.030 μg/mL.羊抗兔抗体-磁微粒偶联物替代酶标板后具有更低的检出限,为常规ELISA法检测限的三分之一.玉米样品中FB1回收率范围在76.4％～110.6％之间,相对标准偏差小于11％.研究建立了一种灵敏度高、稳定性好的FB1检测方法.

关键词：磁微粒酶联免疫吸附法伏马毒素玉米蛋白A

IL-6磁微粒化学发光定量检测方法的建立和评价

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中国免疫学杂志 2020年第16期36卷 1988-1993页

作者：刘珂李双法李奎于林程云龙郑州安图生物工程股份有限公司郑州450016

目的:建立并评价基于磁微粒化学发光免疫分析(CLIA)平台的IL-6定量检测方法。方法:以抗人IL-6抗体包被的磁微粒、待检血清及辣根过氧化物酶标记的IL-6抗体组成分析体系,基于CLIA平台,采用双抗体夹心模式,建立IL-6抗原定量检测方法,并对... 详细信息

目的:建立并评价基于磁微粒化学发光免疫分析(CLIA)平台的IL-6定量检测方法。方法:以抗人IL-6抗体包被的磁微粒、待检血清及辣根过氧化物酶标记的IL-6抗体组成分析体系,基于CLIA平台,采用双抗体夹心模式,建立IL-6抗原定量检测方法,并对其进行条件优化和性能评价。结果:该方法的LoB、LoD、FS分别为0.5 pg/ml、2 pg/ml、2.5 pg/ml;分析内、分析间变异及总不精密度分别≤7%、≤10%、≤12%;线性范围为3~1000 pg/ml,最大稀释倍数为8倍;回收率在(100±15)%以内;标本中的血红蛋白、三酰甘油、胆红素浓度分别为200 mg/dl、2000 mg/dl、45 mg/dl时,其检测结果无显著影响;本研究与罗氏同时检测临床标本,其结果的拟合曲线回归方程为:Y=0.955X+9.263,R2=0.9932。结论:本研究建立的IL-6磁微粒化学发光定量检测方法性能良好,具有一定的临床意义,可满足临床检测IL-6水平的需要。

关键词：白细胞介素6 磁微粒化学发光性能评估

磁微粒甲胎蛋白（AFP）化学发光免疫检测系统的研究及临床应用

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磁微粒甲胎蛋白（AFP）化学发光免疫检测系统的研究及临床应用

作者：张泉郑州大学

学位级别：硕士

甲胎蛋白（AFP）是迄今为止发现的原发性肝癌最灵敏、最特异的肿瘤标志物,70-95%的原发性肝癌患者呈现AFP水平升高,血液中甲胎蛋白水平对于肿瘤的早期发现,病情的发展、治疗后的评价、监测复发和转移等方面都具有一定的应用价值。本论... 详细信息

甲胎蛋白（AFP）是迄今为止发现的原发性肝癌最灵敏、最特异的肿瘤标志物,70-95%的原发性肝癌患者呈现AFP水平升高,血液中甲胎蛋白水平对于肿瘤的早期发现,病情的发展、治疗后的评价、监测复发和转移等方面都具有一定的应用价值。本论文主要进行磁微粒甲胎蛋白（AFP）化学发光免疫检测系统的研究与临床研究,在磁微粒包被技术平台和化学发光技术平台上,结合双抗体夹心法的免疫学反应技术优势,开发出诊断试剂盒,用于人血清中甲胎蛋白的检测。研究方法与结果： 1.甲胎蛋白定量检测试剂盒的研发：主要包括生物活性原材料的筛选,磁微粒的包被、酶结合物和校准品生产工艺研究、试剂盒反应体系研究、正常参考值的确定以及稳定性研究。（1）磁微粒包被工艺：本试剂盒固相载体选用羧基磁微粒,包被方法确定为羧基两步;（2）试剂盒反应体系：采用两步法反应模式,第一步：25μl样本+20μl磁微粒+50μl样品稀释液,37℃温育15min,洗涤6次;第二步：加入100μl酶结合物,37℃温育15min,洗涤6次;分别加入底物A、底物B各50μl震荡混匀后,避光5-10min内测定。（3）参考值的确定：检测615例正常人样本,通过百分位数法确定参考值为10.0ng/ml。（4）稳定性研究：对产品进行了加速稳定性和实时稳定性研究。分别于37℃加速破坏条件下放置10天和实际储存条件2-8℃放置14个月后对试剂盒进行检测,产品的各项性能指标仍能够满足产品标准的要求。将产品的效期定为2-8℃储存12个月是安全合理的。2.甲胎蛋白定量检测试剂盒性能评价（1）准确性：用参考物质作为样本进行检测,试剂盒准确性均值在0.900-1.100范围内。（2）最低检测限：最低检出限不大于1.8ng/ml。（3）剂量-反应曲线线性：在1.8-1000ng/ml线性范围内,试剂盒的相关系数r应≥0.9900 （4）精密性：用不同浓度的样本各重复检测10次,其变异系数（CV）应不大于10% （5）批间差：批间变异系数（CV）应不大于15.0% （6）特异性：人血清白蛋白（500ng/ml）、HCG（1000IU/ml）、PRL（500ng/ml）均无交叉反应性。（7）干扰物质：50mg/dl胆红素、81mg/dl血红蛋白、3000mg/dl脂质对本试剂盒无干扰作用。3.甲胎蛋白定量检测试剂盒（磁微粒化学发光法）的临床研究：以已上市同品种试剂盒为对照,通过对原发性肝癌术前及术后监测、肝部良性疾病和其他肿瘤患者血清合计1173例临床检验样本进行对比检测,结果显示,本试剂盒与对照试剂盒相比,阴性符合率为97.85%,阳性符合率为98.32%,总符合率为98.04%,相关系数为0.9971。可以用于临床AFP含量的检测。结论：本研究选择高特异性和高灵敏度的单克隆抗体包被,建立开发出磁微粒化学发光法检测AFP系统,灵敏度、特异性、稳定性等各项主要指标可以达到国内领先水平,跻身国际先进水平行列,且操作简便快速,易实现自动化操作,能够更好地满足国内临床使用需求。

关键词：甲胎蛋白磁微粒化学发光单克隆抗体生产工艺研究临床研究

磁微粒化学发光检测HBsAg试剂盒的研制及其临床应用

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重庆医学 2008年第9期37卷 981-982页

作者：刘海波常虹鲜尽红文钢张孟斌杨黎重庆医药高等专科学校 400030 重庆埃夫朗生物技术有限责任公司 400038 重庆市江北区第三人民医院 400018

目的研制HBsAg磁微粒化学发光酶免疫分析试剂盒。方法以磁微粒为载体采用双抗体夹心法建立HBsAg的定量分析试剂盒，对反应条件进行优化并对试剂盒的各项指标进行评价。结果磁微粒粒径确立为5μm，试剂盒的线性范围为0．5-200ng／mL，相... 详细信息

目的研制HBsAg磁微粒化学发光酶免疫分析试剂盒。方法以磁微粒为载体采用双抗体夹心法建立HBsAg的定量分析试剂盒，对反应条件进行优化并对试剂盒的各项指标进行评价。结果磁微粒粒径确立为5μm，试剂盒的线性范围为0．5-200ng／mL，相关系数r〉0．99灵敏度adr、adw、ay均为0．5ng／mL，准确度高，批内变异系数6．3％，批间变异系数9．7％，热稳定性实验表明试剂在37℃条件下可稳定7d，本试剂盒与板式载体化学发光试剂盒比较其总符率达99．6％。结论试剂盒各项指标达到规定要求，可用于临床血清HBsAg定量检测。

关键词：乙肝表面抗原磁微粒化学发光酶免疫分析

应用量子点及磁微粒技术快速检测阴道毛滴虫抗原

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第三军医大学学报 2009年第8期31卷 740-743页

作者：李蒙蒲晓允李玲余娟春第三军医大学新桥医院检验科重庆400037

目的以阴道毛滴虫(trichomonas vaginalis,Tv)检测为切入点,构建以量子点和磁微粒技术为基础的夹心法快速检测抗原技术,为同步多项抗原检测作准备。方法针对Tv特异性黏附蛋白AP33制备其抗体,以碳二亚胺交联法,分别连接抗体-量子点及抗体... 详细信息

目的以阴道毛滴虫(trichomonas vaginalis,Tv)检测为切入点,构建以量子点和磁微粒技术为基础的夹心法快速检测抗原技术,为同步多项抗原检测作准备。方法针对Tv特异性黏附蛋白AP33制备其抗体,以碳二亚胺交联法,分别连接抗体-量子点及抗体-磁微粒加入待测抗原AP33结合后,在荧光显微镜下观测结果。结果确立了本检测系统的最优条件,对AP33的检测与几种阴道常见病原菌无交叉反应,检测限为0.05μg/ml。结论成功构建了量子点磁微粒检测技术,对Tv抗原检测,特异度为90%,准确率为88%。

关键词：量子点磁微粒阴道毛滴虫抗原检测

胃蛋白酶原I磁微粒化学发光检测方法的建立与应用评价

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胃蛋白酶原I磁微粒化学发光检测方法的建立与应用评价

作者：柳方方华南理工大学

学位级别：硕士

胃蛋白酶原I(PGI)是反应胃粘膜炎症的重要标志物,其水平的监测在胃部功能评估中具有不可或缺的作用。建立一种快速、特异性强和灵敏度高的检测方法对于胃部疾病的防控和治疗具有重要意义。本研究基于磁微粒建立化学发光检测PGI方法。研... 详细信息

胃蛋白酶原I(PGI)是反应胃粘膜炎症的重要标志物,其水平的监测在胃部功能评估中具有不可或缺的作用。建立一种快速、特异性强和灵敏度高的检测方法对于胃部疾病的防控和治疗具有重要意义。本研究基于磁微粒建立化学发光检测PGI方法。研究工作与结果如下:1.抗体原料筛选。首先,通过抗体效价筛选适宜抗体原料,结果其中7株抗体(B1、B2、C2、D1、D2、E1、E2)的效价均可达1×10 mg/mL。其次,进行抗体配对筛选,结果基于化学发光平台通过棋盘滴定法初步筛选出8对信噪比较高的抗体。最后,使用临床样本进行最佳抗体对筛选,结果当E1作为包被抗体、E2作为标记抗体时,检测结果与对照试剂盒相关性最高(R=0.9810)。最终选用该抗体对进行化学发光平台的建立和优化。2.PGI磁微粒化学发光检测方法的建立。磁微粒包被抗体,磁性微粒选择Tosyl磁微粒,其大小分布均匀且包被抗体前后分散性好;抗体包被浓度为200μg/mL时,免疫磁微粒的稳定性最好,水合粒径最小;最佳包被工艺为:包被温度37℃,包被缓冲液的pH=7.5,包被时间20 h,封闭剂为1%的BSA。碱性磷酸酶标记另一抗体,碱性磷酸酶与抗体的比例为5:1,交联剂与抗体的比例为10:1,标记缓冲液pH=7.5时,信噪比最高。缓冲液体系优化,其中磁微粒抗体稀释液为Tris缓冲液,pH=7.5,37℃的热加速稳定性最好,偏倚为-2.98%。碱性磷酸酶抗体稀释液为MES缓冲液,pH=7.5,稳定剂为4%的甘氨酸时,37℃的热加速稳定性最好,偏倚为-5.56%。化学发光反应体系优化,最佳反应参数为:反应模式为一步法双抗夹心,磁微粒抗体稀释比为1:25,碱性磷酸酶抗体稀释比为1:1000,孵育时间为5 min,样本量为20μL。3.PGI磁微粒化学发光检测方法的性能评价。经系统评价,本方法的线性范围为0～200 ng/mL(R=0.9991),灵敏度为0.048 ng/mL,方法线性范围宽,灵敏度高。分析内变异系数分别为3.26%、2.89%,分析间变异系数分别为4.83%、3.39%,变异系数CVs均小于5%,精密度良好。平均回收率为96.81%,准确度较好。在高浓度剂量测试中,发光值的非线性在400 ng/mL时出现,在1600 ng/mL时显著降低,但是这些剂量水平远超出临床动态范围,对临床应用不构成影响。样本中添加胆红素0.22 mg/mL、甘油三酯33 mg/mL、血红蛋白5 mg/mL、总蛋白0.22 mg/mL,对检测PGI无干扰,且与PGII无交叉反应,方法抗干扰能力强、特异性好。试剂盒置于37℃条件下放置1、4和7天稳定性良好,预测在试剂盒2～8℃条件下可以储存12个月,方法稳定性高。4.PGI磁微粒化学发光检测方法的临床应用评价。使用批量临床样本对方法与雅培直接化学发光方法进行相关性分析,结果回归方程为y=1.008x+0.272,相关系数R=0.9981,两者相关性良好。Bland-Altman一致性分析,两者的一致性达到95.84%,两种方法测定结果无差异。对于不同的样本类型,EDTA-K血浆、肝素钠血浆、肝素锂血浆检测结果与血清检测相关性良好,无显著差异,因此本方法临床适用性较强。探索样本保存条件,结果血清样本置于2～8℃条件下保存不可超过7天,置于-20℃与-80℃条件下,可保存21天,冻融次数控制在3次以内均可满足临床测试要求。综上所述,本研究所构建的磁微粒化学发光分析方法可以用于PGI的临床快速检测,为胃功能健康大规模筛查提供有力的工具。

关键词：胃蛋白酶原I 磁微粒化学发光性能评价

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用于免疫分析的磁微粒的制备方法研究

用于免疫分析的磁微粒的制备方法研究

作者：汪紫晶华中科技大学

学位级别：硕士

超顺磁性的磁微粒因具有磁选择性、灵敏度高等优点已广泛用于磁分离酶联免疫技术和磁微粒免疫层析技术等免疫分析领域。目前用于免疫分析的商品化磁微粒大多用合成高分子包裹后再进行表面修饰，磁微粒虽然均一性较好，但表面修饰过程复... 详细信息

超顺磁性的磁微粒因具有磁选择性、灵敏度高等优点已广泛用于磁分离酶联免疫技术和磁微粒免疫层析技术等免疫分析领域。目前用于免疫分析的商品化磁微粒大多用合成高分子包裹后再进行表面修饰，磁微粒虽然均一性较好，但表面修饰过程复杂、活性基团易脱落，且在免疫分析应用中存在非特异吸附偏高、生物相容性较差等问题。本研究用牛血清白蛋白BSA代替合成高分子，直接包裹磁性纳米粒制备用于免疫分析的磁微粒，主要研究内容包括： 1.采用化学交联法制备用于磁分离免疫分析的BSA包裹磁微粒。分别研究EDC和G484两种交联剂制备BSA包裹磁微粒的方法;建立磁分离化学发光免疫分析方法;对该磁微粒在磁分离免疫分析中的性能进行鉴定。 2.采用高温变性法制备用于磁分离免疫分析的BSA包裹磁微粒。比较水浴加热和微波加热两种高温变性法的效果，并用磁分离化学发光免疫分析法鉴定该磁微粒的性能。 3.以柠檬酸修饰的Fe3O4磁性纳米粒为原料，采用高温变性法制备BSA包裹的小粒径磁微粒，并用磁微粒免疫层析技术对其进行性能鉴定。主要研究结果为：①采用EDC化学交联法制备的磁微粒非特异性比较低，能成功得到小鼠IgG检测曲线，可用于磁分离免疫检测分析。②与化学交联法相比，高温变性法制备的磁微粒有更均一的粒径和更好的表面性质。通过TEM和FTIR表征、TG分析及pH和盐浓度对磁微粒分散性影响的比较得出：与水浴加热法相比，微波加热法中BSA包裹效果更好，磁微粒能成功用于IgG磁分离免疫检测分析。③Fe3O4与柠檬酸质量比为1∶2，溶液pH为4.0条件下能得到最优柠檬酸修饰的小粒径纳米粒，用微波加热法得到磁微粒后，偶联IgG，能成功用于磁微粒免疫层析技术。研究首次用微波加热的高温变性法成功得到了能够用于免疫分析的蛋白质包裹磁微粒，为用于免疫分析技术的磁微粒提供了一种简单的制备方法。

关键词：磁微粒蛋白质微波磁分离免疫层析