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微囊藻毒素人工完全抗原制备与鉴定

黑龙江畜牧兽医 2017年第5期 1-4页

作者：高阳林超郭一平王菡潘悦聂红霞任洪林胡盼李岩松周玉柳曾善卢士英吉林大学人兽共患病研究所/人兽共患病教育部重点实验室长春130062 大连众信检测技术有限公司辽宁大连116045

为了研究微囊藻毒素-LR(MC-LR)的免疫学检测方法,试验制备了MC-LR人工完全抗原,采用水溶性碳二亚胺法将微囊藻毒素的羧基与牛血清白蛋白(BSA)的氨基偶联,同时利用琼脂糖凝胶电泳、非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、紫外扫描分析及ELISA等技术... 详细信息

为了研究微囊藻毒素-LR(MC-LR)的免疫学检测方法,试验制备了MC-LR人工完全抗原,采用水溶性碳二亚胺法将微囊藻毒素的羧基与牛血清白蛋白(BSA)的氨基偶联,同时利用琼脂糖凝胶电泳、非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、紫外扫描分析及ELISA等技术对偶联结果进行鉴定与分析。结果表明:微囊藻毒素的羧基与BSA的氨基偶联成功。说明人工完全抗原制备成功,可用于MCLR的免疫学检测。

关键词：微囊藻毒素(MCs) 碳二亚胺法偶联人工完全抗原免疫学检测

动物性食品中残留甲羟孕酮免疫原的合成与表征

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食品科技 2004年第8期29卷 70-73页

作者：胥传来王武康贺铁明江南大学食品学院无锡214036

采用碳二亚胺法和混合酸酐法将MPA与牛血清白蛋白偶联,用紫外分光光度法估测其交联率分别为14和20,从SDS聚丙烯凝胶电泳条带可看出交联成功。经间接酶联免疫测定,进一步证明甲羟孕酮免疫原合成成功。

关键词：甲羟孕酮(MPA) 碳二亚胺法混合酸酐法偶联

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氧氟沙星人工抗原的合成及鉴定

安徽农业科学 2006年第3期34卷 487-488,602页

作者：潘孝成祁克宗朱良强涂建张小飞赵瑞宏安徽农业大学安徽合肥230036 安徽省兽医总站安徽合肥230001 安徽省农业科学院畜牧兽医研究所安徽合肥230031

采用碳二亚胺法制备了氧氟沙星与牛血清白蛋白(BSA)及卵清蛋白(OVA)的结合物,通过FeCl3显色反应,紫外扫描以及动物免疫证明了人工抗原的成功合成。经紫外光谱法测定,每分子牛血清白蛋白连接的氧氟沙星分子数为11.16个;每分子卵清蛋白连... 详细信息

采用碳二亚胺法制备了氧氟沙星与牛血清白蛋白(BSA)及卵清蛋白(OVA)的结合物,通过FeCl3显色反应,紫外扫描以及动物免疫证明了人工抗原的成功合成。经紫外光谱法测定,每分子牛血清白蛋白连接的氧氟沙星分子数为11.16个;每分子卵清蛋白连接的氧氟沙星分子数为5.9个。

关键词：氧氟沙星碳二亚胺法人工抗原

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环丙沙星偶联物的制备及其产物的鉴定

上海水产大学学报 2008年第5期17卷 585-590页

作者：黄宣运胡鲲方伟金怡杨先乐上海海洋大学农业部渔业动植物病原库上海200090

采用碳二亚胺法,制备了环丙沙星-小牛血清蛋白偶联物,评价了pH、环丙沙星和碳二亚胺浓度对偶联结合比率的影响。同时采用红外光谱、紫外光谱、聚丙烯酰胺凝胶电泳和质谱方法对偶联产物的基团、分子量等特征进行分析鉴定。正交试验结果表... 详细信息

采用碳二亚胺法,制备了环丙沙星-小牛血清蛋白偶联物,评价了pH、环丙沙星和碳二亚胺浓度对偶联结合比率的影响。同时采用红外光谱、紫外光谱、聚丙烯酰胺凝胶电泳和质谱方法对偶联产物的基团、分子量等特征进行分析鉴定。正交试验结果表明,pH对环丙沙星-小牛血清蛋白的偶联结合比率具有显著性差异,碳二亚胺和环丙沙星浓度差异性不显著。在pH5.0,碳二亚胺和环丙沙星浓度分别为60mg/mL和5mg/mL的条件下,环丙沙星-小牛血清蛋白偶联结合比率为30∶1。该方法条件下的偶联反应成功。结论:该方法可用于环丙沙星-小牛血清蛋白的偶联,且简便易行。

关键词：环丙沙星碳二亚胺法偶联鉴定

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左氧氟沙星人工抗原的合成与鉴定

西北农业学报 2011年第12期20卷 19-21页

作者：张凤凤胡亚南赵建乐李引乾肖佳佳张冠世裴凯祥李林育西北农林科技大学动物医学院陕西杨陵712100

采用碳二亚胺法将左氧氟沙星(LVL)与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备合成抗原BSA-LVL,并用作免疫抗原,经紫外扫描法和聚丙烯酰胺电泳法对其进行鉴定,并测得偶联的结合比。结果表明,通过紫外扫描和聚丙烯酰胺电泳法的测定证明偶联成功,偶联的... 详细信息

采用碳二亚胺法将左氧氟沙星(LVL)与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备合成抗原BSA-LVL,并用作免疫抗原,经紫外扫描法和聚丙烯酰胺电泳法对其进行鉴定,并测得偶联的结合比。结果表明,通过紫外扫描和聚丙烯酰胺电泳法的测定证明偶联成功,偶联的结合比为6∶1。用BSA-LVL免疫BALB/c小鼠,间接ELISA测定多抗上清(pAb)效价,获得高效价的pAb,为进一步制备左氧氟沙星单克隆抗体提供良好的免疫原。

关键词：左氧氟沙星人工抗原碳二亚胺法

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氧氟沙星人工抗原的合成与鉴定

郑州大学学报（医学版） 2007年第6期42卷 1086-1088页

作者：孙武勇屈凌波王云龙刘文英河南出入境检验检疫局郑州450003 河南工业大学郑州450001 河南省生物工程技术研究中心郑州450002 中国药科大学药学院南京210009

目的:合成氧氟沙星人工抗原。方法:采用碳二亚胺法将氧氟沙星与牛血清白蛋白偶联合成完全抗原,采用混合酸酐法将氧氟沙星与卵清蛋白偶联合成应用于ELISA检测的包被抗原。结果与结论:经紫外光谱分析和动物免疫试验证明抗原合成成功。该... 详细信息

目的:合成氧氟沙星人工抗原。方法:采用碳二亚胺法将氧氟沙星与牛血清白蛋白偶联合成完全抗原,采用混合酸酐法将氧氟沙星与卵清蛋白偶联合成应用于ELISA检测的包被抗原。结果与结论:经紫外光谱分析和动物免疫试验证明抗原合成成功。该人工抗原可用于氧氟沙星单克隆抗体的制备及其ELISA检测试剂盒的研制。

关键词：氧氟沙星人工抗原碳二亚胺法混合酸酐法

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氯霉素多克隆抗体的制备及特性分析

暨南大学学报（自然科学与医学版） 2008年第5期29卷 505-509页

作者：凌钦婕向军俭唐勇暨南大学生命科学技术学院抗体工程研究中心广东广州510632

为了建立快速检测氯霉素(CAP)的免疫学方法,采用重氮法、混合酸酐法与碳二亚胺法(EDC)法分别合成氯霉素完全抗原,并通过稳定性比较实验确定采用混合酸酐法合成的氯霉素卵清蛋白(CAP-OVA)免疫Balb/C小鼠,制备抗血清,采用EDC法制备的氯霉... 详细信息

为了建立快速检测氯霉素(CAP)的免疫学方法,采用重氮法、混合酸酐法与碳二亚胺法(EDC)法分别合成氯霉素完全抗原,并通过稳定性比较实验确定采用混合酸酐法合成的氯霉素卵清蛋白(CAP-OVA)免疫Balb/C小鼠,制备抗血清,采用EDC法制备的氯霉素牛血清白蛋白(CAP-BSA)作为检测抗原,用ELISA方法进行鉴定与特性分析.结果显示该多抗与常见抗生素的交叉反应率均小于0.01%,IC50为18.53 ng/mL,灵敏度达到0.53 ng/mL,该抗体可用于氯霉素的快速检测.

关键词：氯霉素重氮法混合酸酐法碳二亚胺法多克隆抗体酶联免疫吸附测定法

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阿莫西林完全抗原的合成与鉴定

郑州大学学报（医学版） 2007年第1期42卷 72-74页

作者：孙武勇刘向辉屈凌波李建军王云龙李斐菲中国药科大学药学院南京210009 郑州大学化学系郑州450052 河南省生物工程技术研究中心郑州450002

目的:制备阿莫西林完全抗原并鉴定。方法:采用碳二亚胺两步法将半抗原阿莫西林与牛血清白蛋白偶联制备免疫原,采用混合酸酐法将阿莫西林与卵清蛋白偶联制备ELISA包被原。采用紫外光谱分析和动物免疫试验鉴定偶联产物。结果与结论:紫外... 详细信息

目的:制备阿莫西林完全抗原并鉴定。方法:采用碳二亚胺两步法将半抗原阿莫西林与牛血清白蛋白偶联制备免疫原,采用混合酸酐法将阿莫西林与卵清蛋白偶联制备ELISA包被原。采用紫外光谱分析和动物免疫试验鉴定偶联产物。结果与结论:紫外光谱分析和动物免疫试验证实阿莫西林抗原合成成功,该抗原可用于阿莫西林ELISA检测试剂盒的研制。

关键词：阿莫西林完全抗原碳二亚胺法氯甲酸异丁酯法

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新型基因及药物微泡载体系统的制备研究

新型基因及药物微泡载体系统的制备研究

作者：王红红重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:利用生物素亲和素系统,将阳离子纳米脂质体连接在脂质微泡表面,制备一种新型基因微泡载体。方法:1、将一定摩尔比的二棕榈酰磷脂酰胆碱（DPPC）与生物素化聚乙二醇二硬脂酰磷脂酰乙醇胺（Bio-PEG-DSPE）置于甘油及PBS混悬液中... 详细信息

目的:利用生物素亲和素系统,将阳离子纳米脂质体连接在脂质微泡表面,制备一种新型基因微泡载体。方法:1、将一定摩尔比的二棕榈酰磷脂酰胆碱（DPPC）与生物素化聚乙二醇二硬脂酰磷脂酰乙醇胺（Bio-PEG-DSPE）置于甘油及PBS混悬液中,并加入微量异硫氰酸荧光素（FITC）,充分混匀后,采用机械振荡法,制备生物素化脂质微泡（Bio-LMB）。同时,用二硬脂酰磷脂酰乙醇胺（DSPE）取代Bio-PEG-DSPE,采用相同方法制备非生物素化脂质微泡（LMB）作为对照。 2、取一定摩尔比的氢化大豆卵磷脂（HSPC）、3β-[N-（N′,N′-二甲基胺乙基）胺基甲酰基]胆固醇（DC-Chol）、Bio-PEG-DSPE溶于适量氯仿,并加入微量罗丹明6G,充分溶解后,采用薄膜分散-膜挤压法,制备生物素化阳离子纳米脂质体（Bio-CNLP）。同时,取相同比例的HSPC与DC-Chol,采用相同方法制备非生物素化阳离子纳米脂质体（CNLP）作为对照。 3、将Bio-LMB与过量的亲和素4℃孵育30 min,静置后抽吸下层过量亲和素,同时加入过量Bio-CNLP,4℃继续孵育30 min。相同方法连接LMB与CNLP作为对照组。 4、取漂浮在上层的乳液,行激光共聚焦显微镜观察实验组与对照组的连接效果。结果:激光共聚焦显微镜下Bio-LMB + Bio-CNLP组可见绿色Bio-LMB壁因连接Bio-CNLP而不光滑,周围可见数量不等的红色小圆形点状Bio-CNLP呈花环状聚集,而LMB + CNLP组LMB壁光滑,周围未见CNLP聚集。结论:采用生物素亲和素连接系统,可将Bio-CNLP牢固连接于Bio-LMB表面,为探索新型基因微泡载体提供一种新思路,有望为肿瘤靶向基因治疗提供一种新方法。第二部分脂质微泡-PLGA纳米微球复合体制备的实验研究目的:采用碳二亚胺法,将PLGA纳米微球连接在脂质微泡表面,制备一种新型药物微泡载体。方法:1、将一定摩尔比的二棕榈酰磷脂酰胆碱（DPPC）、氨基化聚乙二醇二硬脂酰磷脂酰乙醇胺（NH2-PEG-DSPE）置于甘油及PBS溶液的混悬液中,充分混匀后,采用机械振荡法制备表面带氨基脂质微泡（NH2-LMB）。 2、采用双乳化法制备普通乳酸/羟基乙酸共聚物（PLGA）纳米微球（NP）。 3、取部分NP,采用碳二亚胺法活化其表面的羧基得到活化的PLGA纳米微球（NP-COOR）。 4、分别将过量NP与NP-COOR加入两管等量NH2-LMB中,4℃孵育,12、24、36、48 h后,取上层漂浮的乳液,在光镜下观察连接效果。结果:12、24 h后,在光镜下两管微泡周围都未见纳米微球聚集。36 h后,NP + NH2-LMB组脂质微泡周围未见纳米微球的聚集;NP-COOR + NH2-LMB组部分脂质微泡周围可见少量纳米微球聚集。48 h后,光镜下NP + NH2-LMB组脂质微泡表面光滑,周围未见纳米微球的聚集;NP-COOR + NH2-LMB组脂质微泡表面不光滑,周围布满数量不等的小圆形的纳米微球,呈花环状。结论:采用碳二亚胺法,可将PLGA纳米微球成功连接于脂质微泡表面,为探索一种新型药物微泡载体提供一种新思路,有望为肿瘤靶向药物治疗提供一种新途径。

关键词：脂质微泡阳离子纳米脂质体生物素亲和素系统 PLGA纳米微球碳二亚胺法