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中国药房 2020年第9期31卷 1097-1102页

作者：沈骅睿敖亮王立胜汪国友郝琦李婷西南医科大学附属中医医院关节外科四川泸州646000 西南医科大学药学院四川泸州646000

目的:研究沙苑子多糖促进兔半月板纤维软骨细胞(以下简称"软骨细胞")增殖的作用机制。方法:分离1月龄新西兰大白兔软骨细胞。将软骨细胞分为正常对照组(PBS)、阳性对照组(硫酸氨基葡萄糖,10 mg/mL)和沙苑子多糖高、中、低(40、20、10mg/... 详细信息

目的:研究沙苑子多糖促进兔半月板纤维软骨细胞(以下简称"软骨细胞")增殖的作用机制。方法:分离1月龄新西兰大白兔软骨细胞。将软骨细胞分为正常对照组(PBS)、阳性对照组(硫酸氨基葡萄糖,10 mg/mL)和沙苑子多糖高、中、低(40、20、10mg/mL)剂量组,分组给药干预。采用光学显微镜观察软骨细胞的形态学特征;采用MTT法检测软骨细胞增殖抑制率,并用流式细胞术观察细胞周期;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测软骨细胞中Ⅱ型胶原蛋白(ColⅡ)、碱性磷酸酶蛋白(ALP)的表达水平;采用逆转录-聚合酶链式反应和Western blotting法检测转化生长因子β1(TGF-β1)、骨形态发生蛋白2(BMP-2)mRNA及蛋白的表达水平。结果:软骨细胞培养72 h后,细胞融合成单层,多数呈现细长梭型外观。与正常对照组比较,阳性对照组和沙苑子多糖高、中、低剂量组软骨细胞的增殖抑制率、G1/G0期细胞百分比均显著降低(P蛋白表达水平及TGF-β1、BMP-2 mRNA及蛋白的表达水平均显著升高(P蛋白表达水平及TGF-β1、BMP-2 mRNA及蛋白的表达水平均显著升高(P蛋白及TGF-β1、BMP-2 m RNA和蛋白的相对表达水平均显著降低(P蛋白表达,促进ColⅡ、ALP蛋白表达水平升高有关。

关键词：沙苑子多糖半月板纤维软骨细胞增殖 Ⅱ型胶原蛋白碱性磷酸酶蛋白转化生长因子β1 骨形态发生蛋白2 机制

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补肾活血含药血清对体外高磷刺激下血管平滑肌细胞钙化的抑制作用

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中国中西医结合肾病杂志 2017年第11期18卷 945-949,I0001页

作者：柳诗意张宁孟祥飞刘世巍李兰芳中国中医科学院望京医院肾病内分泌科北京100102 中国中医科学院中药研究所北京100700

目的:观察补肾活血含药血清对体外高磷刺激下A7r5细胞钙化的抑制作用。方法:用Na H2PO4高磷溶液对体外培养的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)进行刺激,建立体外血管钙化模型。制备补肾活血含药血清,分别按含药血清在体外培养基中所占比例5%、... 详细信息

目的:观察补肾活血含药血清对体外高磷刺激下A7r5细胞钙化的抑制作用。方法:用Na H2PO4高磷溶液对体外培养的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)进行刺激,建立体外血管钙化模型。制备补肾活血含药血清,分别按含药血清在体外培养基中所占比例5%、10%、20%设立补肾活血含药血清低、中、高三个剂量组,进行体外干预10 d。实验结束后,光学显微镜下观察细胞形态;茜素红染色法观察细胞钙化情况,分别在实验第2、4、6、8、10天观察细胞层钙含量及ALP活性,实验第3、6、10天观察细胞VSMCs标记蛋白α-SMA蛋白及成骨细胞标记蛋白ALP蛋白表达。结果:(1)与正常组比较,第10天经茜素红特殊染色,高磷模型组出现明显的钙化结节;同时,细胞钙含量及ALP活性均随时间延长不断升高,α-SMA蛋白表达下调,ALP蛋白表达上调。(2)与高磷模型组比较,第10天经茜素红特殊染色,含药血清低剂量组细胞形态改善不明显,中、高剂量组红色颗粒物明显减少,正常形态细胞数目较多;含药血清组细胞钙含量、ALP活性下降,α-SMA蛋白表达上调,ALP蛋白表达下调。结论:补肾活血含药血清能够减轻高磷所诱导的A7r5细胞钙化及细胞层钙沉积、ALP活性的升高,下调ALP蛋白表达,上调α-SMA蛋白表达,抑制VSMCs向成骨样细胞表型转化。

关键词：慢性肾脏病血管钙化血管平滑肌蛋白碱性磷酸酶蛋白

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补肾活血含药血清对体外高磷刺激下血管平滑肌细胞钙化的抑制作用

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中国中西医结合肾病杂志 2018年第3期19卷 222-225,I0004页

作者：柳诗意张宁孟祥飞刘世巍李兰芳中国中医科学院望京医院肾病内分泌科北京100102 中国中医科学院中药研究所北京100700

关键词：慢性肾脏病血管钙化 A7r5 血管平滑肌蛋白碱性磷酸酶蛋白

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补肾活血含药血清对体外高钙刺激下血管平滑肌细胞钙化的抑制作用

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中国中西医结合肾病杂志 2019年第4期20卷 334-337页

作者：柳诗意李德恒张宁孟祥飞刘世巍李兰芳中国中医科学院望京医院肾病内分泌科北京100102 海南西部中心医院内科门诊儋州571700 中国中医科学院中药研究所北京100700

目的:观察补肾活血含药血清对体外高钙刺激下A7r5细胞钙化的抑制作用。方法:用CaCl 2高钙溶液对体外培养的大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)进行刺激,建立体外血管钙化模型。制备补肾活血含药血清,分别按含药血... 详细信息

目的:观察补肾活血含药血清对体外高钙刺激下A7r5细胞钙化的抑制作用。方法:用CaCl 2高钙溶液对体外培养的大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)进行刺激,建立体外血管钙化模型。制备补肾活血含药血清,分别按含药血清在体外培养基中所占比例5%、10%、20%设立补肾活血含药血清低、中、高三个剂量组,进行体外干预10天。实验结束后,光学显微镜下观察细胞形态;茜素红染色法观察细胞钙化情况;分别在实验第2、4、6、8、10天观察细胞层钙含量及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,实验第3、6、10天观察VSMCs标记蛋白α-平滑肌蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)及成骨细胞标记蛋白ALP蛋白表达。结果:(1)与正常组比较,第10天经茜素红特殊染色,高钙模型组出现明显的钙化结节;同时,细胞钙含量及ALP活性均随时间延长不断升高,α-SMA蛋白表达下调,ALP蛋白表达上调。(2)与高钙模型组比较,第10天经茜素红特殊染色,含药血清低剂量组细胞形态改善不明显,中、高剂量组红色颗粒物明显减少,正常形态细胞数目较多;含药血清组细胞钙含量、ALP活性下降,α-SMA蛋白表达上调,ALP蛋白表达下调。结论:补肾活血含药血清能够减轻高钙所诱导的A7r5细胞钙化及细胞层钙沉积、ALP活性的升高,下调ALP蛋白表达,上调α-SMA蛋白表达,抑制VSMCs向成骨样细胞表型转化。

关键词：慢性肾脏病血管钙化 A7r5 血管平滑肌蛋白碱性磷酸酶蛋白

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