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神经上皮干细胞对碘酸钠诱导的视网膜色素上皮细胞及视网膜损伤的治疗作用

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神经上皮干细胞对碘酸钠诱导的视网膜色素上皮细胞及视网膜损伤的...

作者：徐夏童锦州医科大学

学位级别：硕士

目的初步探讨神经上皮干细胞(NESC)对碘酸钠(SI)作用的视网膜色素上皮细胞(RPE)和视网膜损伤大鼠的治疗作用。方法免疫荧光鉴定NESC表达的特异蛋白及观察NESC分化特性。体外实验:将人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)分为正常组、碘酸钠... 详细信息

目的初步探讨神经上皮干细胞(NESC)对碘酸钠(SI)作用的视网膜色素上皮细胞(RPE)和视网膜损伤大鼠的治疗作用。方法免疫荧光鉴定NESC表达的特异蛋白及观察NESC分化特性。体外实验:将人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)分为正常组、碘酸钠模型组(SI组)、NESC条件培养基治疗组(SI+NESC-CM),CCK-8测细胞活力,DCFH-DA染色检查细胞内氧化应激水平,JC-1染色检查细胞线粒体膜电位,Annexin-FITC染色和流式细胞术检查细胞凋亡。体内实验:1,模型建立:将SD大鼠随机分为正常组和模型组,尾静脉注射SI(50mg/kg)。各组于各时间段(注射第3D、7D、14D、21D、28D)行眼部光学相关断层扫描(OCT)记录视网膜形态。2,NESC玻璃体腔注射:于SI(50mg/kg)造模第0天,将SD大鼠随机分为正常组、假手术组(Sham组)和NESC组。Sham组右眼玻璃体腔注射Neurobasal-A,NESC组右眼玻璃体腔注射NESC,左眼对照组不注射。各组于各时间段(注射后3D、7D、14D、21D、28D)行OCT记录视网膜形态;第28天取眼球行HE染色观察视网膜形态。免疫荧光观察NESC视网膜分布情况。结果体外实验:鉴定结果显示:NESC能表达Nestin和Ki-67蛋白以及能分化成类似神经元的结构。CCK-8示,SI+NESC-CM组吸光度高于SI组;DCFH-DA染色结果示SI+NESC-CM组氧化应激水平低于SI;JC-1染色示,SI+NESC-CM组线粒体膜电位高于SI组;Annexin-FITC染色和流式细胞术结果示,SI+NESC-CM组凋亡细胞数和凋亡率低于SI组。Western blotting检测结果示:SI组p-ERK和ERK 比率、p-p38与p38比率、INOS和TNF-α相对表达量均高于正常组,NESC-CM组p-ERK和ERK 比率、p-p38与p38比率、INOS和TNF-α相对表达量低于SI组。体内实验:1,模型建立:SI注射0天显示典型的SD大鼠视网膜结构;第7天首次观察到RPE层和外核层(ONL)中疣状突起病变,之后视网膜损伤程度呈时间依赖性。2,NESC玻璃体腔注射:OCT结果示,在注射28天时,与Sham组和左眼对照组相比,NESC组视网膜损伤程度和视网膜厚度下降程度较轻。HE染色结果示,与Sham组和左眼对照组相比,NESC组ONL和内核层褶皱紊乱较轻、RPE层疣状突起面积较低和外核层细胞数较多。ERG结果示,NESC组与Sham组和左眼对照组未见明显差异。NESC玻璃体腔分布情况示:OCT结果示,NESC注射第7天时,玻璃体中发现可能是NESC的点状高反射混浊,第28天玻璃体腔中的点状高反射混浊消失,而在视网膜内界膜表面发现可能为NESC的点状高反射信号。视网膜切片免疫荧光示:第28天视网膜的内核层中发现被标记的NESC细胞。结论在体外NESC-CM能通过降低ERK1/2和p38过度磷酸化减轻RPE炎症蛋白表达,进而保护处于氧化应激状态下的RPE。在体内,NESC在玻璃体腔中最少存活28天且部分NESC能迁移至大鼠视网膜内,并能延缓SI所致视网膜的结构损伤但对视网膜功能无明显改善。

关键词：神经上皮干细胞碘酸钠 Sprague-Dawley大鼠眼部光学相关断层扫描年龄相关黄斑变性

不同浓度的碘酸钠对C57BL/6J小鼠视网膜结构和功能的影响

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不同浓度的碘酸钠对C57BL/6J小鼠视网膜结构和功能的影响

作者：刘心婷昆明医科大学

学位级别：硕士

[目的]探讨小鼠尾静脉注射不同浓度的碘酸钠后C57BL/6J小鼠视网膜结构和功能的变化,从而选出最适用于AMD造模的碘酸钠浓度。[方法]体内动物实验:选取6-8周的C57BL/6J雄性小鼠,随机分成正常对照组、碘酸钠20mg/kg组,碘酸钠35 mg/kg组... 详细信息

[目的]探讨小鼠尾静脉注射不同浓度的碘酸钠后C57BL/6J小鼠视网膜结构和功能的变化,从而选出最适用于AMD造模的碘酸钠浓度。[方法]体内动物实验:选取6-8周的C57BL/6J雄性小鼠,随机分成正常对照组、碘酸钠20mg/kg组,碘酸钠35 mg/kg组以及碘酸钠50 mg/kg组,每组8只。实验组经鼠尾静脉分别注射碘酸钠20、35、50 mg/kg,正常对照组注射同等剂量的无菌PBS溶液。注射后1周行电生理检测、OCT检测;取出小鼠眼球,制作石蜡切片,并进行HE染色;取眼球组织用Western Blot检测小鼠视网膜Nrf2、HO-1和LC3 Ⅱ/Ⅰ的表达水平。[结果]（1）OCT显示碘酸钠尾静脉注射后的小鼠视网膜RPE层丧失连续光滑的结构、视网膜明显变薄;（2）HE结果显示碘酸钠导致视网膜的各层结构排列紊乱,视网膜色素上皮细胞肿胀、迁移。随着碘酸钠的浓度增加,ONL中细胞密度逐渐减少,黑色类圆形沉积物的数量逐渐增多;（3）ERG显示碘酸钠引起a波和b波的峰时延迟,随着碘酸钠的浓度增加,小鼠视网膜a波和b波振幅逐渐下降;（4）与对照组相比,20mg/kg组小鼠RPE/脉络膜中Nrf2表达水平上升,35mg/kg和50mg/kg浓度的碘酸钠能使的小鼠RPE/脉络膜中的Nrf2和HO-1蛋白表达水平升高,LC3Ⅱ/Ⅰ的比例下降。然而在35mg/kg和50mg/kg组之间,这种蛋白水平的变化无明显差异。[结论]碘酸钠可以引起C57BL/6J小鼠视网膜形态以及功能的损伤。碘酸钠35mg/kg组经鼠尾静脉注射后,可以很好的模拟年龄相关性黄斑变性的视网膜的形态和功能的变化以及Nrf2、HO-1蛋白表达和LC3Ⅱ/Ⅰ 比例的变化,为AMD提供一个较好的小鼠动物模型。

关键词：碘酸钠年龄相关性黄斑病变 Nrf2 HO-1 LC3Ⅱ/Ⅰ

碘酸钠诱发视网膜色素变性大鼠模型的生理指标和组织病理学分析

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实验动物与比较医学 2023年第2期43卷 124-135页

作者：谭莹廖文平高启龙李勇史新辉王京昆云南省药物研究所昆明650011 云南省中药和民族药新药创制企业重点实验室昆明650011 昆明市中医医院昆明650031

目的全面评价碘酸钠腹腔注射对SD大鼠生理指标和视网膜组织病理学特征的影响。方法选取64只SD大鼠随机分为阴性对照组和模型组,每组32只,雌雄各半。模型组以10 mL/kg剂量腹腔注射碘酸钠(6 mg/mL)1次,阴性对照组以10 mL/kg剂量腹腔注射... 详细信息

目的全面评价碘酸钠腹腔注射对SD大鼠生理指标和视网膜组织病理学特征的影响。方法选取64只SD大鼠随机分为阴性对照组和模型组,每组32只,雌雄各半。模型组以10 mL/kg剂量腹腔注射碘酸钠(6 mg/mL)1次,阴性对照组以10 mL/kg剂量腹腔注射生理盐水注射液1次。每天观察大鼠一般体征,注射当天(0天)和注射后第2、6、9、13、16、20、23、27、29、36、43、50、57天称量所有存活大鼠体质量;注射后第3、7、21、28、41、62天随机选取大鼠(第28天为12只/组,其余为4只/组,均为雌雄各半)进行血清生化学指标检测,系统解剖摘取脏器称重,然后对主要脏器和组织进行HE染色,以及眼HE和TUNEL染色;注射后第28、62天进行血常规指标检测。结果注射碘酸钠后,模型组88%的大鼠出现一过性稀便,观察期间大鼠体质量增长稍缓且以雄鼠较明显。注射后第28天模型组雌鼠红细胞容积(red blood cell volume,RDW)和雄鼠尿素氮(urea nitrogen,BUN)、网织红细胞计数(reticulocyte count,Retic#)及百分比(reticulocyte percentage,Retic%)均升高,与阴性对照组比较的差异均有统计学意义(均P0.05)。模型组雄鼠胸腺重量、系数除注射后第7天大于阴性对照组外,其余时间点均小于阴性对照组,但组间差异均没有统计学意义(均P>0.05)。组织病理学检查可见模型组大鼠视网膜由波浪状改变逐步发展为异常心电图样改变,各层排列紊乱,外核层局灶性变薄,视网膜外核层细胞凋亡;病变发生率、病变评分和凋亡细胞数量均明显高于或多于同时期的阴性对照组,第28天的组间差异有统计学意义(均P碘酸钠腹腔注射除可使大鼠视网膜变性外,对血清生化、血常规部分指标也有一定程度的影响,还出现大鼠体质量增长略缓慢和一过性粪便性状改变的现象。因此,在使用该模型开展药物安全性评价时,应关注造模试剂对动物的影响。

关键词：碘酸钠生理指标视网膜组织病理视网膜色素变性模型大鼠

碘酸钠诱发的视网膜色素变性动物模型研究进展

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中华实验眼科杂志 2016年第9期34卷 860-864页

作者：范美花陈永雄厦门大学眼科研究所福建省眼科与视觉科学重点实验室 361102

视网膜色素变性（RP）是一组以视网膜色素上皮（RPE）和感光细胞的功能障碍或丧失为主要特征的致盲眼病，有很大的临床和遗传异质性。碘酸钠是抗代谢药物，可以选择性破坏RPE，它引起的视网膜病变与人类RP疾病的片状RPE缺损极为相似，... 详细信息

视网膜色素变性（RP）是一组以视网膜色素上皮（RPE）和感光细胞的功能障碍或丧失为主要特征的致盲眼病，有很大的临床和遗传异质性。碘酸钠是抗代谢药物，可以选择性破坏RPE，它引起的视网膜病变与人类RP疾病的片状RPE缺损极为相似，因此常被用来制作RP疾病的模型。碘酸钠能诱发多种实验动物的RP模型，人们多使用单次碘酸钠注射的方法建立RP动物模型。由于碘酸钠诱发的RP动物模型的发病年龄和疾病进展均可人为操控，制备简单，病变稳定，周期短，且某些动物的RPE细胞在特殊条件下有再生的潜能，极有利于RP发病机制、药物或干／前体细胞治疗及再生医学方面的研究。目前有关碘酸钠诱发动物RP模型的研究和应用已有不少报道。本文根据国内外文献将碘酸钠诱发的RP动物模型的研究进展作一综述。

关键词：视网膜色素变性碘酸钠动物模型

Naringenin在碘酸钠诱导的视网膜色素上皮细胞变性和激光诱导的脉络膜新生血管鼠模型中的作用(英文)

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国际眼科杂志 2010年第1期10卷 1-4页

作者：沈轶张婉玉 George C Y Chiou 美国德州大学城德州农工大学健康科学中心医学院眼科药理研究所

目的:研究naringenin滴眼对碘酸钠诱导的大鼠视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)变性以及对激光诱导的脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)的作用。方法:10g/Lnaringenin滴眼液预先处理1wk(3次/d),1wk后予35mg/kg碘酸钠舌下静脉注射诱导大鼠RPE变性,在2wk和4wk末,视网膜电图(electroretinogram,ERG)测量C波。另预处理1wk(3次/d),在2wk和4wk末用荧光素血管造影(fluorescein angiography,FA)和荧光显微镜测量CNV面积。结果:碘酸钠注射后2wk,碘酸钠组ERG的C波下降至对照组的53%(P碘酸钠组则无明显变化。4wk后,碘酸钠组下降至对照组的37%(P碘酸钠组下降至对照组的57%(P碘酸钠组比较,naringenin+碘酸钠组控制了66%的C波下降(P碘酸钠诱导的RPE变性,也能减小CNV的形成。

关键词： naringenin 碘酸钠激光视网膜色素上皮细胞年龄相关性黄斑变性

基于Nrf2/ARE信号通路研究四物五子丸对碘酸钠诱导小鼠视网膜氧化损伤的保护作用及机制

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江西中医药 2023年第8期54卷 68-72页

作者：胡凡黄冰林梁凌燕黄琴魏含蕾朱绪映杨萍江西中医药大学南昌330004

目的:观察四物五子丸对碘酸钠(NaIO3)诱导小鼠视网膜氧化损伤的保护作用,并通过Nrf2/ARE信号通路研究四物五子丸防治干性AMD的作用机制。方法:选用6~8周龄的C57BL/6小鼠50只,随机分为空白组,模型组,四物五子丸低、中、高剂量观察组,每... 详细信息

目的:观察四物五子丸对碘酸钠(NaIO3)诱导小鼠视网膜氧化损伤的保护作用,并通过Nrf2/ARE信号通路研究四物五子丸防治干性AMD的作用机制。方法:选用6~8周龄的C57BL/6小鼠50只,随机分为空白组,模型组,四物五子丸低、中、高剂量观察组,每组10只。空白组正常饮食、饮水;模型组予腹腔注射NaIO3溶液(30.00 mg/kg^(-1))进行造模;观察组在腹腔注射NaIO3基础上予四物五子丸浸膏灌胃给药,给药剂量为低剂量组1.95 g/(kg·d)、中剂量组3.90 g/(kg·d)和高剂量组7.80 g/(kg·d)。每日1次,持续1周后,电镜下观察RPE细胞、下沉积物及Bruch膜厚度情况;比色法测定小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力;荧光定量PCR、Western blot检测Nrf2、HO-1、GCL的mRNA转录及蛋白表达。结果:与空白组比较,电镜下观察的模型组RPE细胞空泡化严重、RPE细胞下沉积物和Bruch膜明显增加、增厚;与模型组相比,四物五子丸低、中、高剂量组均能减轻RPE细胞损害、减少沉积物的形成、抑制Bruch膜的增厚。比色法测定模型组小鼠血清中SOD、GSH-Px活性较空白组均有明显降低(P<0.05);四物五子丸低、中、高剂量组SOD、GSH-Px活性较模型组均有不同程度的上调(P<0.05)。荧光定量PCR、Western blot检测模型组小鼠视网膜Nrf2、HO-1、GCLmRNA及蛋白表达较空白组均明显下降(P<0.05);四物五子丸低、中、高剂量组Nrf2、HO-1、GCL的mRNA转录及蛋白表达较模型组均有不同程度的上调(P<0.05)。结论:四物五子丸可有效减轻NaIO3诱导的小鼠视网膜氧化损伤,其作用机制可能与其激活Nrf2/ARE通路有关。

关键词：四物五子丸 Nrf2/ARE信号通路碘酸钠干性AMD

碘酸钠诱导大鼠视网膜损伤的病理改变和SOD、CAT的变化

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中国病理生理杂志 2010年第9期26卷 1851-1854页

作者：朱颖婷邓新国高杨何梅凤李娜中山大学中山眼科中心中山大学眼科学国家重点实验室广东广州510060

目的:探讨不同剂量碘酸钠诱导大鼠视网膜损伤过程中的病理形态改变及抗氧化系统中超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性的改变。方法:SD大鼠80只,随机分为4组(每组20只),即40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg碘酸钠造模组和正常对照组。在... 详细信息

目的:探讨不同剂量碘酸钠诱导大鼠视网膜损伤过程中的病理形态改变及抗氧化系统中超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性的改变。方法:SD大鼠80只,随机分为4组(每组20只),即40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg碘酸钠造模组和正常对照组。在造模后第1、4、7、14d取大鼠右眼进行病理检查;取左眼视网膜,检测SOD和CAT的活性。结果:病理结果显示,与对照组比较,第1d,40mg/kg和50mg/kg碘酸钠造模组视网膜各层未见损伤,60mg/kg碘酸钠造模组出现视网膜色素上皮层损伤、外核层细胞排列紊乱;第4、7、14d,各剂量组均出现明显损伤,且损伤程度比第1d和对照组明显加重,呈现外核层细胞波浪状改变和外核层厚度减少(P碘酸钠造模组视网膜组织SOD、CAT的活性均显著下降(P碘酸钠均可导致大鼠视网膜色素上皮层和外核层细胞损伤,并使大鼠视网膜抗氧化系统受损。碘酸钠用量越大,视网膜细胞损伤出现时间越早、程度越重。

关键词：视网膜色素变性碘酸钠大鼠超氧化物歧化酶过氧化氢酶

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碘酸钠对小鼠视网膜形态和功能变化的影响

国际眼科杂志 2016年第6期16卷 1036-1038页

作者：姜双徐海月锦州医科大学附属第三医院眼科中国辽宁省锦州市121000

目的：探讨碘酸钠鼠尾静脉注射导致的C57BL/6J小鼠视网膜形态和功能的变化。方法：将60只6~8周龄C57BL/6J小鼠分为正常对照组和碘酸钠组。碘酸钠组经鼠尾静脉注射碘酸钠（35mg/kg）,分别于注射后6h,1、3、5、8d进行眼底照相、OCT和电生... 详细信息

目的：探讨碘酸钠鼠尾静脉注射导致的C57BL/6J小鼠视网膜形态和功能的变化。方法：将60只6~8周龄C57BL/6J小鼠分为正常对照组和碘酸钠组。碘酸钠组经鼠尾静脉注射碘酸钠（35mg/kg）,分别于注射后6h,1、3、5、8d进行眼底照相、OCT和电生理检测;正常对照组注射同等剂量的生理盐水。所有小鼠摘除眼球制作石蜡切片进行HE染色。结果：正常对照组小鼠视网膜呈淡红色,视盘呈黄色,视网膜血管呈放射状走行。鼠尾静脉注射碘酸钠后6h即可见到眼底黄白色类似玻璃膜疣样改变,但此时OCT和ERG尚无明显变化。注射后1d,眼底改变加重,类玻璃膜疣的改变逐渐增加,OCT可见RPE层色素紊乱,光感受器和外核层受损。注射后3d,视网膜损伤进一步加重,视网膜出现水肿,注射后5d水肿消失,视神经变白,眼底病灶进一步增多。注射后8d,RPE层、感光细胞层及外核层结构破坏明显,几乎没有正常结构。在此过程中,ERG表现为a波、b波振幅下降,并呈时间依赖性加重。HE染色结果显示,对照组小鼠视网膜各层细胞排列规则整齐,密度均匀。碘酸钠组小鼠外层视网膜呈波浪状改变,RPE层正常结构消失,可见黑色圆形沉积物,随时间延长,黑色沉积物逐渐增多,至注射后第8d时几乎没有正常RPE结构。结论：碘酸钠经鼠尾静脉注射后,可以很好地模拟年龄相关性黄斑变性的发病过程,视网膜出现明显的形态和功能变化,为年龄相关性黄斑变性的研究提供一个较好的动物模型。

关键词：年龄相关性黄斑变性碘酸钠光学相干断层成像

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碘酸钠诱导兔视网膜色素上皮变性模型的研究

眼科新进展 2015年第11期35卷 1032-1035页

作者：王立春刘建宗郭莹北京市乖杨柳医院眼科北京市100022 河北医科大学第二医院眼科河北省石家应市050000 秦皇岛市第一医院眼科河北省秦皇岛市066000

目的通过静脉注射不同剂量的碘酸钠后观察兔视网膜色素上皮形态学及视网膜功能变化,以探索注射碘酸钠的合适剂量。方法选取成年健康无眼病青紫兰兔32只,随机分为对照组5只,实验1组(静脉注射碘酸钠15 mg·kg-1)、实验2组(静脉注射碘酸钠2... 详细信息

目的通过静脉注射不同剂量的碘酸钠后观察兔视网膜色素上皮形态学及视网膜功能变化,以探索注射碘酸钠的合适剂量。方法选取成年健康无眼病青紫兰兔32只,随机分为对照组5只,实验1组(静脉注射碘酸钠15 mg·kg-1)、实验2组(静脉注射碘酸钠25 mg·kg-1)、实验3组(静脉注射碘酸钠35 mg·kg-1)各9只。对照组和实验组分别在耳缘静脉注射碘酸钠后1 d、3 d、7 d、15 d、28 d视网膜电图检查后处取视网膜后极部进行光镜及透射电镜观察。结果实验2、3组诱导了兔视网膜色素上皮变性。实验2组:给药后3 d可见大量的视网膜色素上皮细胞自Bruch膜上脱落,视细胞外节破坏,游离入感光细胞层;给药后7 d可见更严重的感光细胞破坏溶解,但外界膜完整;随时间推移;给药后28 d外核层细胞数明显减少,视网膜成为无视网膜色素上皮或多层视网膜色素上皮相间结构。实验3组:给药后3 d即可见大量的视细胞内外节溶解坏死,外界膜、外核层受损。结论静脉注射适当剂量的碘酸钠生理盐水能够选择性破坏视网膜色素上皮,成功造成视网膜色素上皮变性模型,25 mg·kg-1碘酸钠为合适剂量。

关键词：碘酸钠视网膜色素上皮变性兔