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共封装硒肽和维生素E微胶囊制备及其理化特性

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食品科学 2023年

作者：蔡杰方媛贾继来张碟丛欣程水源大宗粮油精深加工教育部重点实验室(武汉轻工大学)/农产品加工与转化湖北省重点实验室(武汉轻工大学) 恩施德源硒材料工程科技有限公司武汉轻工大学硒科学与工程现代产业学院/国家富硒农产品加工技术研发专业中心/湖北省绿色富硒农产品精深加工技术研发工程中心

硒肽作为典型的小分子活性肽在功能性食品的开发中具有较大的潜力。然而，较低的环境稳定性和生物利用率限制了其在人体小肠环境中的摄取和利用。为了克服这一问题，本研究通过乳化-冷冻干燥联合技术构建了微胶囊体系，以实现对具有不... 详细信息

硒肽作为典型的小分子活性肽在功能性食品的开发中具有较大的潜力。然而，较低的环境稳定性和生物利用率限制了其在人体小肠环境中的摄取和利用。为了克服这一问题，本研究通过乳化-冷冻干燥联合技术构建了微胶囊体系，以实现对具有不同极性的物质(亲水性硒肽和亲脂性VE)的稳态化共封装。以包埋率作为参考，通过单因素试验考察了壁材浓度、硒肽和VE含量工艺参数对包埋效果的影响。傅里叶变换红外光谱和扫描电镜图像表明微胶囊中能够有效封装硒肽和VE，并且具有较好的水分散性，复溶后仍保持双重乳液结构。相比于硒肽粉末，热稳定性分析和ABTS+清除试验结果证实了微胶囊具有更高的热稳定性和抗氧化活性。电子鼻分析结果进一步证实微胶囊体系对硒肽自身异味具有较好的遮掩效果。体外模拟消化实验表明，微胶囊封装提高了硒肽在模拟胃液中的稳定性，并且硒肽在模拟肠液具有更低的保留率，能够被有效释放。相关研究结论将为富硒功能性食品营养补充剂的开发提供理论依据。

关键词：硒肽维生素E 共封装乳液微胶囊

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大米硒肽制备方法和生物活性的研究进展

食品科技 2023年第11期48卷 18-25页

作者：温志刚张远聪刘媛涛周娇娇何志军刘德政程水源蔡杰江西省富硒产品质量监督检验中心/赣州市综合检验检测院江西赣州341000 武汉轻工大学硒科学与工程现代产业学院/国家富硒农产品加工技术研发专业中心湖北武汉430023 湖北硒粮科技集团有限公司湖北恩施445602 大宗粮油精深加工教育部重点实验室(武汉轻工大学)/农产品加工与转化湖北省重点实验室(武汉轻工大学) 湖北武汉430023

硒是人体必需的微量元素之一,具有众多重要的生理功能。以富硒大米为原料制成有生物活性的硒肽,发挥其强抗氧化作用,有极大的增值效果。文章系统总结了肽的制备方法,同时,对大米硒肽的生物活性进行讨论,包括其抗氧化、抗炎、抗肿瘤和抗... 详细信息

硒是人体必需的微量元素之一,具有众多重要的生理功能。以富硒大米为原料制成有生物活性的硒肽,发挥其强抗氧化作用,有极大的增值效果。文章系统总结了肽的制备方法,同时,对大米硒肽的生物活性进行讨论,包括其抗氧化、抗炎、抗肿瘤和抗病毒等方面的研究进展;展望了大米硒肽在食品和药物领域的潜在应用价值,并提出未来的研究方向和挑战。综合国内外相关研究,文章将为硒肽的活性研究提供相应的理论依据,加大推进硒肽在食品开发中的应用。

关键词：硒肽制备方法生物活性应用

碎米荠硒肽的抗氧化活性及对肠道菌群的影响研究

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碎米荠硒肽的抗氧化活性及对肠道菌群的影响研究

作者：贾蕾华中农业大学

学位级别：硕士

碎米荠(Cardamine hirsute)是具有超聚硒特性的新食品原料,有极高的开发潜力和应用价值。目前,为了更好地利用碎米荠的硒资源,国内外学者对碎米荠植株本身及其提取物进行了深度研究,但对碎米荠硒肽的报道却鲜见。硒、肽均呈现优良的抗... 详细信息

碎米荠(Cardamine hirsute)是具有超聚硒特性的新食品原料,有极高的开发潜力和应用价值。目前,为了更好地利用碎米荠的硒资源,国内外学者对碎米荠植株本身及其提取物进行了深度研究,但对碎米荠硒肽的报道却鲜见。硒、肽均呈现优良的抗氧化活性,并且生物活性肽具有高安全性、低毒副作用的特点,以碎米荠为基础开发抗氧化活性硒肽,对碎米荠的应用和硒营养的发展具有重要意义。本文以恩施碎米荠为原料,利用膜分离、液质联用和分子对接技术对碎米荠硒肽(SeCPPs)分离、结构鉴定和虚拟筛选,再利用行为学、组织学等方法和高通量测序技术考察了碎米荠硒肽的体内抗氧化活性及其对肠道菌群的影响。主要研究结果如下:1碎米荠蛋白的提取及抗氧化SeCPPs的制备以蛋白提取率为指标,选取液料比、提取时间、碱液浓度等为关键因素,分别利用碱溶酸沉法和超声辅助碱溶酸沉法提取碎米荠蛋白(SeCP)。碱溶酸沉法的最佳提取条件为:Na OH溶液浓度为0.10 mol/L、液料比45:1(v/w)、提取温度60℃、提取时间3 h、提取2次,该条件下蛋白的提取率为72.91%;超声辅助碱溶酸沉法的最佳提取条件为:振幅35%、超声时间60 min、液料比40:1(v/w)、Na OH溶液浓度0.125 mol/L。此时,碎米荠蛋白的提取率为65.53%。综合对比,选择碱溶酸沉法为SeCP提取的最适方法。此外,SeCP含有丰富的必需氨基酸和疏水性氨基酸,分别约占总氨基酸的40.73%和42.64%。根据水解度、DPPH·和ABTS·清除率,筛选出水解SeCP的实验用酶为碱性蛋白酶,采用单因素实验优化了SeCPPs的最适制备条件为:底物浓度4.0%、酶解时间1 h、加酶量1.0%。再经超滤膜分离出截留分子量为1k Da的级分,此时SeCPPs的硒含量为362.378 mg/kg,DPPH·和ABTS·清除率的EC值分别为0.435和0.399mg/m L,并且其还原力和Fe螯合力呈现出剂量-效应依赖关系。2 SeCPPs的结构鉴定及抗氧化含硒肽段的筛选对SeCPPs进行UPLC-MS/MS分析,并与蛋白质数据库中碎米荠蛋白信息进行比对,共解析出84条含硒肽段,其中以三肽和四肽居多;其中51.76%的肽段含有硒代蛋氨酸(SeMet)、48.24%的肽段含有硒代半胱氨酸(SeCys)。采用分子对接技术进行虚拟筛选,对84条含硒肽段与DPPH·的亲和力进行预测,根据结合能≤-5.00kcal/mol从中选取了RSeMKL、RSeMR、RVSeMI、RASeMT、RSeCK、RSeML和SQSeML七条肽段,再经人工合成并进行活性验证。分子对接可视化和DPPH·清除实验结果显示,RVSeMI的DPPH·清除率最高,EC值为5.65 mmol/L,可通过氢键与DPPH·作用,并且其Val2和SeMet3与DPPH·还存在疏水相互作用。3 SeCPPs在体内的分布及其抗氧化活性评估在D-gal诱导的衰老小鼠模型中,行为学实验、血清、脑和肝脏生理指标、病理组织切片结果表明:(1)硒在小鼠骨头、毛发和血浆中的含量较低(硒浓度(p硒浓度(p肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和T-AOC(p0.05)。4 SeCPPs对小鼠肠道菌群的影响在正常小鼠中,给予SeMet(30μg Se/kg/d.bw)会导致肠道菌群的Shannon和Simpson指数极显著下降(p<0.01)以及β多样性变化,其肠道菌群组成与正常小鼠相比,差异变大,拟杆菌门(Bacterodetes)与厚壁菌门(Firmicutes)比例急

关键词：碎米荠硒肽抗氧化分子对接肠道菌群

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蛋清硒肽的制备、结构鉴定及免疫功能探究

蛋清硒肽的制备、结构鉴定及免疫功能探究

作者：陈梦微江南大学

学位级别：硕士

硒作为人体必需的微量元素,在预防氧化损伤和免疫缺陷方面发挥着重要作用。缺硒会导致机体免疫系统紊乱,增加心血管疾病、癌症等重大疾病的发病率。由于人体自身不能合成硒,需从外界食物中摄取。蛋清硒肽(Selenium-containing Peptides ... 详细信息

硒作为人体必需的微量元素,在预防氧化损伤和免疫缺陷方面发挥着重要作用。缺硒会导致机体免疫系统紊乱,增加心血管疾病、癌症等重大疾病的发病率。由于人体自身不能合成硒,需从外界食物中摄取。蛋清硒肽(Selenium-containing Peptides From Egg White,Se-EWP)作为微量元素与肽的螯合体,在提高硒生物效价的同时也具有生物活性肽的生理功能。目前蛋清蛋白肽主要采用单酶水解工艺获得,但酶解效率不高,导致活性肽的得率不高;此外,蛋源性硒肽的分子结构及免疫调节功能尚未明确。鉴于此,本研究以富硒蛋清蛋白为研究对象,采用热处理结合双酶水解工艺制备Se-EWP,基于蛋白质组学技术对其结构进行鉴定,并探究了Se-EWP的体内免疫调节功能,制定基于Se-EWP的免疫预防策略。论文的主要研究内容如下:采用热处理结合双酶水解工艺制备Se-EWP,以水解度、多肽得率、分子量及抗氧化性为指标,确定最佳工艺条件为:底物浓度5%(w/v),加热温度90℃,加热时间10 min,第一步碱性蛋白酶添加量4000 U/g蛋白质,p H 9.5,55℃下酶解3 h,第二步中性蛋白酶添加量2000 U/g蛋白质,p H 6.5,55℃下酶解3 h。在该条件下水解度为32.00%,多肽得率为76.90%,低聚肽(200 Da～1000 Da)占比达99.22%,DPPH自由基清除率达74.35%,有机硒含量高达9.79μg/g。结果表明,热处理有利于酶解效率的提高,原因可能是加热使得蛋白质由紧密的球状结构变化为松散的链状结构,暴露出更多的活性位点,并且使卵抑制剂变性失活,有利于后续酶解作用。为了明确Se-EWP中免疫活性成分的结构,首先通过高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱仪分析得到Se-EWP中有机硒以硒代氨基酸的形式存在,主要为硒代半胱氨酸(Selenocysteine,Se Cys),少量为硒代蛋氨酸(Selenomethionine,Se Met);基于免疫调节肽存在的大量疏水氨基酸和支链氨基酸的特殊结构特征,结合Progenesis QI和Mass Lynx软件,利用蛋白组学中的质谱差异分析法鉴定出Se-EWP中4个特征硒肽(Se Cys-Trp-Leu-Glu、Trp-Ser-Se Cys、Se Met-Ala-Pro、Se Met-Leu)及19个免疫调节肽的置信序列。为了评价Se-EWP的免疫调节作用,本研究建立雄性BALB/c小鼠的免疫增强模型,通过预防型免疫实验探究经营养干预后的小鼠对免疫抑制作用的抵御效果。结果表明,摄入750 mg/kg/d Se-EWP可有效补充有机硒,减轻环磷酰胺对小鼠免疫器官的负面影响,缓解其对免疫细胞指数和免疫细胞因子水平的削减作用,从而提高机体免疫力。本研究可为动物源硒肽的制备及其构效探究提供理论指导。

关键词：富硒蛋清蛋白硒肽酶解结构鉴定免疫调节

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自组装硒肽在动脉粥样硬化治疗中的应用

自组装硒肽在动脉粥样硬化治疗中的应用

作者： Luo Zhen 河北工业大学

学位级别：硕士

心血管疾病（CVDs）作为全球第一大致死因素,其发病机制与动脉粥样硬化（AS）的发生密切相关。目前,由于AS存在着复杂的病变和演变机制,临床药物很难逆转斑块的发展。抗氧化疗法通过降低斑块处的活性氧（ROS）水平达到削弱氧化应激的目... 详细信息

心血管疾病（CVDs）作为全球第一大致死因素,其发病机制与动脉粥样硬化（AS）的发生密切相关。目前,由于AS存在着复杂的病变和演变机制,临床药物很难逆转斑块的发展。抗氧化疗法通过降低斑块处的活性氧（ROS）水平达到削弱氧化应激的目的,是治疗AS的有效途径。当前纳米技术结合药物递送的策略,具有延长的循环时间、提高的生物利用度,在医学领域展现出了巨大的应用前景。然而,传统的纳米药物载体由于缺乏靶向性,其应用仍受限。因此,开发具有靶向和功能性的纳米药物载体以实现对疾病的精准治疗是目前提高治疗效果的有效手段。在本研究中,设计了一种具有主动靶向和ROS响应性的硒肽自组装载药纳米药物（SeP-Nps）。硒肽纳米载体（SeP）具有疏水的烷基链和亲水头,在水溶液中会依赖亲疏水作用自组装成纳米胶束,其疏水核心能包封脂溶性药物。SeP-Nps利用多肽序列（VHPKQHR）靶向到内皮血管细胞黏附分子（VCAM-1）,将辛伐他汀传递到炎症斑块处,被内皮细胞摄取并积累,实现在病灶处的富集。同时SeP-Nps能清除病变处高水平的ROS,释放他汀,实现对AS的有效治疗。本课题中,首先合成了具有抗氧化活性的含硒多肽SeP;随后对SeP进行了临界胶束浓度（CMC）和抗氧化能力测试,其CMC为5.57μM;并显示出灵敏的HO响应和清除活性氧自由基的性能,在HO存在下,3 h即有80%的Sep被氧化,且HO的清除率能达到100%。进而制备出了基于SeP的SeP-Nps并对其进行了载药性能、药物稳定性和药物释放曲线的测定。其包载率为17%,且在12 h内能稳定存在于PBS中。在100μM HO刺激下SeP断键并在3 h内能释放出80%的辛伐他汀,显示出灵敏的释药能力。其次,在细胞层面探讨了SeP-Nps对炎症内皮细胞的靶向和抗氧化能力。通过激光共聚焦检测发现SeP-Nps能被内皮细胞吞噬;通过流式细胞术验证了SeP-Nps清除ROS的能力和保护ROS介导的细胞凋亡的能力。最后,在活体水平评价了多肽纳米药物对AS的治疗效果。SeP-Nps具有延长的药代动力学性能和良好的主动脉斑块富集能力,其富集量是被动运输纳米药物的3倍,且在对AS模型鼠周期性的治疗中显示出抗AS再狭窄的效果。此外,SeP-Nps在体内外实验中均没有体现出明显的毒副作用,具有良好的生物安全性。综上所述,本课题设计制备的具有主动靶向、同时具有ROS响应性的多肽纳米药物SeP-Nps为AS治疗提供了新的思路。

关键词：硒肽自组装药物递送 ROS响应动脉粥样硬化

硒肽Se-ZnCu-65P增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能并抑制一氧化氮和过氧化氢的分泌

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细胞与分子免疫学杂志 2015年第12期31卷 1633-1636页

作者：王程隋春红闫岗林徐冶潘文干吉林医药学院生物化学与分子生物学教研室吉林吉林132013 吉林大学分子酶学工程教育部重点实验室吉林长春130012

目的研究硒肽Se-Zn Cu-65P对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力与NO和H2O2分泌水平的影响。方法以不同剂量的具有超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)双抗氧化酶活性的硒肽Se-Zn Cu-65P作用于脂多糖(LPS)诱导的小鼠腹腔巨噬细胞,培养2... 详细信息

目的研究硒肽Se-Zn Cu-65P对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力与NO和H2O2分泌水平的影响。方法以不同剂量的具有超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)双抗氧化酶活性的硒肽Se-Zn Cu-65P作用于脂多糖(LPS)诱导的小鼠腹腔巨噬细胞,培养24 h,采用MTT法检测巨噬细胞的相对活力,中性红摄入法检测巨噬细胞的吞噬能力,硝酸还原酶法测定NO分泌水平,钼酸铵比色法测定H2O2分泌水平。结果 Se-Zn Cu-65P单独作用于巨噬细胞时,可增强细胞的相对活力,却不影响细胞的吞噬能力;能降低巨噬细胞分泌H2O2的水平,而不能抑制NO的分泌。而LPS诱导的巨噬细胞吞噬能力增强,同时NO和H2O2的水平也显著上升。当Se-Zn Cu-65P作用于LPS诱导的巨噬细胞时,细胞的吞噬能力进一步增强,细胞NO和H2O2的水平却显著降低。结论 Se-Zn Cu-65P能有效提高LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞的相对活力,增强细胞的吞噬能力,降低NO和H2O2的分泌水平。

关键词：硒肽巨噬细胞吞噬一氧化氮过氧化氢

具有谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活力的含硒四肽(SecRGD)

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高等学校化学学报 2012年第5期33卷 983-987页

作者：邹险峰吕绍武吉林大学分子酶学工程教育部重点实验室长春130012 长春大学农产品深加工吉林省高校重点实验室长春130022

以精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)序列为基础,在N-端引入硒代半胱氨酸(Sec)设计了SecRGD序列模拟谷胱甘肽过氧化物酶(GPx),利用Fmoc固相合成法合成了SecRGD.采用ESI-MS质谱和氢化物原子荧光光谱法对硒肽进行表征,采用酶偶联法进行GPx活力... 详细信息

以精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)序列为基础,在N-端引入硒代半胱氨酸(Sec)设计了SecRGD序列模拟谷胱甘肽过氧化物酶(GPx),利用Fmoc固相合成法合成了SecRGD.采用ESI-MS质谱和氢化物原子荧光光谱法对硒肽进行表征,采用酶偶联法进行GPx活力测定和酶动力学分析,用噻唑蓝(MTT)比色法评价了硒肽的抗氧化效果.结果表明,该硒肽的存在形式为SecRGD的二聚体.该硒肽具有GPx活力,其催化谷胱甘肽(GSH)还原H2O2的GPx活力为5.54 U/μmol,高于经典的GPx模拟物Ebselen.稳态动力学分析结果表明,该硒肽的催化机制为乒乓机制.该硒肽具有分子量小、易溶于水、毒性低及可有效保护Vero细胞免受氧化损伤的优点,具有作为抗氧化药物的应用前景.

关键词：谷胱甘肽过氧化物酶硒肽抗氧化活性

富硒玉米蛋白水解物中硒肽及含硒氨基酸的结构鉴定

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食品科学 2013年第9期34卷 1-4页

作者：王真真张久亮王驰侯焘张岩何慧华中农业大学食品科学技术学院环境食品学教育部重点实验室湖北武汉430070

为了明确硒在玉米蛋白中的赋存形式,采用高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS/MS),结合质谱数据库比对以及高效液相色谱-等离子体质谱法(HPLC-ICP/MS),对富硒玉米蛋白水解物中硒肽及含硒氨基酸的结构进行鉴定。结果确定了5个小肽,其氨基酸... 详细信息

为了明确硒在玉米蛋白中的赋存形式,采用高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS/MS),结合质谱数据库比对以及高效液相色谱-等离子体质谱法(HPLC-ICP/MS),对富硒玉米蛋白水解物中硒肽及含硒氨基酸的结构进行鉴定。结果确定了5个小肽,其氨基酸序列分别为:SeMet-MeSeCys-Glu、Met-MeSeCys-Glu、MeSeCys-Glu-Asp、Ile-MeSeCys-Glu、γ-Glu-MeSeCys;确定了4种含硒氨基酸,分别为硒代蛋氨酸(SeMet)、硒代乙硫氨酸(SeEt)、L-硒-甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys)、硒代胱氨酸(SeCys2)。借助于标样对含硒氨基酸和二肽进行定量,5个硒肽均含MeSeCys,其中只有一个肽段含SeCys2;但在含硒氨基酸中则是以SeMet含量最高为(586.3±49.5)ng/g,最低的是SeCys2为(102.6±9.0)ng/g。

关键词：富硒玉米硒肽含硒氨基酸液质联用法高效液相色谱-等离子体质谱法

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植物富硒肽的来源及生物活性的研究进展

食品工业科技 2023年

作者：李建明王文君陈慧韦雯璐何思辰陈凌利江西省天然产物与功能食品重点实验室江西农业大学食品科学与工程学院

硒（Se）是人体必需的微量营养素，在生命活动中发挥着重要的生理功能。与无机硒相比，有机硒生物利用度高且毒性低，是补充硒的优质来源。生物活性硒肽是有机硒的重要形式，主要来源于富硒植物提取和人工合成途径，由于具有多种有益健... 详细信息

硒（Se）是人体必需的微量营养素，在生命活动中发挥着重要的生理功能。与无机硒相比，有机硒生物利用度高且毒性低，是补充硒的优质来源。生物活性硒肽是有机硒的重要形式，主要来源于富硒植物提取和人工合成途径，由于具有多种有益健康的生物活性，生物活性硒肽已经成为近年来备受关注的研究热点。本文综合了国内外近几年的相关研究，概述了植物源生物活性硒肽的分离提取和人工螯合制备、常见的植物源生物活性硒肽及其在机体中的抗氧化、肝脏保护、免疫调节、抗癌、降血压等多种生物活性，以期为植物源生物活性硒肽在功能性食品和医药方面的开发利用提供理论参考。

关键词：硒硒肽植物源生物活性