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枳的矮化突变及其生物学特性观察

园艺学报 1994年第3期21卷 293-294页

作者：邓秀新华中农业大学柑桔研究所

枳的矮化突变及其生物学特性观察邓秀新（华中农业大学柑桔研究所，武汉４３００７０）关键词枳；矮化突变；生物学特性ＡＤｗａｒｆＭｕｔａｎｔｏｆＴｒｉｆｏｌｉａｔｅＯｒａｎｇｅａｎｄＩｔｓＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈａｒａｃｔ... 详细信息

枳的矮化突变及其生物学特性观察邓秀新（华中农业大学柑桔研究所，武汉４３００７０）关键词枳；矮化突变；生物学特性ＡＤｗａｒｆＭｕｔａｎｔｏｆＴｒｉｆｏｌｉａｔｅＯｒａｎｇｅａｎｄＩｔｓＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈａｒａｃｔｅｒｓ￥ＤｅｎｇＸｉｕｘｉｎ（Ｃｉ...

关键词：枳矮化突变生物学特性

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旱稻矮化突变体的形成机理及基因功能研究

旱稻矮化突变体的形成机理及基因功能研究

作者：安鑫月河北科技大学

学位级别：硕士

由于矮化突变体有较高的农艺价值,研究植株矮化的分子机制,开拓新的矮源对提高农作物资源创新及遗传育种意义重大。本课题以旱稻转基因株系b33为研究对象。该株系来自于以鲲旱1号(H1)为受体,克隆自小立碗藓的胚胎发育晚期丰富蛋白家族... 详细信息

由于矮化突变体有较高的农艺价值,研究植株矮化的分子机制,开拓新的矮源对提高农作物资源创新及遗传育种意义重大。本课题以旱稻转基因株系b33为研究对象。该株系来自于以鲲旱1号(H1)为受体,克隆自小立碗藓的胚胎发育晚期丰富蛋白家族的基因LEA8981为供体,转化获得的转基因后代。对其进行表型分析和插入位点及附近的基因表达量分析,该突变体外源基因插入位点附近的下游基因lnc RNA基因的表达量可能是引起植株矮化的主要原因。本研究旨在利用CRISPR/Cas系统的基因敲除技术,获得lnc RNA基因被敲除的T代植株。通过对T代植株进行表型的初步分析,探究lnc RNA是否确实对旱稻的株高存在影响。具体研究内容及实验结果如下:1、利用在线设计网站(http://***/)设计针对lnc RNA不同靶位点的sg RNA,选择特异性、综合评分、脱靶率低的sg RNA作为基因敲除靶位点,共筛选出6个靶位点。2、利用酶切、连接的方法将合成的靶位点接头连入中间载体p Os-sg RNA,转入大肠杆菌DH5α,经过PCR扩增sg RNA,测序、比对,验证靶接头位点与中间载体的连接是否正确,得到了6种构建正确的入门载体。3、利用Gateway技术的LR反应,将入门载体分别连接到目的载体p H-Ubi-Cas9上,转化大肠杆菌(DH5α)。经过抗性筛选、PCR扩增sg RNA和测序分析,最终得到6种基因编辑表达载体。4、将基因编辑表达载体分别转化到根癌农杆菌AGL-1,利用农杆菌转化法分别转化H1和b33,得到了多株阳性植株。5、针对H1的基因编辑遗传转化共获得23株T代转基因植株,其中经检测得到靶位点1基因编辑成功的植株3株,靶位点2基因编辑成功的16株;针对b33的基因编辑遗传转化共获得21株T代转基因植株,其中经检测得到靶位点1基因编辑成功的植株5株,靶位点2基因编辑成功的植株12株。6、测序分析结果显示,目的基因lnc RNA的基因编辑结果多为1-10bp碱基缺失突变和大于300bp的大片段缺失突变;碱基插入突变多为1bp、2bp碱基插入。针对H1的目的基因lnc RNA基因编辑后代,其株高与未转化的H1无明显差异;在b33基因编辑植株中,发现AB2-22、AB2-29这2个单株的株高基本恢复到H1的水平,分别是缺失了13bp和391bp的碱基片段。推测lnc RNA基因的高表达量很可能确实与突变体b33的矮化表型直接相关。

关键词：旱稻矮化突变长非编码RNA 基因编辑

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沟叶结缕草辐射诱导的矮化突变体研究

沟叶结缕草辐射诱导的矮化突变体研究

作者：毕波浙江大学

学位级别：硕士

沟叶结缕草(Zoysia matrella ***.)又名马尼拉草,是一种优良的暖季型草坪草,其具有叶片细、草丛密、色泽绿、绿期长、抗性强、耐践踏等优点,被广泛应用在我国南方大部分地区。矮化是草坪草生产应用中的重要指标,因其可以改善种植密度、... 详细信息

沟叶结缕草(Zoysia matrella ***.)又名马尼拉草,是一种优良的暖季型草坪草,其具有叶片细、草丛密、色泽绿、绿期长、抗性强、耐践踏等优点,被广泛应用在我国南方大部分地区。矮化是草坪草生产应用中的重要指标,因其可以改善种植密度、充分利用土地空间,增强光合效率、低修剪率而越来越受重视。本试验用100Gy6。Co-γ射线辐照沟叶结缕草胚性愈伤组织再生经田间筛选获得矮化突变植株(DW)和对照植株(CK)为试验材料,进行遗传稳定性检测,田间表型性状测定、叶片形态解剖分析、生理生化以及植物内源激素分析,以期发现60Co-γ辐照诱变沟叶结缕草矮化突变机理。主要研究结果如下：1.100Gy 60Co-γ射线辐照沟叶结缕草愈伤组织并进行田间表型筛选,进行为期一年半的表型观察,发现一株矮化突变体植株,经修剪移栽半年,矮化突变体植株依然保持良好的性状,具有一定的遗传稳定性;2.对矮化突变植株(DW)和对照植株(CK)表型性状分析试验发现：DW植株和CK株在表型上面差异显著,主要表现在：相比CK株,平均叶片长度9.45cm,变短43%,平均叶片宽度0.12cm,变宽41.66%,平均茎间长度1.03cm,变短27.32%,平均茎间直径0.16cm,变粗50%,平均草丛高度7.03cm,变矮31%;3.生理生化检测发现：DW株POD、SOD酶都较CK株显著增高,CAT酶活性差异不显著,但仍有增高,表明在生长期间,DW株受到了一定的矮化胁迫,在此胁迫条件下,O2-、H202含量增多,植物体内活性氧积累与清除有一定的系统调节,使得过氧化物酶活性增加。DW叶片中叶绿素含量多,差异显著,同表型指标观察有一定的相关性。蛋白质含量差异不显著,尚不清楚其作用机理。4.内源激素含量检测发现：赤霉素(GAs)与生长素(IAA)水平降低,但GAs差异不显著,IAA差异显著,同时脱落酸(ABA)水平显著降低,ABA/IAA比值增高,也说明DW株矮化突变的作用机理可能为是IAA缺失突变体。***株和CK株的叶片进行石蜡横切切片观察,DW株的维管束组织密度疏松,叶绿素含量增多,栅栏组织厚度显著小于CK株,栅栏组织和海绵组织比例偏高,植物体内叶绿素含量的增高也说明了DW植株的光合作用强度,叶片颜色明显更绿。

关键词：沟叶结缕草矮化突变辐射育种鉴定分析

甘蓝型油菜G蛋白β亚基基因的克隆和表达分析

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四川大学学报（自然科学版） 2010年第6期47卷 1434-1440页

作者：李婷婷高勇赵云王茂林四川大学生命科学学院成都610064

根据拟南芥等G蛋白β亚基基因的DNA序列,采用RT-PCR技术从甘蓝型油菜中克隆了一个编码G蛋白β亚基基因的全长cDNA,命名为***1含有1134 bp的完整开放阅读框,编码378个氨基酸,与其它植物的Gβ亚基氨基酸序列有很高的同源性,且具有保守的G... 详细信息

根据拟南芥等G蛋白β亚基基因的DNA序列,采用RT-PCR技术从甘蓝型油菜中克隆了一个编码G蛋白β亚基基因的全长cDNA,命名为***1含有1134 bp的完整开放阅读框,编码378个氨基酸,与其它植物的Gβ亚基氨基酸序列有很高的同源性,且具有保守的Gα、Gγ结合区域及WD-40结构域.对甘蓝型油菜矮化突变体及其野生型中不同组织和不同发育时期的BnAGB1表达进行实时定量PCR分析表明:BnAGB1在矮化突变体和野生型的各个组织中均有表达;在生长旺盛期的子叶期、抽薹期和荚果期有较高的表达,而在两片真叶期、四片真叶期和花期表达较低;而且,在所有分析的不同时期和组织中,矮化突变体中的表达均显著或极显著高于野生型.以上结果表明,BnAGB1参与了甘蓝型油菜的生长发育进程的调控,与油菜矮化突变性状表现可能相关.

关键词：异三聚体GTP结合蛋白 β亚基基因克隆表达甘蓝型油菜矮化突变

甘蓝型油菜ADP-核糖基化因子基因全长cDNA克隆及表达分析

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中国农业科学 2008年第12期41卷 4008-4015页

作者：刘薇赵云安金玲王茂林四川大学生命科学学院

【目的】克隆甘蓝型油菜(Brassica napus L.)矮化突变体"NDF-1"和野生型近等基因系亲本"3529"中ADP-核糖基化因子(ADP-ribosylation factor,ARF)基因全长cDNA,分析矮化突变体中该基因在不同组织中的表达水平,探讨矮化突变体中该基因在... 详细信息

【目的】克隆甘蓝型油菜(Brassica napus L.)矮化突变体"NDF-1"和野生型近等基因系亲本"3529"中ADP-核糖基化因子(ADP-ribosylation factor,ARF)基因全长cDNA,分析矮化突变体中该基因在不同组织中的表达水平,探讨矮化突变体中该基因在甘蓝型油菜茎杆发育过程中的作用。【方法】采用SSH(suppression subtractive hybridization)、RACE(rapid-amplification of cDNA ends)和RT-PCR技术,克隆甘蓝型油菜矮化突变体"NDF-1"和野生型"3529"中的ARF基因的全长cDNA序列。分别采集甘蓝型油菜野生型和矮化突变型苗期子叶、薹期根、茎尖和真叶,采用相对定量PCR方法检测矮化突变体中该基因的表达。【结果】获得了甘蓝型油菜矮化突变体"NDF-1"和野生型"3529"的ARF基因的全长cDNA,分别命名为BnARF和BnARF-h。序列分析表明:这两个基因长度分别为837和802 bp,都含有546 bp的完整开放阅读框(ORF),编码181个氨基酸,与其它植物、动物和酵母的ARF基因有很高的相似性。BnARF基因在野生型和矮化突变体的根、子叶、茎尖和真叶中均有表达,其中在子叶中表达量最高,真叶中次之,根和茎尖中的表达量最少。同时BnARF在矮化突变体的根、子叶和茎尖中的表达量都显著低于野生型,但在真叶中表达量相近。【结论】克隆了甘蓝型油菜矮化突变体"NDF-1"和野生型"3529"中ADP-核糖基化因子基因的全长cDNA,这两个ARF基因的序列上有两处碱基存在差异,其中一处是错义突变,推测这一突变可能与植株矮化有关。而BnARF基因在野生型和矮化突变体的根、子叶和茎尖的表达存在显著性差异,可能参与了甘蓝型油菜的矮秆发育过程。

关键词：甘蓝型油菜 ADP-核糖基化作用因子相对定量PCR 矮化突变

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矮化杉木蛋白质组的差异凝胶电泳分析

浙江林学院学报 2006年第3期23卷 265-269页

作者：黄华宏童再康朱玉球高燕会许长寿何福基浙江林学院林业与生物技术学院浙江临安311300 浙江省临安市马啸乡林业站浙江临安311323

建立具有高分辨率和稳定性的矮化杉木Cunninghamia lanceolata叶片蛋白质的双向电泳图谱,研究杉木矮化突变的机理。取同一生长环境下的野生型杉木及矮化突变型杉木新梢顶端的叶片,液氮研磨成粉末后用改良TCA-丙酮沉淀法提取总蛋白,分别... 详细信息

建立具有高分辨率和稳定性的矮化杉木Cunninghamia lanceolata叶片蛋白质的双向电泳图谱,研究杉木矮化突变的机理。取同一生长环境下的野生型杉木及矮化突变型杉木新梢顶端的叶片,液氮研磨成粉末后用改良TCA-丙酮沉淀法提取总蛋白,分别用CY2和CY3标记,用DIGE技术进行分析。与野生型杉木相比,在矮化突变型杉木的叶片组织中,有14个蛋白质表达水平显著增加,另外15个蛋白质表达水平显著下降。所得的29个差异蛋白质可能与杉木矮化突变的发生有关。

关键词：林木遗传育种学杉木矮化突变蛋白质组差异凝胶电泳