检索结果-南通市图书馆

检索条件"主题词=短颚、肺及鼻咽上皮克隆1"

共 1 条记录，以下是1-10 订阅

全选清除本页清除全部题录导出标记到"检索档案"

详细简洁

排序：

盘羊杂交羊SPLUNC1基因的克隆、表达及特性研究

盘羊杂交羊SPLUNC1基因的克隆、表达及特性研究

引用

作者：高宝德石河子大学

学位级别：硕士

盘羊(♂)与巴什拜羊(♀)杂交后代具有体型大、羔羊生长发育快、瘦肉率高的特点,但该杂交羔羊易感染绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)而死亡。短颚、肺及鼻咽上皮克隆1(short palate,lung and nasal epithelium clone 1,SPLU... 详细信息

盘羊(♂)与巴什拜羊(♀)杂交后代具有体型大、羔羊生长发育快、瘦肉率高的特点,但该杂交羔羊易感染绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)而死亡。短颚、肺及鼻咽上皮克隆1(short palate,lung and nasal epithelium clone 1,SPLUNC1)是新发现的具有宿主防御功能的生物活性物质,是宿主先天性防御肺炎支原体感染的关键基因。目的:本研究通过克隆盘羊杂交羊SPLUNC1基因全长c DNA序列,与盘羊及巴什拜羊SPLUNC1基因进行比较研究,并对盘羊杂交羊SPLUNC1基因进行真核表达,研究重组SPLUNC1蛋白(recombinant short palate,lung and nasal epithelium clone 1,r SPLUNC1)的抑菌作用、对体外培养的Mo生长的影响、对中性粒细胞弹性蛋白酶活性的影响、对呼吸道致病菌感染的淋巴细胞凋亡的影响,并与巴什拜羊r SPLUNC1蛋白的功能比较,为盘羊杂交羊r SPLUNC1的体外功能研究奠定基础。方法:(1)盘羊杂交羊SPLUNC1基因全长c DNA序列的克隆:使用RT-PCR法和RACE法克隆盘羊杂交羊SPLUNC1基因3’端和5’端,测序后拼接获得SPLUNC1基因全长c DNA序列。(2)盘羊杂交羊SPLUNC1基因c DNA全长序列的生物信息学分析:利用在线生物信息学分析工具及生物信息学软件对获得的盘羊杂交羊SPLUNC1基因全长c DNA序列进行核酸序列、编码氨基酸以及蛋白的信号肽、亚细胞定位、高级结构及系统发育分析。(3)盘羊杂交羊r SPLUNC1的真核表达及纯化:根据已克隆出的SPLUNC1基因全长c DNA序列设计特异性表达引物,使用RT-PCR法扩增SPLUNC1基因ORF,构建重组表达质粒p PIC9K-SPLUNC1,将重组表达质粒电击转化至巴斯德毕赤酵母GS115,并利用甲醇对重组菌株GS115/p PIC9K-SPLUNC1诱导表达,SDS-PAGE和Western Blot法检测r SPLUNC1的表达;利用Ni-NTA琼脂亲和层析对真核表达的r SPLUNC1进行纯化。(4)盘羊杂交羊r SPLUNC1的抑菌作用:利用微量肉汤稀释法检测不同浓度盘羊杂交羊r SPLUNC1对大肠杆菌、肺炎链球菌、巴氏杆菌及金黄色葡萄球菌的抑菌作用。(5)盘羊杂交羊r SPLUNC1对Mo生长的影响:利用平板菌落计数法和实时荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测盘羊杂交羊r SPLUNC1对体外培养的Mo生长的影响。(6)盘羊杂交羊r SPLUNC1对中性粒细胞弹性蛋白酶活性的影响:利用四肽底物法检测r SPLUNC1对中性粒细胞弹性蛋白酶活性的影响。(7)盘羊杂交羊r SPLUNC1对致病菌感染的淋巴细胞凋亡的影响:利用DNA ladder法和Annexin V-FITC/PI双染法检测r SPLUNC1对致病菌感染的淋巴细胞凋亡的影响。结果与结论:(1)获得1117bp的盘羊杂交羊SPLUNC1基因全长cDNA序列。(2)盘羊杂交羊SPLUNC1基因开放阅读框(ORF)为768bp,编码256个氨基酸,预测该编码蛋白的分子量为26.57KDa,等电点为5.006。生物信息学分析表明SPLUNC1蛋白N端存在20个氨基酸残基的信号肽,具有高疏水性,亚细胞定位在细胞外。氨基酸序列分析表明,盘羊杂交羊SPLUNC1蛋白与巴氏拜羊SPLUNC1蛋白有一处差异。(3)成功构建了盘羊杂交羊SPLUNC1的真核表达载体,并在毕赤酵母成功表达了分子量为25.96KDa的r SPLUNC1。(4)抑菌试验结果表明,浓度在200μg/m L的盘羊杂交羊r SPLUNC1可以极显著抑制(p<0.01)巴氏杆菌、显著抑制(p<0.05)大肠杆菌的生长。(5)平板菌落计数结果显示,浓度为40μg/m L的盘羊杂交羊r SPLUNC1能够显著(p<0.05)抑制Mo在琼脂平板上的生长。实时荧光定量PCR结果显示,浓度为40μg/m L的盘羊杂交羊r SPLUNC1在作用4h时,Mo 16S r RNA的拷贝数与对照组相比差异极显著(P<0.01)。(6)四肽底物法结果显示,浓度大于20μg/m L的盘羊杂交羊r SPLUNC1可以增强NE的活性,且具有剂量效应。(7)DNA ladder法和Annexin V-FITC/PI双染法结果表明盘羊杂交羊r SPLUNC1对致病菌感染的淋巴细胞凋亡无影响。

关键词：盘羊杂交羊短颚、肺及鼻咽上皮克隆1 克隆真核表达体外功能

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

全选清除本页清除全部题录导出标记到“检索档案”

共1页 << < 1 > >>

回到顶部

执行限定条件

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：