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红景天苷干预大鼠心肌缺血再灌注心律失常电生理机制的研究

红景天苷干预大鼠心肌缺血再灌注心律失常电生理机制的研究

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作者：赵奕霖新乡医学院

学位级别：硕士

背景缺血性心脏病(ischemic heart disease,IHD)目前是全球人类死亡的重要原因之一,心肌缺血后及再灌注过程中出现的心律失常(reperfusion arrhythmias,RA)是威胁患者生命的重要因素,预防心肌缺血再灌注心律失常的发生在整个急性冠脉综... 详细信息

背景缺血性心脏病(ischemic heart disease,IHD)目前是全球人类死亡的重要原因之一,心肌缺血后及再灌注过程中出现的心律失常(reperfusion arrhythmias,RA)是威胁患者生命的重要因素,预防心肌缺血再灌注心律失常的发生在整个急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)治疗过程中尤为重要。红景天苷(salidroside,SAL)具有抗炎、抗氧化、修复心肌细胞等作用,据报道该药物可能具有抑制心律失常作用,但具体作用机制尚不明确。目的本课题从心脏电生理角度研究红景天苷干预大鼠离体心脏缺血再灌注心律失常的作用机制,进一步为临床患者心肌缺血再灌注心律失常的治疗提供新的策略。方法1.量—效实验:取280±20g雄性SD大鼠心脏置于Langendorff灌流系统上,给予Krebs—Henseleit(K—H)溶液循环,贴附心电图(electrocardiogram,ECG)电极、刺激电极和矩阵式多通道电生理标测电极。运用多通道电生理标测系统(Mapping Lab)和EMap Scope软件分析不同浓度SAL(1μg/ml、5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、75μg/ml)干预离体心脏前后有效不应期(effective refractory period,ERP),进一步分析心脏传导速度和时间,明确缺血再灌注实验红景天苷浓度;2.缺血再灌注实验:将SD大鼠随机分为SAL组与模型组,取出心脏后置于灌流系统上给予K—H溶液循环,贴附ECG电极、刺激电极和矩阵式多通道电生理标测电极。SAL组缺血前给予SAL 5μg/m L干预10分钟后结扎前降支,缺血15min后给予复灌15min,分别在缺血和复灌第0min、1min、2min、3min、5min、10min、15min时记录ECG,运用Mapping Lab和EMap Scope软件,观察心室颤动(ventricular fibrillation,VF)发生率、ST抬高程度,检测心脏传导速度、传导时间、传导离散度。复灌后出现心室颤动则停止检测,模型组进行同样操作但不给予SAL干预;3.膜片钳实验:使用1550A数模转换器和p Clamp10.6采集分析软件。用拉制仪拉制硼硅酸盐材质硬质玻璃电极,充灌电极内液后电极电阻在2—5MΩ之间。将预先处理得到的稳定表达Nav1.5通道蛋白的中国仓鼠卵巢(chinese hamster ovary,CHO)细胞置于浴槽,取100μL左右细胞悬液接种至细胞爬片上,贴壁2小时后,运用红景天苷50μg/m L作用于细胞,选择独立单个细胞调至视野清晰,将拉制的微电极固定于Multi Clamp 700A放大器探头上,采用微电极操纵器将电极入液,电极接触细胞后给予负压,采用6 KHz的滤波,进行电生理记录。将细胞钳位于-120 m V,由-120 m V去极化至-15 m V,持续时间为100ms,调节钳制电压,使通道电流失活约20%,每条Sweep为5s,记录红景天苷作用CHO前后Nav1.5通道电流变化。结果1.量—效实验:根据电标测结果显示,随着SAL浓度的增加,心脏传导时间变短,传导速度加快。在给药至5μg/ml时,左心室平均传导速度最快,与给药前相比具有明显差异(p通道更易激活。结论红景天苷可以加快心肌缺血区传导速度,减小传导离散度,起到保护心肌、降低心肌缺血再灌注心律失常发生的作用,机制与红景天苷通过使Nav1.5通道激活曲线左移,降低兴奋阈值,使心肌细胞更易兴奋相关。

关键词：红景天苷缺血再灌注再灌注心律失常矩阵式多通道电生理标测技术膜片钳技术

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