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黄体生成素受体对睾丸间质干细胞增殖分化的影响

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新医学 2021年第5期52卷 352-359页

作者：汪富林夏凯冯鑫庄锦涛周明宽廖武源雷振明项鹏邓春华涂响安中山大学附属第一医院泌尿男科广州510080 美国肯塔基州路易斯维尔大学路易斯维尔市40202 中山大学中山医学院广州510089

目的探讨黄体生成素受体(LHCGR)对睾丸间质干细胞(SLC)增殖及分化能力的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及免疫荧光染色比较LHCGR-/-小鼠与LHCGR^(+/+)小鼠睾丸内SLC标志物的表达情况。通过流式细胞术分选出SLC,进行5-乙炔基-2'... 详细信息

目的探讨黄体生成素受体(LHCGR)对睾丸间质干细胞(SLC)增殖及分化能力的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及免疫荧光染色比较LHCGR-/-小鼠与LHCGR^(+/+)小鼠睾丸内SLC标志物的表达情况。通过流式细胞术分选出SLC,进行5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)及CCK-8增殖实验。同时诱导SLC向睾丸间质细胞(LC)分化,14 d后检测上清液睾酮水平。qRT-PCR及免疫荧光检测诱导分化后LC标志物表达水平。结果LHCGR-/-小鼠睾丸内存在SLC,应用CD51标记并通过流式分选可获得SLC。LHCGR-/-小鼠SLC EdU+细胞比例和CCK-8增殖曲线与LHCGR^(+/+)小鼠比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。LHCGR-/-小鼠SLC诱导分化后培养基上清液睾酮平均水平仅为0.01 ng/ml,低于LHCGR^(+/+)对照组的2.71 ng/ml(P细胞LC标记物的表达也低于LHCGR^(+/+)小鼠(P均睾丸内存在SLC且能维持正常的增殖活性,但是分化为LC受阻。

关键词：黄体生成素受体睾丸间质干细胞增殖分化睾丸间质细胞发育不良

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干细胞移植治疗睾丸衰老的现状与思考

器官移植 2023年第3期14卷 319-326页

作者：莫嘉辉李欣禹陈志宏张敏邓春华中山大学附属第一医院泌尿外科与男科广州510080 中山大学附属第一医院转化医学研究中心广州510080

睾丸衰老的主要特点为睾酮合成能力以及生精功能逐渐下降,不仅会影响男性生育力,也与衰老相关慢性疾病关系密切。因此,延缓睾丸衰老对于改善中老年男性健康和生活质量至关重要。干细胞是具有强大的自我更新能力和多向分化潜能的细胞群体... 详细信息

睾丸衰老的主要特点为睾酮合成能力以及生精功能逐渐下降,不仅会影响男性生育力,也与衰老相关慢性疾病关系密切。因此,延缓睾丸衰老对于改善中老年男性健康和生活质量至关重要。干细胞是具有强大的自我更新能力和多向分化潜能的细胞群体,近年来,其基础与临床应用研究不断深化,推动了细胞疗法的发展。干细胞移植目前已被用于治疗多种疾病,在衰老与再生医学领域也受到广泛关注。干细胞移植在治疗睾丸衰老中也具有巨大的应用前景。本文将回顾干细胞移植治疗睾丸衰老的相关研究历程与进展,并探讨临床转化面临的瓶颈以及疗效优化策略,以期为睾丸衰老的干细胞疗法研发及临床转化提供新思路。

关键词：干细胞移植睾丸衰老睾丸间质干细胞精原干细胞间充质干细胞诱导多能干细胞睾酮

高糖环境对大鼠睾丸间质细胞功能及再生调控的初步研究

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高糖环境对大鼠睾丸间质细胞功能及再生调控的初步研究

作者：洪文宾暨南大学

学位级别：硕士

目的:睾丸间质细胞(Leydig cell,LC)是男性雄激素合成的主要来源,人体内95%的血浆雄激素都由其合成和分泌。它的合成和分泌主要受下丘脑-垂体-性腺轴的调控。成体睾丸间质细胞是在雄性出生后开始发育和分化,整个分化过程历经间质干细胞(... 详细信息

目的:睾丸间质细胞(Leydig cell,LC)是男性雄激素合成的主要来源,人体内95%的血浆雄激素都由其合成和分泌。它的合成和分泌主要受下丘脑-垂体-性腺轴的调控。成体睾丸间质细胞是在雄性出生后开始发育和分化,整个分化过程历经间质干细胞(SLC)、间质祖细胞(PLC)、未成熟型间质细胞(ILC)及成熟型间质细胞(ALC)四个阶段。除了SLC以外,其余三种不同发育阶段的睾丸间质细胞均能合成和分泌雄激素。LC分化异常、数量减少及雄激素合成通路受损都会直接导致男性体内雄激素缺乏,严重影响男性生殖健康。糖尿病是一种严重影响人类健康和生活质量的慢性非传染性疾病,现时已成为世界各国越来越重视的一个公共卫生问题。大量的临床数据表明,2型糖尿病(T2D)患者普遍存在雄激素合成能力低下及胰岛素抵抗的现象。在另一方面,体外补充雄激素(提高血清睾酮含量)可以有效降低糖尿病患者高血糖水平和提高机体内胰岛素敏感性。这些结果都提示了血清睾酮水平与人类患糖尿病的风险之间存在密切的相关性。但其具体作用机制知之甚少。而明确高糖环境对睾丸间质细胞合成雄激素的调节途径及其对睾丸间质细胞谱系发育调控的影响是阐明这个机制问题的关键。方法:首先利用高脂高糖饲料喂养及腹腔注射低剂量链脲佐霉素(STZ,35mg/Kg体重)来构建2型糖尿病模型大鼠。待血糖稳定后(血糖浓度≥11mmol/L),再通过腹腔注射EDS(75mg/Kg体重),4天后特异性诱导ALCs全部凋亡。使用高脂高糖饲料连续饲养实验大鼠2个月。在注射EDS后第21天(RPLC),35天(RILC),56天(RALC)三个时间点收集大鼠的血清,睾丸,下丘脑和垂体。利用放射性酶联免疫方法检查血清睾酮含量,ELISA法测定血清中LH及FSH的含量,实时荧光定量PCR和western blot来评估LC雄激素合成通路中关键的类固醇合成酶基因和蛋白的表达情况。然后再建立经EDS处理的曲细精管体外培养模型,加入含不同糖浓度(7.7、23.1、46.2、92.4mmol/L)的培养基处理24小时。EdU标记试剂盒来观察不同高糖环境对睾丸间质干细胞增殖的影响。此外,利用实时荧光定量PCR和western blot来评估LC雄激素合成通路中各个重要的基因和蛋白的表达情况,并利用放射性免疫方法来测定培养基上清中激素的表达情况。明确高糖环境对睾丸间质细胞合成雄激素的调节途径及其对睾丸间质细胞谱系发育调控的影响将是阐明这个机制问题的首要步骤。结果:成功建立T2D大鼠模型。与正常对照组相比,T2D模型大鼠体内血清睾酮含量显著下降;注射EDS后56天后,血清睾酮含量部分恢复并能改善动物高血糖状态。无论是否进行EDS处理,T2D模型组及正常对照组大鼠体内的LH和FSH含量之间均没有显著差异,提示T2D模型大鼠体内睾酮含量的下降不是下丘脑-垂体轴的变化所致。在另一方面高糖环境对再生睾丸间质细胞能分化到成熟阶段(ALC)没有影响。病理切片和免疫荧光检测试验结果显示,而相对于正常对照组,T2D模型组大鼠睾丸中睾丸间质细胞的数目、睾酮合成相关关键酶的基因和蛋白表达水平都显著下降。随后,利用曲细精管体外培养模型验证高糖环境对SLC的增殖和分化的影响。结果说明,高糖环境能显著抑制SLC的增殖,并呈现剂量依赖性。尽管糖浓度不影响SLC发育为ALC,但其可以通过抑制睾酮合成相关限速酶的表达来减少雄激素的合成和分泌。结论:糖尿病大鼠中存在的睾酮水平低下并不是由于LH水平的变化而改变的,而是由于睾丸间质细胞的损伤导致雄激素合成关键酶的基因以及蛋白的表达量下调所引起的,通过SLC的再生自主恢复睾酮水平,对于糖尿病大鼠起到了明显的改善作用。不同糖浓度体外培养的曲细精管模型中,高糖环境糖主要通过抑制SLC的增殖及其雄激素合成关键酶的表达导致体内睾酮水平下降。

关键词：雄激素睾丸间质干细胞糖尿病

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干细胞治疗迟发性性腺功能减退症的研究进展

临床泌尿外科杂志 2023年第4期38卷 310-314页

作者：赵伟刘春山西医科大学第一医院泌尿外科太原030000

迟发性性腺功能减退症(LOH)是困扰中老年男性的常见疾病。目前的睾酮替代疗法存在各种弊端。近年来,随着再生医学研究的不断发展,干细胞治疗越来越成为研究热点。本文主要介绍以诱导多能干细胞(iPSCs)、睾丸间质干细胞(SLCs)和间充质干... 详细信息

迟发性性腺功能减退症(LOH)是困扰中老年男性的常见疾病。目前的睾酮替代疗法存在各种弊端。近年来,随着再生医学研究的不断发展,干细胞治疗越来越成为研究热点。本文主要介绍以诱导多能干细胞(iPSCs)、睾丸间质干细胞(SLCs)和间充质干细胞(MSCs)为来源的干细胞治疗LOH的研究进展,重点比较各方案的不同及其产生细胞的有效性和安全性。目前关于干细胞治疗仍处于早期研究阶段,治疗的安全性、免疫排斥等问题仍有待解决。相信随着研究的进展,以MSCs为代表的干细胞将在LOH治疗中发挥重要作用。

关键词：多能诱导干细胞间充质干细胞睾丸间质干细胞睾丸间质细胞睾酮