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大黄蛰虫丸抑制坏死性凋亡信号通路改善大鼠睾丸衰老的作用和机制

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中国中药杂志 2022年第15期47卷 4119-4127页

作者：李欢涂玥万毅刚穆耕林吴薇陈佳鑫王美子王杰符燕蔡玉丰王玉 WAN Zi-yue 南京中医药大学鼓楼临床医学院中医科江苏南京210008 南京中医药大学针灸推拿学院·养生康复学院江苏南京210023 江苏省中医药健康养生技术工程研究中心江苏南京210023 南京大学医学院附属鼓楼医院中医科江苏南京210008 南京大学中医研究院江苏南京210008 Graduate School of Social Sciences Faculty of Social Sciences Hitotsubashi University Tokyo 186-8601

为了探究传统经方——大黄蛰虫丸(Dahuang Zhechong Pills,DHZCP)在体内改善睾丸衰老(testicular aging,TA)的作用和机制,笔者将24只雄性大鼠随机分成正常组、模型组、DHZCP组和维生素E(vitamin E,VE)组,通过D-半乳糖(D-galactose,D-gal)连续灌胃建立大鼠TA模型。在实验期间,每天经灌胃分别给予DHZCP组和VE组大鼠DHZCP混悬液和VE混悬液;此外,经灌胃给予正常组和模型组大鼠生理盐水。在D-gal和不同药物联合干预60 d后,处死全部大鼠,收集血液及睾丸组织,进而,针对模型鼠TA和睾丸细胞坏死性凋亡相关的各项指标进行检测和观察。这些指标包括各组大鼠衰老表型、睾丸总质量和睾丸指数、睾丸组织病理学特征和生精细胞数、性激素水平、睾丸组织活性氧(reactive oxygen species,ROS)产物表达特征、睾丸组织细胞周期蛋白表达水平和表达特征以及受体相互作用蛋白激酶1(receptor interacting serine/threonine protein kinase 1,RIPK1)/受体相互作用蛋白激酶3(receptor interacting serine/threonine protein kinase 3,RIPK3)/底物混合谱系激酶样蛋白(mixed lineage kinase domain like pseudokinase,MLKL)信号通路关键信号分子蛋白表达水平。结果显示,对于TA模型鼠,DHZCP和VE都能改善衰老表型、睾丸总质量和睾丸指数、睾丸组织病理性特征和生精细胞数、血清睾酮和血清卵泡刺激素水平、睾丸组织ROS表达特征以及P21、P53蛋白表达水平和表达特征;此外,DHZCP与VE都能改善模型鼠睾丸组织RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路关键信号分子蛋白表达水平;其中,对于RIPK3的改善作用,DHZCP优于VE。总之,在该研究中,笔者发现,DHZCP与VE相似,在体内能改善D-gal诱导的大鼠TA,其作用机制与抑制RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路活性而减轻睾丸细胞坏死性凋亡有关。该研究为传统经方在男性健康领域的开发应用提供了初步的药理学证据。

关键词：大黄蛰虫丸睾丸衰老坏死性凋亡 RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路

FOXO1a/3a/4/6在人睾丸中的表达规律及其在睾丸衰老的作用初探

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中华男科学杂志 2022年第2期28卷 114-121页

作者：李砚青张弛吕林艳谢云夏凯叶云林陈海城梁晓燕邓春华刘贵华中山大学附属第六医院生殖医学中心广东广州510000 中山大学附属第三医院泌尿外科广东广州510000 中山大学附属第一医院男科广东广州510000 中山大学附属肿瘤医院泌尿外科广东广州510000

目的:揭示FOXO1a、FOXO3a、FOXO4和FOXO6在人类睾丸中的表达规律,并分析其在睾丸衰老发生、发展中的作用。方法:2018年1月至2020年12月共收集来自睾丸癌旁正常睾丸组织4例(患者年龄分别为28、31、32、46岁)、前列腺癌睾丸去势手术后睾... 详细信息

目的:揭示FOXO1a、FOXO3a、FOXO4和FOXO6在人类睾丸中的表达规律,并分析其在睾丸衰老发生、发展中的作用。方法:2018年1月至2020年12月共收集来自睾丸癌旁正常睾丸组织4例(患者年龄分别为28、31、32、46岁)、前列腺癌睾丸去势手术后睾丸组织2例(患者年龄分别为66、81岁)。采用Western印迹检测人睾丸中FOXO1a、FOXO3a、FOXO4和FOXO6的表达变化规律,免疫荧光明确检测FOXO1a、FOXO3a、FOXO4和FOXO6在睾丸组织中的细胞定位,并通过imageJ软件进行半定量分析,采用SPSS 23.0软件进行统计分析。结果:睾丸中FOXO1a和FOXO3a的表达水平在年老人群中表达下降(P睾丸组织中阳性细胞率呈现随年龄下降趋势;FOXO4和FOXO6在不同年龄段睾丸中的表达水平无明显差异。FOXO1主要位于生精小管基部,FOXO3a和FOXO4主要在睾丸间质中表达,FOXO6主要在生精小管中表达。此外,FOXO4在衰老的睾丸间质细胞中发生了与年龄相关的核易位,表明FOXO4与睾丸间质细胞的衰老有关。结论:FOXO1a/3a/4与人类睾丸衰老及相应病理变化可能密切相关,但其具体作用机制仍有待于进一步探索。

关键词：叉头框O(FOXO)家族睾丸衰老睾丸间质细胞生精细胞

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干细胞移植治疗睾丸衰老的现状与思考

器官移植 2023年第3期14卷 319-326页

作者：莫嘉辉李欣禹陈志宏张敏邓春华中山大学附属第一医院泌尿外科与男科广州510080 中山大学附属第一医院转化医学研究中心广州510080

睾丸衰老的主要特点为睾酮合成能力以及生精功能逐渐下降,不仅会影响男性生育力,也与衰老相关慢性疾病关系密切。因此,延缓睾丸衰老对于改善中老年男性健康和生活质量至关重要。干细胞是具有强大的自我更新能力和多向分化潜能的细胞群体... 详细信息

睾丸衰老的主要特点为睾酮合成能力以及生精功能逐渐下降,不仅会影响男性生育力,也与衰老相关慢性疾病关系密切。因此,延缓睾丸衰老对于改善中老年男性健康和生活质量至关重要。干细胞是具有强大的自我更新能力和多向分化潜能的细胞群体,近年来,其基础与临床应用研究不断深化,推动了细胞疗法的发展。干细胞移植目前已被用于治疗多种疾病,在衰老与再生医学领域也受到广泛关注。干细胞移植在治疗睾丸衰老中也具有巨大的应用前景。本文将回顾干细胞移植治疗睾丸衰老的相关研究历程与进展,并探讨临床转化面临的瓶颈以及疗效优化策略,以期为睾丸衰老的干细胞疗法研发及临床转化提供新思路。

关键词：干细胞移植睾丸衰老睾丸间质干细胞精原干细胞间充质干细胞诱导多能干细胞睾酮

基于超高液相色谱-质谱联用技术对关中奶山羊睾丸发育与衰老代谢谱分析

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基于超高液相色谱-质谱联用技术对关中奶山羊睾丸发育与衰老代谢...

作者：王广西北农林科技大学

学位级别：硕士

睾丸是哺乳动物中具有双向分化潜能的组织之一,具有生精和内分泌作用,其功能障碍易造成性功能减退或雄性不育,这极大程度的制约了动物的繁殖功能。睾丸的发育是一个渐进的生理过程,其发育进程与精子发生过程密切相关。关中奶山羊是陕西... 详细信息

睾丸是哺乳动物中具有双向分化潜能的组织之一,具有生精和内分泌作用,其功能障碍易造成性功能减退或雄性不育,这极大程度的制约了动物的繁殖功能。睾丸的发育是一个渐进的生理过程,其发育进程与精子发生过程密切相关。关中奶山羊是陕西关中地区的优良奶山羊品种,一般在1月龄断奶,5月龄达到性成熟,24月龄达到体成熟,60月龄开始衰老。目前,从代谢组学的角度探讨关中奶山羊睾丸发育与衰老代谢机制的研究尚无报道。本研究拟采用超高液相色谱-质谱联用技术(UPLC-MS/MS)对关中奶山羊睾丸组织发育与衰老进行了代谢组学比较分析。结果如下:1.在1月龄与5月龄关中奶山羊睾丸发育代谢谱的比较分析中,共筛选出373种差异代谢物,其中极显著差异代谢物有68种,32种上调,36种下调,分属于脂质与类脂质分子、有机酸及其衍生物、有氧化合物、核苷、核苷酸和类似物、有机杂环化合物、有机氮化合物、苯环型化合物、聚酮类化合物8大类,涉及到的关键代谢通路有15条,分别为嘌呤代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、谷氨酸能突触、GABA能突触、酒精中毒、蛋白质消化吸收、细胞缝隙连接、胆碱在肿瘤中的代谢、肿瘤中的中心碳代谢、β-丙氨酸代谢、D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢、血管平滑肌收缩、脂肪细胞中脂解的调节、鞘脂信号通路和谷胱甘肽代谢通路。通过相关代谢通路上富集代谢物发现L-谷氨酸、L-谷氨酰胺、腺苷和脯氨酸为潜在的生物标志物。2.在5月龄与24月龄关中奶山羊睾丸发育代谢谱的比较分析中,共筛选出189种差异代谢物,其中极显著差异代谢物有44种,15种上调,29种下调,分属于脂质与类脂质分子、有机酸及其衍生物、核苷、核苷酸和类似物、有机氧化合物、有机杂环化合物、有机氮化合物、苯环型化合物、聚酮类化合物8大类,涉及到的关键代谢通路有13条,分别为胆碱在肿瘤中的代谢、精氨酸生物合成、嘌呤代谢、细胞缝隙连接、谷胱甘肽代谢、肌萎缩侧索硬化症、精氨酸和脯氨酸代谢、初级胆汁酸生物合成、抗坏血酸和醛糖代谢、胰岛素抵抗、甘油磷脂代谢、牛磺酸和亚牛磺酸代谢和咖啡因代谢通路。通过相关代谢通路上富集代谢物发现L-谷氨酸和L-精氨酸为潜在的生物标志物。3.在24月龄与60月龄关中奶山羊睾丸衰老代谢谱的比较分析中,共筛选出129种差异代谢物,其中极显著差异代谢物有35种,21种上调,14种下调,分属于有机酸及其衍生物、脂质和类脂质分子、核苷、核苷酸和类似物、有机氧化合物、苯丙烷和聚酮化合物、有机氮化合物、有机杂环化合物7大类,涉及到的关键代谢通路有9条,分别为铁死亡、ABC转运蛋白、谷胱甘肽代谢、精氨酸生物合成、氨基酰-t RNA生物合成、酒精中毒、氨基酸糖和核苷酸糖代谢、胆碱在肿瘤中的代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、肌萎缩侧索硬化症、嘌呤代谢、逆行内大麻素信号和牛磺酸和亚牛磺酸代谢通路。通过相关代谢通路上富集代谢物发现L-谷氨酸和L-精氨酸为潜在的生物标志物。综上所述,本研究表明,L-谷氨酸、L-精氨酸、L-谷氨酰胺、腺苷和脯氨酸是睾丸发育过程中的潜在生物标志物,L-谷氨酸和L-精氨酸是睾丸衰老过程中的潜在生物标志物。本试验从代谢组学角度揭示了关中奶山羊睾丸发育与衰老过程中的差异代谢物及代谢机制,为进一步研究哺乳动物睾丸的发育与衰老机制奠定了科学基础。

关键词：关中奶山羊 UPLC-MS/MS 睾丸发育睾丸衰老差异代谢物

加减地黄饮子对衰老小鼠睾丸组织SIRT3基因表达的影响

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河北中医药学报 2023年第5期38卷 1-5页

作者：高山张佩青杨光李长见黑龙江省中医药科学院哈尔滨150036 黑龙江中医药大学哈尔滨150040

目的:观察加减地黄饮子对衰老小鼠睾丸组织沉默信息转录调节基因3(SIRT3)表达的影响。方法:选取2月龄雄性ICR小鼠作为青年组,20月龄小鼠作为老年组、维生素E组和加减地黄饮子组。青年组、老年组以生理盐水灌胃,维生素E组、加减地黄饮子... 详细信息

目的:观察加减地黄饮子对衰老小鼠睾丸组织沉默信息转录调节基因3(SIRT3)表达的影响。方法:选取2月龄雄性ICR小鼠作为青年组,20月龄小鼠作为老年组、维生素E组和加减地黄饮子组。青年组、老年组以生理盐水灌胃,维生素E组、加减地黄饮子组以对应药物灌胃。干预60 d后计算睾丸器官指数,观测睾丸组织病理学变化,检测各组小鼠血清睾酮和肝肾功能,检测睾丸组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,以RT-PCR和Western-blot法检测SIRT3基因的mRNA和蛋白表达。结果:与老年组比较,加减地黄饮子组小鼠睾丸器官指数无差异(P>0.05);睾丸组织结构清晰稳定,精原细胞、精母细胞、支持细胞增多;血清睾酮水平升高,肝肾功指标正常,SOD、GSH-Px水平升高,MDA水平降低,SIRT3基因mRNA及其蛋白表达水平升高,差异均有统计学意义(P睾丸氧化应激损伤而延缓睾丸衰老。

关键词：加减地黄饮子睾丸衰老延缓 SIRT3 氧化应激损伤

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灵龟八法对衰老大鼠睾酮合成与分泌的影响

时珍国医国药 2022年第7期33卷 1784-1787页

作者：邓志玲苗芙蕊赵彩娇杨丽梅盛彩玲李锌夷霍俐颖广西中医药大学针灸推拿学院南宁530001

目的观察灵龟八法开穴针刺对雄性衰老模型大鼠睾酮分泌与合成的影响,探索其延缓睾丸衰老的机制。方法 40只SD雄性大鼠随机分为空白组、模型组、灵龟八法组、假穴位组,每组10只。除空白组外,其余3组均以D-半乳糖溶液(500mg/kg)腹腔注射... 详细信息

目的观察灵龟八法开穴针刺对雄性衰老模型大鼠睾酮分泌与合成的影响,探索其延缓睾丸衰老的机制。方法 40只SD雄性大鼠随机分为空白组、模型组、灵龟八法组、假穴位组,每组10只。除空白组外,其余3组均以D-半乳糖溶液(500mg/kg)腹腔注射制造亚急性衰老大鼠模型。造模成功后,除模型组外,分别进行灵龟八法开穴针刺、假穴位针刺,针刺时间为20min,治疗1次/d,连续28 d;采用酶联免疫法(ELISA)法检测雄性大鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量以及睾酮(T)的浓度,采用实时荧光定量PCR法检测睾丸组织中类固醇合成急性调节蛋白(StAR)、转运蛋白(TSPO)mRNA的表达水平,用HE染色观察睾丸组织病理变化。结果与空白组比较,模型组大鼠血清T明显降低(P睾丸组织中TSPO、StARmRNA的表达水平降低(P睾丸组织中TSPO、StARmRNA的表达水平升高(P睾丸组织中TSPO、StARmRNA的表达水平升高(P睾丸组织形态及间质细胞数量上得到很好的恢复(P睾丸组织内环境,恢复受损伤的间质细胞,提高TSPO、StAR含量,提高睾酮合成与分泌。

关键词：灵龟八法睾丸衰老抗氧化作用睾酮

灵龟八法针刺对衰老大鼠睾酮合成与分泌的影响

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灵龟八法针刺对衰老大鼠睾酮合成与分泌的影响

作者：邓志玲广西中医药大学

学位级别：硕士

目的:观察灵龟八法针刺对雄性衰老模型大鼠睾酮分泌与合成的影响,探讨其延缓睾丸衰老的机制。方法:53只SPF级SD雄性大鼠随机抽取10只,作为空白组,剩余的大鼠用D-半乳糖溶液（500mg/kg）腹腔注射制造亚急性衰老大鼠模型,连续造模42天。... 详细信息

目的:观察灵龟八法针刺对雄性衰老模型大鼠睾酮分泌与合成的影响,探讨其延缓睾丸衰老的机制。方法:53只SPF级SD雄性大鼠随机抽取10只,作为空白组,剩余的大鼠用D-半乳糖溶液（500mg/kg）腹腔注射制造亚急性衰老大鼠模型,连续造模42天。造模成功后取40只大鼠平均随机分为模型组、灵龟八法组、维生素E组、假穴位组,每组10只。除空白组、模型组外,其余3组分别进行灵龟八法针刺、假穴位针刺以及口服维生素E干预治疗,连续28d。采用酶联免疫法（ELISA）法检测雄性大鼠血清中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的含量以及睾酮（T）的浓度、急性调节蛋白（StAR）、转运蛋白（TSPO）含量;采用实时荧光定量PCR法检测睾丸组织中类固醇合成急性调节蛋白（StAR）、转运蛋白（TSPO）mRNA的表达水平;用HE染色观察睾丸组织病理变化及间质细胞（Leydig细胞）的数量。结果:（1）与空白组比较,模型组大鼠血清T、SOD、TSPO、StAR含量显著降低（P＜0.01）,MDA含量显著升高（P＜0.01）,睾丸组织中TSPO、StARmRNA的表达水平降低（P＜0.01）。（2）与模型组比较,灵龟八法组、维生素E组、假穴位组血清MDA含量降低（P＜0.01）;灵龟八法组、维生素E组血清T、SOD、TSPO、StAR含量以及大鼠睾丸组织中TSPO、StAR mRNA的表达水平升高（P＜0.01）;假穴位组血清T、StAR含量以及睾丸组织中TSPO、StAR mRNA的表达水平上比较差异不明显（P＞0.05）,血清TSPO含量升高（P＜0.05）,SOD含量升高（P＜0.01）。（3）与维生素E组比较,灵龟八法组血清中SOD含量升高（P＜0.05）,睾丸组织的TSPO mRNA的表达水平显著升高（P＜0.01）,血清T、TSPO、StAR含量以及睾丸组织的StAR mRNA的表达水平上比较差异不明显（P＞0.05）。（4）与假穴位组比较,灵龟八法组血清T浓度、睾丸组织的TSPO mRNA表达水平显著升高（P＜0.01）;血清中SOD、TSPO含量、睾丸组织中StAR mRNA的表达水平升高（P＜0.05）。（5）与模型组比较,灵龟八法组、维生素E组在睾丸组织形态及间质细胞数量上得到很好的恢复（P＜0.01）,假穴位组反之。结论:灵龟八法针刺能提高TSPO、StAR的含量,提高睾酮合成与分泌,延缓睾丸衰老,可能是与其能通过抗氧化作用,改善睾丸组织内微环境,恢复受损伤的间质细胞有关。

关键词：灵龟八法睾丸衰老抗氧化作用睾酮

人羊膜间充质干细胞改善高龄小鼠睾丸功能的实验研究

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国际生殖健康／计划生育杂志 2021年第4期40卷 265-271,F0003页

作者：张月鑫刘菡文施陈楠宁松周静李楚玉杨晓玉覃莲菊刘嘉茵胡艳秋崔毓桂南京医科大学第一附属医院生殖医学科生殖医学国家重点实验室210029

目的:探讨人羊膜间充质干细胞(hAMSC)改善高龄雄性小鼠睾丸功能的作用。方法:以36周龄雄性小鼠为高龄模型组,10周龄小鼠为年轻对照组。31只高龄模型组小鼠随机分为5组,分别为生理盐水对照组、1%人血清白蛋白对照组和治疗组,其中生理盐... 详细信息

目的:探讨人羊膜间充质干细胞(hAMSC)改善高龄雄性小鼠睾丸功能的作用。方法:以36周龄雄性小鼠为高龄模型组,10周龄小鼠为年轻对照组。31只高龄模型组小鼠随机分为5组,分别为生理盐水对照组、1%人血清白蛋白对照组和治疗组,其中生理盐水对照组3只,其余各组每组7只。治疗组小鼠尾静脉注射hAMSC,剂量分别为3.4×10^(6)细胞/kg(低剂量组)、6.7×10^(6)细胞/kg(中剂量组)、1.4×10^(7)细胞/kg(高剂量组)。每周注射1次,治疗4次后小鼠继续饲养,5周后取血检测小鼠血清睾酮水平;行附睾内精子的分析;免疫荧光检测睾丸组织内STEM121和CD105的表达和定位,观察睾丸组织病理学改变,检测类固醇激素生成急性调节蛋白(StAR)、17β-羟基类固醇脱氢酶(17β-HSD)的表达水平。结果:与年轻雄鼠比较,治疗前高龄雄鼠体质量增加、睾丸体质比下降、睾周脂肪质量增加(均P睾丸组织StAR和17β-HSD蛋白表达水平与年轻雄鼠比较差异无统计学意义(均P>0.05)。hAMSC治疗后,睾丸间质区可见STEM121和CD105表达的细胞;高剂量组血清睾酮水平升高(P睾丸组织StAR蛋白表达无显著差异(P>0.05),但高剂量组17β-HSD蛋白表达上调(P睾丸组织的生精小管细胞层数较人血清白蛋白对照组增多(P睾丸衰老具有保护作用,并促进雄激素合成。

关键词：间充质基质细胞羊膜衰老生育力间质干细胞移植人羊膜间充质干细胞睾丸衰老生精功能睾酮合成