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沙苑子提取物对糖尿病所导致睾丸损伤的治疗作用

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生物加工过程 2024年

作者：李佳琪莫廷美王小轩林娜韦景薰闫炳荣傅杨恺黄鹭铭马博南京工业大学药学院江苏省药物研究所有限公司

研究沙苑子提取物（SAC）对糖尿病所致睾丸损伤的保护作用及分子机制。通过高脂饲料喂养结合腹腔注射链脲佐菌素（STZ），建立Ⅱ型糖尿病小鼠模型。将雄性ICR小鼠随机分为正常组，模型组，低、中和高剂量SAC组（100、200和400 mg/kg SA... 详细信息

研究沙苑子提取物（SAC）对糖尿病所致睾丸损伤的保护作用及分子机制。通过高脂饲料喂养结合腹腔注射链脲佐菌素（STZ），建立Ⅱ型糖尿病小鼠模型。将雄性ICR小鼠随机分为正常组，模型组，低、中和高剂量SAC组（100、200和400 mg/kg SAC）。建模成功后，持续治疗8周。检测小鼠血糖浓度、睾丸指数、精子计数及形态以及睾丸组织内丙二醛（MDA）、H2O2及过氧化氢酶（CAT）水平；并通过组织形态学分析观察睾丸组织；免疫组织化学检测8羟基脱氧鸟苷（8 OHdG）,4羟基壬烯醛（4 HNE）和NADPH氧化酶4（Nox4）在睾丸中的表达；实时荧光定量聚合酶链式反应（RT PCR）检测Nox4mRNA水平；western blotting检测Nox4在睾丸中的表达。结果表明，与模型组相比，低、中和高剂量SAC组均有一定的降糖作用，且能在一定程度上恢复睾丸形态，提高睾丸指数和精子计数，并且可以显著降低睾丸组织内的MDA和H2O2水平，明显提升CAT水平；组织病理学和免疫组化的结果显示，SAC提取物能够在一定程度上改善睾丸病理形态和糖尿病所引起的氧化应激损伤；除此之外，SAC提取物能显著抑制糖尿病所导的Nox4mRNA和蛋白的异常表达。由此可知，SAC提取物通过抑制Nox4和氧化应激反应，以发挥对糖尿病所致睾丸损伤的保护作用。

关键词：沙苑子提取物糖尿病 Nox4 睾丸损伤氧化应激

基于网络药理学和实验验证探讨雷公藤多苷致睾丸损伤的机制

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现代药物与临床 2024年第8期39卷 1978-1987页

作者：赵丽贾姝吴静怡邵静萍姚晓敏浙江万里学院浙江药科职业大学

目的应用网络药理学方法对雷公藤多苷引起睾丸损伤机制进行研究，探讨潜在靶点和作用机制，并进行动物实验验证，为后续该药物的合理使用提供新的研究策略。方法依托文献查询和TCMSP、GeneCards、OMIM、Metascape数据库挖掘雷公藤多... 详细信息

目的应用网络药理学方法对雷公藤多苷引起睾丸损伤机制进行研究，探讨潜在靶点和作用机制，并进行动物实验验证，为后续该药物的合理使用提供新的研究策略。方法依托文献查询和TCMSP、GeneCards、OMIM、Metascape数据库挖掘雷公藤多苷中有效成分信息，挑选主要药物活性成分及与睾丸损伤相关性靶点，构建蛋白相互作用（PPI）网络。使用Metascape数据库对核心靶点进行基因本体（GO）基因注释及京都基因与基因百科全书（KEGG）通路富集分析，并进行分子对接和动物实验验证。结果共筛选出雷公藤多苷18个活性成分，其中雷酚萜醇、苯代南蛇碱、雷公藤对醌A等为主要活性成分；雌激素受体1(ESR1)、表皮生长因子受体（EGFR）等为核心靶点；KEGG富集分析雷公藤多苷活性成分作用于睾丸损伤的通路主要涉及癌症信号通路、cAMP信号通路、Ras信号通路等；网络药理学与分子对接结果分析显示呋喃南蛇碱与蛋白激酶B1(Akt1)结合良好，雷公藤对醌A与肿瘤坏死因子（TNF）结合良好，苯代南蛇碱与ESR1结合良好；动物实验中雷公藤多苷组ESR1、EGFR m RNA表达水平显著升高（P睾丸损伤的机制可能与核心靶点ESR1、EGFR等密切相关。

关键词：雷公藤多苷睾丸损伤网络药理学雷酚萜醇苯代南蛇碱雷公藤对醌A

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糖尿病大鼠睾丸损伤疾病模型的建立和评价

中国临床药理学杂志 2022年第19期38卷 2347-2350页

作者：邵梦丽孙泽陈思敏胡颖俊郑红星祁珊珊陕西理工大学生物科学与工程学院陕西汉中723000

目的研究实验性糖尿病SD大鼠睾丸损伤模型建立的方法,并对其有效性进行评估。方法将8周龄SD大鼠随机分为正常组和模型组,每组10只。正常组给予等量柠檬酸缓冲液处理,模型组给予一次性空腹腹腔注射45 mg·kg^(-1)链脲佐菌素。7周后,比较... 详细信息

目的研究实验性糖尿病SD大鼠睾丸损伤模型建立的方法,并对其有效性进行评估。方法将8周龄SD大鼠随机分为正常组和模型组,每组10只。正常组给予等量柠檬酸缓冲液处理,模型组给予一次性空腹腹腔注射45 mg·kg^(-1)链脲佐菌素。7周后,比较随机血糖、睾丸指数、抗氧化因子水平、睾丸组织损伤的变化。结果模型组和正常组的随机血糖分别为(25.60±3.34)和(5.30±0.62)mmol·L^(-1),超氧化物歧化酶分别为(25.56±3.38)和(69.00±5.86)U·mL^(-1),谷胱甘肽分别为(8.56±6.10)和(11.56±3.92)mmol·L^(-1),过氧化氢酶分别为(35.89±3.78)和(43.20±2.13)U·mL^(-1),丙二醛分别为(13.93±3.81)和(11.34±1.30)nmol·mL^(-1)。模型组的上述指标与正常组比较,差异均有统计学意义(均P睾丸功能紊乱及糖尿病睾丸损伤典型病理改变,成功建立糖尿病大鼠睾丸损伤模型。

关键词：糖尿病睾丸损伤动物模型睾丸结构

神经肽PACAP27抑制线粒体依赖性细胞凋亡途径对环磷酰胺所致大鼠睾丸损伤的改善作用

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吉林大学学报（医学版） 2022年第5期48卷 1266-1275页

作者：廖源王开举李浩僡陈惠萍李选逸黄勇海南医学院第二附属医院生殖科海南海口570311

目的:探讨垂体腺苷酸环化酶激活多肽(PACAP) 27对环磷酰胺所致大鼠睾丸损伤的作用,阐明其可能机制。方法:60只SD大鼠随机分为对照组、模型组、PACAP27组和左卡尼汀组,每组15只;除对照组外,其余各组大鼠采用环磷酰胺造模并给药。给药结... 详细信息

目的:探讨垂体腺苷酸环化酶激活多肽(PACAP) 27对环磷酰胺所致大鼠睾丸损伤的作用,阐明其可能机制。方法:60只SD大鼠随机分为对照组、模型组、PACAP27组和左卡尼汀组,每组15只;除对照组外,其余各组大鼠采用环磷酰胺造模并给药。给药结束后第3天,称量大鼠体质量和睾丸质量,计算睾丸指数;采用放射免疫法检测各组大鼠血清中促卵泡激素(FSH)、黄体生成素(LH)和睾酮(T)水平,HE染色观察各组大鼠睾丸组织病理形态表现,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组大鼠睾丸组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)水平,TUNEL染色检测各组大鼠睾丸组织细胞凋亡率,Western blotting法检测各组大鼠睾丸组织中线粒体凋亡途径相关蛋白表达水平;提取睾丸组织线粒体,采用线粒体分离试剂检测各组大鼠睾丸组织中线粒体膜通透性转换孔(mPTP)开放程度,JC-1荧光染色检测各组大鼠睾丸组织线粒体膜电位。结果:与对照组比较,模型组大鼠体质量、睾丸质量和睾丸指数均降低(P睾丸组织中SOD和CAT活性降低(P睾丸组织发生明显病理损伤,细胞凋亡率升高(P睾丸组织中细胞色素C(Cyt C)、B细胞淋巴瘤2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (caspase-3)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9 (caspase-9)蛋白表达水平升高(P睾丸质量和睾丸指数均升高(P睾丸组织中SOD和CAT活性升高(P睾丸组织病理损伤得到改善,细胞凋亡率降低(P睾丸组织中Cyt C、Bax、caspase-3和caspase-9蛋白表达水平降低(P睾丸损伤。

关键词：睾丸损伤环磷酰胺垂体腺苷酸环化酶激活多肽27 线粒体依赖性凋亡途径

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基于氧化及Caspase-3凋亡探讨益肾种子方防治大鼠睾丸损伤机制研究

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中国中西医结合杂志 2023年第9期43卷 1095-1099页

作者：韩强曾银王任远刘殿池王和天首都医科大学附属北京中医医院男科北京100010

目的探讨益肾种子方通过抗氧化及其诱导的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3凋亡途径防治奥硝唑所致的大鼠睾丸损伤的作用机制。方法将30只雄性SD大鼠随机分为5组,空白组、模型组、益肾种子方低、中、高剂量组,每组6只。除... 详细信息

目的探讨益肾种子方通过抗氧化及其诱导的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3凋亡途径防治奥硝唑所致的大鼠睾丸损伤的作用机制。方法将30只雄性SD大鼠随机分为5组,空白组、模型组、益肾种子方低、中、高剂量组,每组6只。除空白组外,均采用奥硝唑800 mg/(kg·d)灌胃制造睾丸损伤模型。中药组在造模的同时,分别予益肾种子方低、中、高剂量灌胃[3.37、6.93、13.86 g/(kg·d),每天1次],连续灌胃28天。干预后取材HE染色观察睾丸及附睾结构变化、测量睾丸组织中活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)含量;免疫组织化学染色分析睾丸组织Caspase-3表达。结果与空白组比较,模型组睾丸组织生精细胞不同程度损伤、减少,附睾组织有不同程度破坏和精子的减少,睾丸组织中ROS、MDA含量升高,SOD、CAT含量降低(P睾丸生精细胞完整性有所恢复,Caspase-3明显减少;益肾种子方中剂量组ROS、MDA含量降低(P睾丸及附睾损伤,其机制可能与调控氧化应激系统中ROS、MDA、SOD、CAT等含量,以及氧化应激诱导的Caspase-3凋亡途径有关。

关键词：益肾种子方睾丸损伤抗氧化 Caspase-3凋亡途径男性不育症

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STING介导AMPK/mTOR/P70S6K自噬通路在氟氯氰菊酯诱导睾丸损伤中的作用及机制研究

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STING介导AMPK/mTOR/P70S6K自噬通路在氟氯氰菊酯诱导睾丸损伤中...

作者：马利亚宁夏医科大学

学位级别：硕士

背景:氟氯氰菊酯(Cyfluthrin,Cy)作为低毒高效类农药被广泛的应用于卫生害虫防治领域。有研究表明氟氯氰菊酯是引起睾丸损伤的主要因素之一。睾丸损伤可以导致不育,而不育症近几年已经成为全球性的医学和社会问题。大量研究表明,氧化应... 详细信息

背景:氟氯氰菊酯(Cyfluthrin,Cy)作为低毒高效类农药被广泛的应用于卫生害虫防治领域。有研究表明氟氯氰菊酯是引起睾丸损伤的主要因素之一。睾丸损伤可以导致不育,而不育症近几年已经成为全球性的医学和社会问题。大量研究表明,氧化应激、细胞炎症与细胞自噬反应在睾丸损伤的发生发展过程中起着重要的作用。有研究发现,在睾丸损伤发生过程中,睾丸内氧化应激水平升高,炎症反应增加,细胞保护性自噬,AMPK/mTOR/P70S6K自噬通路被激活。同时STING基因与睾丸损伤的发生关系密切。本研究拟通过建立氟氯氰菊酯染毒动物和细胞模型,针对STING参与调控自噬的模式出发,以炎症反应为线索,阐明STING参与调控氟氯氰菊酯致睾丸损伤的作用机制,为农药的防控和救治奠定理论基础。因此寻找氟氯氰菊酯诱导睾丸损伤过程中STING基因发挥的作用,将为后续氟氯氰菊酯诱导的睾丸损伤的研究提供新的思路。研究目的:探究氟氯氰菊酯对睾丸损伤的影响,探索STING基因在氟氯氰菊酯诱导睾丸损伤中的作用及其机制,为农药的防控和救治奠定理论基础。研究方法:1.建立氟氯氰菊酯染毒动物睾丸损伤模型和GC-2细胞损伤模型1.1氟氯氰菊酯染毒后大鼠睾丸损伤变化40只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为4组,即溶剂对照组、低剂量染毒组、中等剂量染毒组、高剂量染毒组,每组10只。通过HE染色观察大鼠睾丸组织形态变化;透射电镜观察睾丸细胞超微结构变化;采用试剂盒测定睾丸组织匀浆中乳酸脱氢酶(LDH)含量的变化。1.2氟氯氰菊酯染毒后GC-2细胞损伤变化用CCK8法确定染毒浓度;通过光镜观察氟氯氰菊酯染毒细胞的形态变化;采用LDH试剂盒评价氟氯氰菊酯染毒细胞后LDH的变化;划痕实验检测氟氯氰菊酯染毒细胞后的迁移能力。1.3氟氯氰菊酯诱导睾丸损伤过程中氧化应激水平变化利用活性氧试剂盒观察氟氯氰菊酯染毒GC-2细胞后ROS的表达水平;采用SOD和MDA试剂盒检测SOD及MDA表达水平分别在氟氯氰菊酯染毒动物和细胞模型中的变化。1.4氟氯氰菊酯诱导睾丸损伤过程中细胞炎症、自噬与自噬通路变化采用Western blot和qPCR检测炎症相关因子STING、IL-6及TNF-α,自噬相关因子 p62 及 LC3,自噬通路相关因子 AMPK、p-AMPK、mTOR、p-mTOR、P70S6K 及p-P70S6K在氟氯氰菊酯染毒动物和细胞模型中mRNA和蛋白表达水平变化。***基因在氟氯氰菊酯诱导睾丸损伤中的作用及机制通过慢病毒转染构建干扰STING基因的GC-2细胞睾丸损伤模型。通过WB和qPCR检测STING低表达模型中炎症相关因子IL-6、TNF-α,自噬相关因子p62、LC3和自噬通路相关因子 AMPK、p-AMPK、mTOR、p-mTOR、P70S6K 及 p-P70S6K 在 mRNA 和蛋白表达水平变化,明确STING基因在氟氯氰菊酯诱导睾丸损伤中作用的分子机制。研究结果:***染色结果显示:与对照组相比,随着染毒剂量的增加,睾丸组织生精小管结构破坏越严重,生精小管管腔内精子有不同程度的减少;透射电镜结果显示:与对照组相比,染毒组氟氯氰菊酯(Cy)剂量越高精子细胞内线粒体肿胀越严重;与对照组相比,中、高剂量染毒组LDH含量增加,差异具有显著性(P睾丸组织损伤。2.光镜结果显示:与对照组相比,随着氟氯氰菊酯剂量的增加,GC-2细胞损伤逐渐加重并且细胞活性逐渐降低;GC-2细胞中LDH含量随着氟氯氰菊酯染毒剂量的增加逐渐增加,差异具有显著性(P损伤。3.与对照组相比,低、中、高剂量染毒组MDA含量逐渐升高,差异具有显著性(P睾丸发生氧化损伤。4.氟氯氰菊酯染毒后,睾丸内S ITNG及炎症相关因子IL-6和TNF-α的表达上调,炎症水平增加;自噬相关因子LC3表达上调,p62表达下降,睾丸内自噬水平升高;自噬通路相关因子AMPK表达下降,mTOR及P70S6K的表达上调,磷酸化水平与之相反。STING基因可能调控AMPK介导的自噬信号通路。5.在S TING基因低表达细胞模型中,炎症相关因子IL-6和TNF-α的表达下降,炎症

关键词：氟氯氰菊酯 STING 睾丸损伤 AMPK mTOR P70S6K

TLR4基因敲除减轻氯化镉诱导的小鼠睾丸损伤及相关机制研究

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TLR4基因敲除减轻氯化镉诱导的小鼠睾丸损伤及相关机制研究

作者：陈滢南昌大学

学位级别：硕士

目的:探索TLR4基因敲除减轻氯化镉诱导的小鼠睾丸损伤的影响及机制。方法:1、实验动物及分组将8-10周龄大的雄性TLR4基因敲除(TLR4 knockout,TLR4,C57BL/10Sc N)和野生型小鼠(Wild Type,WT,C57BL/10Sc N),分为4组:野生型小鼠组(WT组);... 详细信息

目的:探索TLR4基因敲除减轻氯化镉诱导的小鼠睾丸损伤的影响及机制。方法:1、实验动物及分组将8-10周龄大的雄性TLR4基因敲除(TLR4 knockout,TLR4,C57BL/10Sc N)和野生型小鼠(Wild Type,WT,C57BL/10Sc N),分为4组:野生型小鼠组(WT组);野生型小鼠+氯化镉组(WT+Cd Cl组);TLR4基因敲除组(TLR4组);TLR4基因敲除小鼠+氯化镉组(TLR4+Cd Cl组),每组8只。2、建立氯化镉暴露模型每只小鼠按体重计算,给予8mg/kg/次的氯化镉溶液,每天一次,连续给药15天,期间记录小鼠的体重。第16天时,停止给药。3、取材小鼠建模第18天时,解剖小鼠,称量小鼠脏器,计算脏器系数。4、精子质量评估利用计算机辅助精子分析系统观察、记录精子的运动状态,存活率以及畸形率。5、苏木精-伊红染色睾丸组织的石蜡切片于烘箱中熔蜡后进行脱蜡和水化处理,苏木精染细胞核,0.5%的盐酸酒精分化,中和碱溶液返蓝,再行0.5%的水溶性伊红染胞质,而后梯度酒精脱水,二甲苯透明后使用中性树胶封片。6、免疫组化石蜡切片于二甲苯中脱蜡,梯度乙醇脱水,双蒸水、PBS轻轻浸洗。抗原热修复,3%过氧化氢封闭,双蒸水、PBS浸洗。滴加一抗,于4℃环境中放置过夜。次日,室温孵育后PBS浸洗3次。滴加二抗置于37℃环境中,孵育1h。PBS漂洗。滴加DAB显色液后,镜下观察组织,随后于苏木精溶液中染色2 min,盐酸酒精分化。梯度乙醇、二甲苯后,中性树胶封片。7、免疫荧光石蜡切片于烘箱中65℃烘烤2h,室温冷却后,置于二甲苯及梯度乙醇脱水,双蒸水,PBS轻轻漂洗。柠檬酸盐溶液中抗原热修复,双蒸水,PBS浸洗。3%过氧化氢封闭,双蒸水,PBS浸洗。滴加一抗,4℃过夜。次日,室温孵育2h,PBS摇床浸洗3min,3次。滴加荧光二抗37℃,孵育1h,全程避光.PBS浸洗。含DAPI的抗荧光淬灭剂封片。激光共聚焦显微镜下拍照。8、TUNEL室温下二甲苯中脱蜡,梯度乙醇脱水,PBS轻轻浸洗后,参考试剂盒说明进行实验。避光环境中,用含DAPI的抗荧光淬灭封片剂封片,最后在共聚焦下拍照分析。9、实时荧光定量PCR设计并合成引物,提取组织总RNA后逆转录合成c DNA,按q PCR试剂盒检测m RNA相对水平。10、小鼠血清睾酮ELISA检测将小鼠的血清按elisa试剂盒说明,检测血清睾酮。11、Western Blot检测各组睾丸组织蛋白中TICAM蛋白的相对表达水平。12、统计学分析IBM SPSS 26处理数据,两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析(ANOVA)进行。体重变化使用重复测量方差分析进行。P0.05为差异无显著性。结果:1、各组间小鼠体重及脏器系数的变化,内脏器官重量与体重比值分析表明,氯化镉导致WT+Cd Cl组脾脏系数显著增大。与比值为0.003±0.0003的WT对照组相比,WT+Cd Cl组的脾脏重与体重的比值为0.0056±0.0008,WT+Cd Cl组的脾脏系数显著增大(P睾丸系数方面,四组间无显著性差异。2、精子质量评估发现,与WT对照组比较,WT+Cd Cl组的小鼠精子质量显著下降,精子活力(P<0.01)、存活率大幅降低(P<0.001),精子畸形率上升(P<0.001),TLR4+Cd Cl组的精子形态正常,精子活力、存活率、畸形率均无明显变化。3、ELISA检测血清睾酮发现,与WT对照组相比,Cd Cl导致小鼠血清睾酮显著降低(P<0.001),TLR4+Cd Cl组有轻微降低,但无显著性差异。4、苏木素-伊红染色结果与WT组相比,WT+Cd Cl组,生精小管间间隙增大,生精小管管径变大,生精细胞数量减少。TLR4+Cd Cl组生精小管排列正常,与WT组无明显变化。5、免疫荧光及免疫组化结果结果分析,与WT组比较,S100A8、S100A9、TICAM,IRF3,PTGS2,IL-1β,WT+Cd Cl组表达显著升高。TLR4+Cd Cl组无显著变化。6、TUNEL TUNEL结果分析,WT+Cd Cl组与WT对照组比较,TUNEL阳性细胞数明显增加,且有差异具有显著性(P<0.001)。TLR4+Cd Cl组与WT对照组比较,TUNEL阳性细胞数明显增加,且有差异具有显著性(P<0.01),但与WT+Cd

关键词：氯化镉睾丸损伤 TLR4 炎症 TRIF

铁死亡在TDCIPP诱导青春期雄性小鼠睾丸损伤中的作用研究

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铁死亡在TDCIPP诱导青春期雄性小鼠睾丸损伤中的作用研究

作者：熊传真武汉科技大学

学位级别：硕士

磷酸三(1,3-二氯-2-丙基)酯(Tri(1,3-dichloro-2-propyl)phosphate,TDCIPP)是一种新型的环境内分泌干扰物。随着溴代阻燃剂在全世界范围内的禁止使用,TDCIPP因其良好的阻燃效果以及低烟、低卤等特点,迅速成为了溴代阻燃剂的替换产品。... 详细信息

磷酸三(1,3-二氯-2-丙基)酯(Tri(1,3-dichloro-2-propyl)phosphate,TDCIPP)是一种新型的环境内分泌干扰物。随着溴代阻燃剂在全世界范围内的禁止使用,TDCIPP因其良好的阻燃效果以及低烟、低卤等特点,迅速成为了溴代阻燃剂的替换产品。研究发现,TDCIPP能通过多种机制发挥致癌性、神经毒性和生殖毒性。但是,TDCIPP对雄性生殖系统造成损伤的具体机制目前尚未阐明。铁死亡作为一种新型的死亡方式,已被证实和雄性生殖损伤之间存在相关性。本研究使用动物模型和体外细胞模型,重点探讨TDCIPP对青春期雄性小鼠的生殖损伤作用,以及铁死亡在这一致损伤过程中的作用。第一部分铁死亡参与TDCIPP所致的雄性青春期小鼠睾丸损伤目的:探究铁死亡在TDCIPP致雄性小鼠睾丸损伤中的作用。方法:选取30只健康三周龄雄性C57BL/6小鼠,体重13±2 g,适应性饲养一周后,根据随机数字表分为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组、铁死亡抑制剂组,每组6只;低、中、高剂量组小鼠分别采用5 mg/(kg·d)、25 mg/(kg·d)、125 mg/(kg·d)TDCIPP连续灌胃染毒28天,对照组采用等量玉米油灌胃处理28天,每天记录体重;铁死亡抑制剂组采用125 mg/(kg·d)TDCIPP连续灌胃28天,并且每周采用30 mg/kg甲磺酸去铁胺(Deferoxamine Mesylate,DFO)生理盐水溶液进行腹腔注射3次。处理结束后,处死小鼠,分离小鼠附睾,进行精子计数;H&E染色观察精子形态,计算精子畸形率;收集小鼠睾丸,计算小鼠睾丸脏器系数;采用H&E染色观察小鼠睾丸组织形态学变化,组织铁检测试剂盒检测睾丸组织中铁离子含量;采用活性氧(ROS)试剂盒检测睾丸组织中活性氧水平,组织丙二醛(MDA)检测试剂盒检测小鼠睾丸组织中MDA含量,增强型线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测小鼠睾丸细胞线粒体膜电位水平;Western blot检测睾丸组织内铁死亡相关蛋白GPX4、COX2蛋白表达量。结果:与对照组相比,高剂量组小鼠的体重从21天开始出现显著下降,差异具有统计学意义(P睾丸组织中生精细胞排列紊乱,呈现空泡状结构,附睾中精子数量显著降低,精子畸形率显著升高(P睾丸组织中铁离子含量以及MDA含量显著升高(P睾丸细胞线粒体膜电位显著下降(P睾丸组织内ROS和铁离子含量显著降低(P睾丸组织损伤。第二部分铁死亡在TDCIPP暴露致GC-2 spd细胞毒损伤中的作用研究目的:探究TDCIPP暴露对GC-2 spd细胞的影响,进一步探究铁死亡在TDCIPP暴露引起GC-2 spd细胞损伤中的作用。方法:CCK-8法检测TDCIPP对GC-2 spd细胞活力的影响,确定染毒剂量。根据CCK-8的结果,采用不同浓度的TDCIPP处理GC-2 spd细胞,用Liperfluo荧光探针检测GC-2 spd细胞内脂质活性氧水平,采用细胞铁检测试剂盒检测GC-2 spd细胞中铁离子含量;采用活性氧试剂盒检测GC-2 spd细胞中活性氧水平,细胞丙二醛(MDA)检测试剂盒检测GC-2 spd细胞中MDA含量;Western blot检测GC-2 spd细胞中铁死亡相关蛋白HO-1、GPX4、COX2蛋白以及铁自噬相关蛋白NCOA4、ATG5、LC3的表达量。结果:CCK-8结果显示,与对照组相比,TDCIPP暴露导致细胞的存活率显著下降(P<0.05),经计算确定,细胞的IC为77.00μM[95%CI 72.66,81.52],后续实验采用0、15、30、60μM作为的染毒浓度。与对照组相比,30、60μM TDCIPP染毒组细胞中脂质活性氧水平显著升高,细胞中铁离子相对含量、MDA含量以及ROS相对含量显著高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测GC-2 spd细胞中铁死亡相关蛋白的含量发现,与对照组相比,30、60μM TDCIPP染毒导致细胞内GPX4蛋白表达量显著下降,HO-1、COX2蛋白表达量显著上升,差异具有统计学意义(P<0.05)。此外,与对照组相比,30、60μM TDCIPP染毒导致细胞内NCOA4以及ATG5蛋白表达量显著上升,差异具有统计学意义(P<0.01);15、30、60μM TDCIPP染毒导致细胞

关键词：磷酸三(1,3-二氯-2-丙基)酯睾丸损伤铁死亡铁自噬

金匮肾气丸对环磷酰胺所致睾丸损伤小鼠睾丸组织Nrf2信号通路基因表达的影响

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中华男科学杂志 2020年第2期26卷 160-166页

作者：蒋平徐青洪陈存武夏伦斌黄仁术佘德勇刘港晏航钟枝梅鲍丽莉左瑞华皖西学院生物制药工程学院安徽六安237012 安徽省中药资源保护与持续利用工程实验室安徽六安237012

目的:探究金匮肾气丸对环磷酰胺致小鼠睾丸损伤保护作用及其抗氧化机制. 方法:将30只雄性小鼠均分为空白组、模型组和金匮肾气丸治疗组.治疗组小鼠给予1.2 g/kg体重剂量的金匮肾气丸进行灌胃,空白组和模型组小鼠给予相同体积的生理盐水... 详细信息

目的:探究金匮肾气丸对环磷酰胺致小鼠睾丸损伤保护作用及其抗氧化机制. 方法:将30只雄性小鼠均分为空白组、模型组和金匮肾气丸治疗组.治疗组小鼠给予1.2 g/kg体重剂量的金匮肾气丸进行灌胃,空白组和模型组小鼠给予相同体积的生理盐水灌胃,每天1次;在治疗的第7天,模型组和治疗组小鼠给予50 mg/kg体重剂量环磷酰胺进行腹腔注射,每周1次,连续用药35 d.实验结束后对所有小鼠称重(体重和睾丸重量)并采集血液进行睾酮含量检测,取附睾头用于精子质量检测,取睾丸进行组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA),病理组织学及核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路相关基因PCR检测. 结果:实验结束时,模型组小鼠体重[(34.63±1.92) gvs (48.32±1.64)g]、睾丸质量[(80.0±3.9) mg vs (140.0±6.1) mg]、睾丸脏器系数[(0.22±0.01)% vs(0.31±0.03)%]、精子活率[(48.66 ±8.08)% vs (89.33±4.04)%]、精子浓度[(28.42±5.26)×10^6/m1 vs(77.67±8.73)×10^6/ml]、SOD[(140.82±10.08) U/mg prot vs(358.52 ±40.41) U/mg prot]和血清睾酮[(8.75±0.96) pg/ml vs(21.75 ±1.71) pg/ml]水平较空白组显著降低(P睾丸质量[(130.00±11.00) mgvs (80.00±3.90) mg]、睾丸脏器系数[(0.28±0.01)%vs(0.22±0.01)%]、精子活率[(76.00±5.29)%vs(48.66±8.08)%]、精子浓度[(56.08±4.29)×10^6/ml vs (28.42 ±5.26)×10^6/ml]、SOD[(206.59±16.38) U/mg prot vs(140.82±10.08) U/mg prot]和血清睾酮[(15.50±1.29) pg/ml vs (8.75±0.96) pg/ml]水平较模型组显著升高(P睾丸损伤,其机制可能与金匮肾气丸能调控Nrf2信号通路基因表达,增强抗氧化酶的活性有关.

关键词：金匮肾气丸环磷酰胺睾丸损伤核因子E2相关因子2 小鼠