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睫状神经营养因子和丹参注射液体外诱导肌源性干细胞向神经元样细胞的分化

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中国组织工程研究与临床康复 2009年第27期13卷 5336-5340页

作者：曾祥一王伟孙亮张力曾令达辽宁医学院附属第二医院骨科辽宁省锦州市121000 锦州市中心医院辽宁省锦州市121000

背景:在干细胞异体移植时神经细胞的低存活率成为异体细胞移植失败的主要诱因。核因子κB是细胞信号传导的主要转录因子之一,参与细胞的增殖和分化过程。目的:观察睫状神经营养因子和丹参注射液联合诱导肌源性干细胞向神经元样细胞的分... 详细信息

背景:在干细胞异体移植时神经细胞的低存活率成为异体细胞移植失败的主要诱因。核因子κB是细胞信号传导的主要转录因子之一,参与细胞的增殖和分化过程。目的:观察睫状神经营养因子和丹参注射液联合诱导肌源性干细胞向神经元样细胞的分化情况,以及分化过程中核因子κB的表达。设计、时间及地点:细胞学基因水平实验,于2008-03/05在辽宁医学院附属第二医院口腔科学实验室完成。材料:新生7d龄SD乳鼠10只,由辽宁医学院实验动物中心提供。睫状神经营养因子为Sigma公司产品,丹参注射液购自正大青春宝药业有限公司。方法:体外分离培养鼠肌源性干细胞,差速贴壁法和酶消化法纯化后接种于6孔板内,诱导组用含睫状神经营养因子的DMEM预诱导24h,更换培养液,洗涤3次,再加入含丹参注射液的无血清DMEM诱导5h;对照组使用无血清DMEM培养基处理。主要观察指标:RT-PCR及Western　blotting法检测神经丝蛋白、核因子κB抑制蛋白的表达。结果:诱导前肌源性干细胞未见神经丝蛋白表达,诱导后的神经元样细胞神经丝蛋白呈阳性表达。凝胶电泳及Western　blot检测结果显示,与诱导前比较,诱导后对照组核因子κB抑制蛋白的表达无明显变化,诱导组核因子κB抑制蛋白的表达明显下降。结论:睫状神经营养因子和丹参注射液可联合诱导肌源性干细胞分化为神经元样细胞,分化过程中核因子κB的活化被抑制。

关键词：肌源性干细胞神经元睫状神经营养因子丹参注射液核因子κB

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睫状神经营养因子在脊髓损伤中的研究进展

解剖学杂志 2008年第4期31卷 596-598页

作者：职玉珠王强利徐维蓉蔡伦路上海中医药大学组织学与胚胎学教研室上海201203

脊髓损伤（spinalcordinjury，SCI）的修复是神经科学领域研究的热点问题。“神经营养因子理论”认为，神经营养因子能促进神经元的存活、分化和修复。睫状神经营养因子（ciliaryneurotrophicfactor，CNTF）是目前研究比较多的营养因子... 详细信息

脊髓损伤（spinalcordinjury，SCI）的修复是神经科学领域研究的热点问题。“神经营养因子理论”认为，神经营养因子能促进神经元的存活、分化和修复。睫状神经营养因子（ciliaryneurotrophicfactor，CNTF）是目前研究比较多的营养因子之一。它不仅对体内外多种神经元包括感觉、运动、交感、副交感神经元及神经胶质细胞的存活具有促进作用.

关键词：睫状神经营养因子脊髓损伤副交感神经元神经胶质细胞神经科学体内外修复存活

睫状神经营养因子对坐骨神经切断吻合后大鼠脊髓前角胶质纤维酸性蛋白表达的影响

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中国组织工程研究与临床康复 2010年第41期14卷 7671-7674页

作者：伊红丽张冬艳孙鸿安华北煤炭医学院附属医院神经内科河北省唐山市063000 秦皇岛市第一医院康复中心河北省秦皇岛市066000

背景:睫状神经营养因子具有多种生物活性,在神经系统发育、分化和损伤修复中具有重要意义。目的:观察睫状神经营养因子对坐骨神经切断吻合后大鼠相应脊髓节段前角星形胶质细胞的特异标记物胶质纤维酸性蛋白表达的影响。方法:将SD大鼠随... 详细信息

背景:睫状神经营养因子具有多种生物活性,在神经系统发育、分化和损伤修复中具有重要意义。目的:观察睫状神经营养因子对坐骨神经切断吻合后大鼠相应脊髓节段前角星形胶质细胞的特异标记物胶质纤维酸性蛋白表达的影响。方法:将SD大鼠随机分为对照组、模型组、生理盐水组及药物组。除对照组外,对所有大鼠实施双侧坐骨神经切断吻合术,药物组手术区局部注射睫状神经营养因子100ng/kg,1次/d,生理盐水组局部注射等量生理盐水。术后1,3,7,14,21,28d取相应脊髓节段,免疫组织化学染色观察胶质纤维酸性蛋白的表达,苏木精-伊红染色、TUNEL染色对脊髓前角神经元进行计数。结果与结论:大鼠坐骨神经切断吻合后相应脊髓节段星形胶质细胞胞体大,突起分枝多且粗大,神经元数目逐渐减少,凋亡神经元增多,胶质纤维酸性蛋白表达增高。与模型组和生理盐水组比较,药物组神经元存活数目增多,凋亡减少,胶质纤维酸性蛋白表达明显增加(P睫状神经营养因子可以通过促进大鼠脊髓前角胶质纤维酸性蛋白的表达起到神经保护作用。

关键词：胶质纤维酸性蛋白睫状神经营养因子星形胶质细胞神经元凋亡周围神经损伤

睫状神经营养因子对体外培养星形胶质细胞的激活作用(英文)

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Neuroscience Bulletin 2006年第6期22卷 315-322页

作者：吴艳刘仁刚周洁萍华中科技大学同济医学院解剖教研室

目的观察睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor, CNTF)对体外培养星形胶质细胞的细胞激活作用。方法分别给予不同浓度(0、2、20、200 ng/ml)的CNTF孵育有血清培养和无血清培养的星形胶质细胞,采用免疫细胞化学技术及流式细胞术... 详细信息

目的观察睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor, CNTF)对体外培养星形胶质细胞的细胞激活作用。方法分别给予不同浓度(0、2、20、200 ng/ml)的CNTF孵育有血清培养和无血清培养的星形胶质细胞,采用免疫细胞化学技术及流式细胞术,观察星形胶质细胞形态及细胞周期的变化。结果有血清培养和无血清培养时CNTF均使星形胶质细胞GFAP表达增强,胞核增大。有血清培养时CNTF还可以促进星形胶质细胞进入细胞周期进行增殖;无血清培养时CNTF无此效应。结论无血清培养时CNTF可以刺激星形胶质细胞进入活化状态,但不刺激其增殖;有血清培养时CNTF可以协助血清中的丝裂原引起星形胶质细胞增殖。

关键词：睫状神经营养因子星形胶质细胞活化增殖细胞周期

血清沉默信息调节蛋白4及睫状神经营养因子水平与2型糖尿病视网膜病变的相关性研究

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血清沉默信息调节蛋白4及睫状神经营养因子水平与2型糖尿病视网膜...

作者：张璐大连医科大学

学位级别：硕士

目的本研究旨在分析单纯2型糖尿病患者和合并糖尿病视网膜病变（Diabetic Retinopathy,DR）的2型糖尿病患者血清中沉默信息调节蛋白4（Silencing Regulatory Protein 4,SIRT4）和睫状神经营养因子（Ciliary Neurotrophic Factor,CNTF）... 详细信息

目的本研究旨在分析单纯2型糖尿病患者和合并糖尿病视网膜病变（Diabetic Retinopathy,DR）的2型糖尿病患者血清中沉默信息调节蛋白4（Silencing Regulatory Protein 4,SIRT4）和睫状神经营养因子（Ciliary Neurotrophic Factor,CNTF）水平的差异,探讨SIRT4和CNTF与糖尿病视网膜病变的关系。方法选取2020年12月至2021年11月间,江苏省苏北人民医院内分泌科收治入院的2型糖尿病患者共179例为受试对象,其中合并DR的共81例,纳入实验组（DR组）,未合并DR的共98例,纳入对照组（无DR组）。记录入组患者的年龄、体重、性别、身高、糖尿病病程、收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、空腹C肽、尿素、空腹血糖（FBG）、糖化血红蛋白（Hb A1c）、肌酐（Cr）、尿微量白蛋白（UMA）、胆固醇（CHO）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、体重指数（BMI）、肾小球滤过率（e GFR）等指标,使用酶联免疫吸附法测定2型糖尿病患者血清中SIRT4和CNTF水平。使用SPSS 26.0分析各组患者间SIRT4和CNTF的水平差异,SIRT4和CNTF与DR及其它临床指标的关系。结果（1）两组的身高、体重、性别、年龄、体重指数、BP、空腹C肽、UMA、尿素、TG、CHO、HDL-C和LDL-C未见明显差异,DR组的病程长于无DR组,DR组中FBG、Hb A1c、Cr水平高于无DR组（P＜0.05）。DR组的SIRT4水平高于无DR组（P＜0.05）。DR组的CNTF水平低于无DR组（P＜0.05）。（2）由相关性分析结果可知:SIRT4水平与FBG呈正相关（r=0.194,P=0.009）,与TG呈负相关（r=-0.169,P=0.024）;CNTF水平与糖尿病病程、FBG和Hb A1c水平均呈负相关（r=-0.152,P=0.042;r=-0.160,P=0.033;r=-0.243,P=0.001）。（3）二元逻辑回归分析表明:SIRT4、CNTF、糖尿病病程、FBG、Cr是DR的独立相关因素。（4）SIRT4单独判断DR发生的ROC曲线下面积（Area Under Curve,AUC）为0.740,CNTF单独判断DR发生的AUC为0.793,SIRT4与CNTF联合判断DR发生的AUC为0.884,效果优于SIRT4及CNTF单独判断DR发生。结论（1）DR组SIRT4水平高于无DR组,SIRT4是糖尿病视网膜病变的独立相关因素,SIRT4与DR之间存在一定的相关性,SIRT4对于判断2型糖尿病患者发生DR具有一定价值,可能成为DR的一个早期诊断指标。（2）无DR组CNTF水平高于DR组,CNTF是DR的一个独立的保护因素,对于判断2型糖尿病患者发生DR具有一定价值。

关键词：沉默信息调节蛋白4 睫状神经营养因子 2型糖尿病糖尿病视网膜病变

睫状神经营养因子对新生大鼠培养星形细胞胶质化的影响

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科学通报 2000年第16期45卷 1753-1757页

作者：咸海青范明于顺刘淑红丁爱石米瑞发邱宗荫军事医学科学院基础医学研究所北京100850 重庆医科大学重庆400046

在新生大鼠混合培养胶质细胞机械划伤模型上, 研究了睫状神经营养因子(CNTF)对反应性星形细胞胶质化的影响. 损伤后, 在损伤边缘可见典型的星形细胞胶质化过程, 表现为扁平型星形胶质细胞增生肥大, 其胞内GFAP表达增加, O-2A前体细胞向... 详细信息

在新生大鼠混合培养胶质细胞机械划伤模型上, 研究了睫状神经营养因子(CNTF)对反应性星形细胞胶质化的影响. 损伤后, 在损伤边缘可见典型的星形细胞胶质化过程, 表现为扁平型星形胶质细胞增生肥大, 其胞内GFAP表达增加, O-2A前体细胞向受损区域迁移, 并分化成为突起型星形胶质细胞. 向培养基加入外源性CNTF可促进损伤边缘的扁平型星形胶质细胞的增生及GFAP的表达. 结果提示CNTF可以加强损伤区的星形细胞胶质化.

关键词：睫状神经营养因子星形细胞胶质化神经损伤

睫状神经营养因子对视网膜色素变性RD小鼠治疗作用的研究

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南京医科大学学报（自然科学版） 2006年第5期26卷 310-312,317,F0002页

作者：邱晓荣刘庆淮谢平南京医科大学第一附属医院眼科江苏南京210029

目的:探讨玻璃体腔注射睫状神经营养因子(ciliaryneuyotrophicfactor,CNTF)对视网膜色素变性RD小鼠视网膜形态结构的保护作用。方法:将出生10天(P10)的RD小鼠随机分成3组:CNTF治疗组、伪治疗组和空白对照组,治疗组和伪治疗组的玻璃体腔... 详细信息

目的:探讨玻璃体腔注射睫状神经营养因子(ciliaryneuyotrophicfactor,CNTF)对视网膜色素变性RD小鼠视网膜形态结构的保护作用。方法:将出生10天(P10)的RD小鼠随机分成3组:CNTF治疗组、伪治疗组和空白对照组,治疗组和伪治疗组的玻璃体腔分别注射鼠CNTF和磷酸缓冲液(PBS),分别在出生后14、18、22、30天过量麻醉处死小鼠,光镜测量RD小鼠视网膜外核层厚度并做TUNEL检测。结果:TUNEL检测,RD小鼠视网膜外核层有TUNEL染色阳性细胞分布。光镜下观察显示,出生后第14、18、22、30天RD小鼠CNTF治疗组视网膜外核层厚度显著高于其他两组,差异有显著性(P<0.05)。结论:CNTF玻璃体腔注射延缓了感受器细胞的凋亡,对视网膜色素变性RD小鼠有治疗作用。

关键词：视网膜色索变性小鼠睫状神经营养因子

睫状神经营养因子和神经生长因子促进自体去神经带血管移植肌的神经再生

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中国临床康复 2005年第21期9卷 108-109页

作者：苏刚刘贵麟王德文高亚兵解放军总医院小儿外科北京市100853 解放军军事医学科学院病理室北京市100854

目的:将睫状神经营养因子和神经生长因子应用于去神经带血管移植肌,探讨2种因子在神经再生过程中的作用。方法:实验于2001-03/2002-03在解放军总医院实验动物中心完成。选用54只SD大鼠,随机分为3组,每组18只,分别为睫状神经营养因子组... 详细信息

目的:将睫状神经营养因子和神经生长因子应用于去神经带血管移植肌,探讨2种因子在神经再生过程中的作用。方法:实验于2001-03/2002-03在解放军总医院实验动物中心完成。选用54只SD大鼠,随机分为3组,每组18只,分别为睫状神经营养因子组、神经生长因子组和对照组。①各组在切除腓总神经后,将腓骨长肌远端切断并切除肌膜后植入同侧腓肠肌。从手术当天开始,睫状神经营养因子组每天向移植肌注射睫状神经营养因子0.05μg/每后肢,神经生长因子组注射神经生长因子0.5μg/每后肢,对照组注射生理盐水,共7d。②术后30和60及90d取移植肌,通过乙酰胆碱酯酶染色观察运动终板。③采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法检测移植体肌组织中胶质细胞源性神经生长因子抗体,观察染色强度以反映神经再生情况。④电子显微镜下观察肌细胞形态,核仁、染色质、糖原颗粒、Z线结构及神经纤维及髓鞘情况以反映失神经肌肉受损程度。⑤光学显微镜下观察肌纤维、神经纤维及髓鞘变化以反映失神经肌肉受损程度及神经再生情况。结果:大鼠54只均进入结果分析。①神经生长因子组和睫状神经营养因子组在术后30和60及90d时的肌细胞形态,核仁清晰度,可见染色质丰富程度方面优于同期对照组,并且糖原颗粒多,Z线更清晰。神经再生更明显。②神经生长因子和睫状神经营养因子组有更多的运动终板。③神经生长因子组和睫状神经营养因子组胶质细胞源性神经营养因子抗体染色强度大于对照组。神经生长因子组和睫状神经营养因子组相比,神经生长因子组的促神经再生作用更明显。结论:①神经生长因子和睫状神经营养因子可以促进自体去神经带血管移植肌的神经再生和减轻失神经肌肉的损害。②上述2种因子均可促进移植肌神经再生,神经生长因子作用更强。

关键词：肌/移植去神经支配睫状神经营养因子神经生长因子神经再生

睫状神经营养因子突变体的克隆、表达、纯化及生物学活性

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中国生物制品学杂志 2007年第5期20卷 313-317页

作者：毕华袁力勇史新昌李永红赵阳饶春明王军志中国药品生物制品检定所生化室北京100050

目的设计具有更高生物学活性的睫状神经营养因子突变体,并对其进行表达、纯化及生物学活性检测。方法以计算机分子模拟系统设计突变体,重叠延伸PCR方法获得突变体的编码区DNA序列,克隆入表达载体pThioHisA,转化E.coliBL21,以IPTG诱导表... 详细信息

目的设计具有更高生物学活性的睫状神经营养因子突变体,并对其进行表达、纯化及生物学活性检测。方法以计算机分子模拟系统设计突变体,重叠延伸PCR方法获得突变体的编码区DNA序列,克隆入表达载体pThioHisA,转化E.coliBL21,以IPTG诱导表达。复性纯化后,用鸡胚背根神经节无血清培养法和小鼠减重法进行生物学活性测定。结果目的蛋白以包涵体形式存在,表达量在35%以上,纯化后的纯度达95%以上,能有效地促进鸡胚背根神经节的生长,并能使正常小鼠的体重降低,脂肪指数下降。结论所设计的突变体经表达及纯化后,具有良好的生物学活性,为进一步研究突变体蛋白的促神经生长和减肥作用奠定了基础。

关键词：睫状神经营养因子突变体克隆表达生物学活性