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睫状神经营养因子及神经突起素上调莫洛尼小鼠白血病病毒前病毒插入位点1表达促进受损神经元样细胞突起再生

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解剖学报 2020年第2期51卷 153-161页

作者：李贺刘芳许家军海军军医大学人体解剖学教研室上海200433

目的探讨莫洛尼小鼠白血病病毒前病毒插入位点1(Pim-1)基因在体外受损神经元中的表达变化,以及神经营养因子调节Pim-1表达进而促进受损神经元突起再生的相关分子基础。方法用反式视黄酸将Neuro-2a(N-2a)细胞诱导成为神经元样N-2a(N-2a-N... 详细信息

目的探讨莫洛尼小鼠白血病病毒前病毒插入位点1(Pim-1)基因在体外受损神经元中的表达变化,以及神经营养因子调节Pim-1表达进而促进受损神经元突起再生的相关分子基础。方法用反式视黄酸将Neuro-2a(N-2a)细胞诱导成为神经元样N-2a(N-2a-N)细胞,用去铁胺亚磺酸盐(DFO)抑制N-2a细胞增殖,用丙烯酰胺(ACR)损伤N-2a-N细胞突起。N-2a-N细胞分为正常对照组、损伤组、睫状神经营养因子(CNTF)及神经突起素(Nrn1)组,每组4个样本。免疫荧光细胞化学法检测N-2a-N细胞表型及Pim-1蛋白表达;用Real-time PCR和Western blotting检测Pim-1在各组的表达变化。用Western blotting检测调节Pim-1活性的相关分子,细胞存活、凋亡相关分子及轴突再生相关分子的表达变化。结果细胞免疫荧光显示,N-2a-N细胞表达神经元标志分子βⅢ-微管蛋白(β-Ⅲtubulin)和neurofilament-200,并表达Pim-1。50μmol DFO有效抑制N-2a细胞的增殖。应用1 mmol/L的ACR成功建立N-2a-N细胞突起损伤模型。N-2a-N细胞损伤后,Pim-1基因表达呈现先降低后升高,再降低的趋势。与损伤组相比,CNTF组和Nrn1组最长神经突起所占比例明显增加,细胞内信号转导分子细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)、信号转导及转录激活因子3(STAT3)、磷酸化信号转导及转录激活因子3(p-STAT3)及Pim-1表达上调,凋亡相关分子cleaved Caspase-3及Bax表达下调,抗凋亡相关分子Bcl-2表达上调,神经突起生长相关分子生长相关蛋白43(GAP-43)表达上调。结论修复受损N-2a-N细胞需要过表达Pim-1基因。神经营养因子CNTF、Nrn1可激活受损N-2a-N细胞ERK1/2及STAT3信号通路,进而上调Pim-1及GAP-43表达,并促进细胞突起再生。

关键词：神经元样细胞睫状神经营养因子神经突起素莫洛尼小鼠白血病病毒前病毒插入位点1 实时定量聚合酶链反应

睫状神经营养因子对大鼠脑缺血后髓鞘再生的影响

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神经解剖学杂志 2019年第1期35卷 47-51页

作者：赵忠惠邹正毛崇丹郝广志杨芳宇石佐林艾运政董玉书锦州医科大学北部战区总医院校外基地北部战区总医院神经医学研究所沈阳110016

目的:研究睫状神经营养因子(CTNF)对脑缺血大鼠胼胝体髓鞘再生的影响。方法:48只雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、双侧颈总动脉结扎(2-VO)组和CTNF治疗组(CTNF)。利用2-VO法制备大鼠脑缺血损伤模型,在术后24 h内用0. 4μg/kg的CTNF... 详细信息

目的:研究睫状神经营养因子(CTNF)对脑缺血大鼠胼胝体髓鞘再生的影响。方法:48只雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、双侧颈总动脉结扎(2-VO)组和CTNF治疗组(CTNF)。利用2-VO法制备大鼠脑缺血损伤模型,在术后24 h内用0. 4μg/kg的CTNF或生理盐水分别给予CTNF治疗组、2-VO组和Sham组大鼠尾静脉注射。给药7 d后通过神经缺损功能评分(NSS)和转棒实验(Rota-Rod)检测各组大鼠神经功能,电镜观察胼胝体内髓鞘超微结构的变化,通过免疫荧光染色观察少突胶质细胞转录因子2(Olig-2)的表达,Western Blot检测髓磷脂碱性蛋白(MBP)的表达。结果:与Sham组相比,2-VO组大鼠神经功能显著受损(P 神经功能明显改善(P 神经功能,促进髓鞘再生。

关键词：睫状神经营养因子缺血髓鞘再生 MBP 大鼠

睫状神经营养因子基因修饰的大鼠骨髓间充质干细胞的构建

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中华实验眼科杂志 2014年第5期32卷 392-397页

作者：武晶晶华宁东莉洁李筱荣天津医科大学眼科医院 300384

背景间充质干细胞作为基因转移的载体,已在多种疾病的研究中发挥作用.该方法可能为外源性神经营养因子在中枢神经系统,包括在视网膜中的应用提供更有效的途径. 目的构建慢病毒介导的过表达睫状神经营养因子（CNTF）的骨髓间充质于细胞... 详细信息

背景间充质干细胞作为基因转移的载体,已在多种疾病的研究中发挥作用.该方法可能为外源性神经营养因子在中枢神经系统,包括在视网膜中的应用提供更有效的途径. 目的构建慢病毒介导的过表达睫状神经营养因子（CNTF）的骨髓间充质于细胞（BMSCs）,为眼科视网膜、视神经疾病的治疗提供新的方法.方法对SD大鼠BMSCs进行培养和传代,第4代细胞用于实验.将全基因合成含信号肽的大鼠CNTF基因编码序列克隆至pHⅣ-dTomato慢病毒载体质粒,构建重组质粒CNTF-dTomato.CNTF-dTomato/pHⅣ-dTomato与慢病毒辅助质粒psPAX2及pMD2.G共转染293T细胞进行慢病毒包装,获得重组慢病毒CNTF-lenti及不含CNTF的control-lenti.以CNTF-lenti或control-lenti感染SD大鼠BMSCs,构建CNTF-BMSCs及空载-BMSCs细胞,根据红色荧光蛋白dTomato表达情况确定病毒感染效率;未感染lenti的BMSCs为空白-BMSCs.用ELISA法测定空白-BMSCs、空载-BMSCs及CNTF-BMSCs细胞培养液中CNTF的质量浓度.将CNTF-BMSCs向成骨和成脂2个方向诱导分化,并用茜素红S（ARS）染色和油红O染色对分化细胞进行鉴定.结果 CNTF-dTomato质粒转化大肠杆菌Stbl3感受态细胞后,菌落PCR产物大小约为1 033 bp,质粒测序结果显示,pHⅣ-dTomato质粒中插入部分的碱基序列与预期序列一致,显示CNTF-dTomato质粒构建成功.重组慢病毒对BMSCs的感染率达95％.ELISA检测结果显示,感染后2、3、4、7d,CNTF-BMSCs组细胞上清液中CNTF蛋白的质量浓度明显高于空白-BMSCs组及空载-BMSCs组,差异均有统计学意义（均P=0.000）;CNTF-BMSCs组感染后2、3、7d细胞上清液中CNTF质量浓度均明显高于感染后1d,差异均有统计学意义（P=0.013、0.004、0.042）.CNTF-BMSCs经成脂培养基诱导后分化的细胞油红0染色呈红色着染,经成骨培养基诱导后分化的细胞ARS染色可见橘红色钙结节. 结论本研究成功构建CNTF-dTomato质粒,利用慢病毒载体可成功构建稳定过表达分泌型CNTF的大鼠BMSCs,CNTF-BMSCs具备向脂肪细胞和成骨细胞分化的潜能.

关键词：睫状神经营养因子慢病毒载体骨髓间充质干细胞

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睫状神经营养因子缓释微囊的制备及表征

中国组织工程研究 2014年第34期18卷 5455-5460页

作者：李小丽王明波陈昌盛佘振定深圳清华大学研究院生物医用材料及植入器械重点实验室广东省深圳市518057

背景:睫状神经营养因子眼部给药非常困难且药物生物利用度较低,需要长期连续给药,为解决这一问题,可将其包封在选择性透过膜中形成微囊,利用膜的选择透过性释放囊内的生物活性物质或活体细胞分泌的生物活性分子和小分子代谢产物。目的:... 详细信息

背景:睫状神经营养因子眼部给药非常困难且药物生物利用度较低,需要长期连续给药,为解决这一问题,可将其包封在选择性透过膜中形成微囊,利用膜的选择透过性释放囊内的生物活性物质或活体细胞分泌的生物活性分子和小分子代谢产物。目的:制备具有特殊结构的睫状神经营养因子缓释微囊。方法:将聚醚砜中空纤维膜的一端用医用胶紫外光固化封口,再将睫状神经因子从另一端注入聚醚砜微囊中,并用医用胶紫外光固化封口,制得睫状神经营养因子缓释微囊。将缓释微囊浸提液与小鼠成纤维细胞L929共培养,考察微囊的细胞毒性;将小鼠视网膜色素上皮细胞与缓释微囊共培养,考察细胞在缓释微囊表面的黏附性;将睫状神经营养因子缓释微囊浸泡在生理盐水中考察其降解性;同时考察在聚醚砜中空纤维囊中免疫球蛋白IgG和睫状神经营养因子的体外释放行为。结果与结论:睫状神经营养因子缓释微囊的内径约为398μm,壁厚约为145μm,囊壁的外层由疏松大孔构成,内层呈现许多微小的囊孔,孔径约10 nm,在生理盐水中4个月基本无降解,具有良好的细胞相容性。聚醚砜中空纤维囊对蛋白的释放具有选择透过性,能选择性释放睫状神经因子,有效阻隔球状抗体IgG。同时,缓释微囊改善了以往给药体系的突释行为,睫状神经营养因子只在中间阶段呈现较小程度的突释,然后呈现平稳释放。

关键词：生物材料缓释材料睫状神经营养因子缓释微囊聚醚砜释放曲线

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睫状神经营养因子在神经损伤及修复中的地位

中国组织工程研究与临床康复 2010年第15期14卷 2810-2813页

作者：张玮洪熊彭中娟江西中医学院体育教学部江西省南昌市330004 江西师范大学体育学院江西省南昌市330027 江西中医学院研究生部江西省南昌市330004

背景:睫状神经营养因子广泛分布于神经系统,具有广谱营养作用。目的:综述国内外关于睫状神经营养因子在神经损伤及修复中的地位与应用前景。方法:计算机检索中国期刊全文数据(网址http://***/kns50/index.aspx)及PubMed数据库(网址http:... 详细信息

背景:睫状神经营养因子广泛分布于神经系统,具有广谱营养作用。目的:综述国内外关于睫状神经营养因子在神经损伤及修复中的地位与应用前景。方法:计算机检索中国期刊全文数据(网址http://***/kns50/index.aspx)及PubMed数据库(网址http://www.***.nlm.***.gov/pubmed/)1990-01/2009-06期间相关文章,检索词为"睫状神经营养因子,神经损伤,Ciliary neurotrophic factor,Nerve injure"。纳入与神经损伤与睫状神经营养因子研究现状与发展密切相关的研究,包括神经元损伤后的变化;睫状神经营养因子对神经元的修复机制及保护作用,对修复过程的调控,对神经元轴浆运输功能的恢复,对损伤神经的再生作用。排除重复性研究或Meta分析。结果与结论:睫状神经营养因子广泛分布于神经系统,具有广谱营养作用。神经元内源性睫状神经营养因子主要来源于周围神经许旺细胞、中枢神经胶质细胞以及神经元的自分泌。在神经损伤的修复过程中,睫状神经营养因子通过不同的方式对损伤神经元进行保护和修复。睫状神经营养因子可以通过对几种相关酶的调节而促进神经损伤的恢复,能提高细胞内JAK-STAT途径促进相关蛋白和重要分子的产生,可以促进轴浆运输,使修复加快,睫状神经营养因子还可以通过加强许旺细胞的增殖和变化促进神经的修复。睫状神经营养因子在受损神经元的修复中起着很重要的作用。通过研究探索睫状神经营养因子对神经损伤治疗的作用,有利于开发应用睫状神经营养因子来治疗神经损伤。

关键词：睫状神经营养因子许旺细胞神经损伤修复神经组织工程综述文献

睫状神经营养因子对糖尿病大鼠海马胆碱乙酰转移酶表达及认知功能的影响

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中国老年学杂志 2015年第8期35卷 2157-2159页

作者：黄薇杨巧刘霞张莉夏丽肖谦重庆医科大学附属第一医院老年科重庆400016

目的探讨睫状神经营养因子(CNTF)对糖尿病(DM)大鼠海马胆碱乙酰转移酶(Ch AT)表达及认知功能的影响及机制。方法 50只SD大鼠随机分为正常对照组、DM组、DM+DMSO组、DM+CNTF组和DM+CNTF+AG490组,每组10只。腹腔注射建立链脲佐菌素(STZ)D... 详细信息

目的探讨睫状神经营养因子(CNTF)对糖尿病(DM)大鼠海马胆碱乙酰转移酶(Ch AT)表达及认知功能的影响及机制。方法 50只SD大鼠随机分为正常对照组、DM组、DM+DMSO组、DM+CNTF组和DM+CNTF+AG490组,每组10只。腹腔注射建立链脲佐菌素(STZ)DM大鼠模型,Open-field实验排除抑郁DM大鼠,Morris水迷宫测试大鼠逃避潜伏期和穿越目标区域次数,Western印迹以及免疫组化检测大鼠海马Ch AT蛋白水平,RT-PCR检测Ch AT mRNA水平。结果与正常对照组相比,DM组、DM+DMSO组及DM+CNTF+AG490组逃避潜伏期延长(P<0.05),穿越目标区域次数减少(P<0.05),海马部位Ch AT mRNA和蛋白的表达水平显著下降(P<0.05);与DM组相比,DM组+CNTF组大鼠逃避潜伏期时间及穿越目标区域次数的成绩明显改善(P<0.05),海马部位Ch AT mRNA和蛋白的表达水平明显升高(P<0.05)。结论 CNTF对DM大鼠认知功能有改善作用,其机制可能与通过JAK2/STAT3途径上调Ch AT mRNA和蛋白表达水平有关。

关键词：睫状神经营养因子糖尿病脑病胆碱乙酰转移酶认知功能

睫状神经营养因子对大鼠急性高眼压眼视网膜神经节细胞的保护作用

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中华实验眼科杂志 2012年第5期30卷 433-436页

作者：武劲圆孙丰源唐东润张蕊天津市第一中心医院眼科 300192

背景青光眼可以引起视网膜神经节细胞（RGCs）凋亡，据报道睫状神经营养因子（CNTF）对外伤性视神经损伤有修复作用，其是否对青光眼视神经病变有保护作用尚少见报道。目的观察CNTF对大鼠急性高眼压眼RGCs的保护作用。方法24只Wistar大... 详细信息

背景青光眼可以引起视网膜神经节细胞（RGCs）凋亡，据报道睫状神经营养因子（CNTF）对外伤性视神经损伤有修复作用，其是否对青光眼视神经病变有保护作用尚少见报道。目的观察CNTF对大鼠急性高眼压眼RGCs的保护作用。方法24只Wistar大鼠双眼采用眼前房平衡盐液加压灌注法建立大鼠急性高眼压模型，造模前2d左眼玻璃体内注入0．5DgCNTF5斗l，右眼以同样的方法注射磷酸钠溶液5¨l，另取3只正常大鼠作为正常对照。造模后1、3、7、14d过量麻醉法处死动物并摘除眼球，制备视网膜组织学切片后采用苏木精一伊红染色法进行形态学观察，光学显微镜下计数RGCs数目；采用免疫组织化学染色法观察RGCs层谷氨酸的表达情况。结果正常对照组大鼠视网膜各层排列整齐，细胞边界清晰；模型对照组大鼠RGCs细胞膜、细胞核均发现异常改变，有细胞空泡样变；CNTF治疗组大鼠造模后变性的RGCs数量少。与模型对照组比较，造模后3、7、14dCNTF治疗组RGCs数目明显增加，差异均有统计学意义（均P=0．000）。免疫组织化学染色表明，造模后3～7d，CNTF治疗组RGCs层谷氨酸阳性细胞数分别为（5．50±1．04）个／3个高倍视野和（6．00±1．41）个／3个高倍视野，明显低于模型对照组的（9．00＋2．91）个／3个高倍视野和（10．834-1．94）个／3个高倍视野，差异均有统计学意义（均P=0．000），而造模后1d和14d两组间谷氨酸阳性细胞数的差异均无统计学意义（P=0．578、0．180）。结论CNTF能够下调急性高眼压眼谷氨酸在RGCs中的表达。

关键词：睫状神经营养因子高眼压视网膜神经节细胞谷氨酸

睫状神经营养因子调节受损视神经胶质细胞去分化相关基因的表达

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解剖学报 2011年第3期42卷 289-295页

作者：郭金萍许家军刘芳袁建明第二军医大学解剖学教研室上海200433

目的探讨睫状神经营养因子(CNTF)对受损视神经胶质细胞去分化的作用及机制。方法将65只SD大鼠随机分为对照组、损伤组和CNTF组,制备视神经损伤及损伤后添加CNTF的动物模型。术后7、14 d取术侧视神经损伤远侧段,分别用基因芯片检测其基... 详细信息

目的探讨睫状神经营养因子(CNTF)对受损视神经胶质细胞去分化的作用及机制。方法将65只SD大鼠随机分为对照组、损伤组和CNTF组,制备视神经损伤及损伤后添加CNTF的动物模型。术后7、14 d取术侧视神经损伤远侧段,分别用基因芯片检测其基因表达谱,实时荧光定量PCR、免疫组织化学、HE染色等方法检测相关基因、蛋白表达和细胞数量的变化。结果术后7 d,与损伤组相比,CNTF组筛选出608条表达上调和417条表达下调的差异基因,包括染色质构型、转录调节、神经干细胞、神经分化和发育、增殖凋亡、离子通道、受体、信号转导等相关基因。实时荧光定量PCR结果验证了基因芯片结果的可靠性。CNTF组视神经损伤远侧段细胞数量增多,远侧段Nestin、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、髓鞘碱性蛋白(MBP)、细胞外信号调节激酶1/2(Erk1/2)和近侧段神经丝(NF)阳性物质增多。结论外源性CNTF通过调节受损视神经大胶质细胞的去分化相关基因及蛋白的表达,促进了胶质细胞的去分化和轴突再生。

关键词：视神经损伤睫状神经营养因子神经胶质细胞去分化基因芯片免疫组织化学大鼠

睫状神经营养因子对糖尿病早期大鼠视网膜神经组织的保护作用(英文)

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国际眼科杂志 2012年第11期12卷 2045-2049页

作者：梁紫岩张卯年解放军总医院眼科中国北京市100853

目的:研究睫状神经营养因子(ciliary neurontrophic factor,CNTF)对糖尿病早期大鼠视网膜神经组织的保护作用。方法:选择40只健康成年雄性SD大鼠(250g-280g)一次性腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotin,STZ)60mg/kg诱发糖尿病模型(DM),将DM... 详细信息

目的:研究睫状神经营养因子(ciliary neurontrophic factor,CNTF)对糖尿病早期大鼠视网膜神经组织的保护作用。方法:选择40只健康成年雄性SD大鼠(250g-280g)一次性腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotin,STZ)60mg/kg诱发糖尿病模型(DM),将DM大鼠随机分组为DM+CNTF组和DM+BSS组。DM+CNTF组给予玻璃体腔内注射CNTF(1.0μg/2μL),DM+BSS组注射BSS液(2μL)。分别观测0、4、8、12wk两组大鼠体质量和血糖变化,于4wk和12wk进行原位细胞调亡(TUNEL法)的检测及视网膜神经组织超微结构的观察。结果:DM+CNTF组大鼠的血糖和体质量与DM+BSS组比较无显著性差异(P>0.05)。12wk时TUNEL检测DM+CNTF组大鼠神经节细胞凋亡与DM+BSS组相比减少(P神经组织出现细胞凋亡的改变,经CNTF治疗细胞凋亡改变有所减轻,表现为外节膜盘间隙减小,感光细胞水肿减轻及核染色质浓集减轻等。结论:CNTF对DM+CNTF组和DM+BSS组大鼠的体重及血糖无明显影响。CNTF治疗组结果显示对本实验糖尿病大鼠视网膜神经节细胞及感光细胞有一定保护作用。

关键词：睫状神经营养因子糖尿病视网膜病变神经病变大鼠细胞凋亡