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摘除眼柄与注射眼柄粗提物对凡纳滨对虾性腺发育相关基因表达的影响

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上海海洋大学学报 2016年第3期25卷 344-349页

作者：师尚丽叶满朱春华邓思平陈华谱李广丽广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东海洋大学南海水产经济动物增养殖广东普通高校重点实验室广东湛江524088 广东海洋大学海洋生态与养殖环境湛江市重点实验室广东湛江524088

利用荧光定量PCR技术,检测了眼柄粗提物对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)性腺发育相关基因(DMC1、VASA和VTG)表达的影响,探讨性腺抑制激素(GIH)在性腺发育过程中的调控机制,结果表明:DMC1和VASA只在凡纳滨对虾精巢和卵巢中表达;摘除... 详细信息

利用荧光定量PCR技术,检测了眼柄粗提物对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)性腺发育相关基因(DMC1、VASA和VTG)表达的影响,探讨性腺抑制激素(GIH)在性腺发育过程中的调控机制,结果表明:DMC1和VASA只在凡纳滨对虾精巢和卵巢中表达;摘除眼柄后,精巢和卵巢中DMC1表达量均显著性降低(P眼柄粗提物后精巢和卵巢中DMC1表达显著增高(P眼柄后,精巢和卵巢中VASA以及卵巢中VTG基因表达量显著增高,但注射眼柄粗提物后性腺中的VASA和卵巢中的VTG表达量显著降低。结果表明眼柄粗提物通过影响生殖相关基因的表达影响凡纳滨对虾的性腺发育。

关键词：凡纳滨对虾眼柄 DMC1 VASA VTG

中国对虾Penaeus Chinensis(O'SBECK)肌肉系统的研究 Ⅱ.眼柄及附肢肌肉解剖1

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杭州大学学报（自然科学版） 1994年第3期21卷 330-336页

作者：卢建平陈宽智杭州大学生物科学与技术系青岛海洋大学海洋生物系.

本文描述中国对虾附肢肌肉（第一触角、第二触角、大颚）及眼柄肌肉解剖学结构,所得结果与白对虾Penaeus setiferus作比较,其不同之处列于表1.

关键词：中国对虾眼柄附肢肌肉系统解剖

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青虾眼柄组织总RNA提取方法的比较和分析

中国农学通报 2011年第3期27卷 378-382页

作者：王宁傅洪拓乔慧吴滟龚永生蒋速飞熊贻伟南京农业大学无锡渔业学院江苏无锡214081 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部水生动物遗传育种和养殖生物学重点开放实验室江苏无锡214081

为了找到最适合青虾眼柄总RNA抽提的方法,本试验先后使用RNAiso Plus、RNeasy Mini Kit、Unizol等产品抽提青虾眼柄总RNA并在方法上进行了改良,通过电泳、紫外分光光度计和RT-PCR对总RNA进行检测和分析。结果表明RNAiso法抽提的RNA色素... 详细信息

为了找到最适合青虾眼柄总RNA抽提的方法,本试验先后使用RNAiso Plus、RNeasy Mini Kit、Unizol等产品抽提青虾眼柄总RNA并在方法上进行了改良,通过电泳、紫外分光光度计和RT-PCR对总RNA进行检测和分析。结果表明RNAiso法抽提的RNA色素含量高;改良RNAiso法抽提的RNA有部分降解,含色素少,对反转录酶有一定的抑制作用但不影响RT-PCR;RNeasy Mini Kit能有效去除抑制反转录酶活性的色素且RNA无降解,但DNA污染严重;RNAiso结合RNeasy Mini Kit法和Unizol结合RNeasy Mini Kit法提取的RNA均无DNA污染,也没有抑制反转录酶活性的色素,但后者所提的RNA完整性好。因此,Unizol结合RNeasy Mini Kit法最适合青虾眼柄总RNA的提取,可获得高质量的RNA用于RT-PCR、cDNA文库构建、定量PCR等实验。

关键词：青虾眼柄 RNA提取

中国对虾Penaeus chinensis(O'SBECK)肌肉系统的研究——Ⅱ眼柄及附肢肌肉的解剖2

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杭州大学学报（自然科学版） 1994年第4期21卷 436-444页

作者：卢建平陈宽智杭州大学生物科学与技术系青岛海洋大学海洋生物系

本文描述中国对虾附肢肌肉(第一小颚、第二小颚、第一颚足、第二颚足、第三颚足)的解剖学结构,所得结果与白对虾Penaeus setiferus作比较,其不同之处列于表1。

关键词：中国对虾附肢肌肉系统解剖眼柄

日本对虾（penaeus japonicus）眼柄中胶质细胞的电镜观察

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水产科学 1994年第6期13卷 18-20页

作者：姚泊叶成仁马彦洪梁坤明薛庆丰广州师院生物系

本文用透射电镜观察了日本对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｊａｐｏｎｉｃｕｓ）眼柄内的胶质细胞，结果表明：这些胶质细胞呈圆形、椭圆形，直径４９００—５１００ｎｍ。细胞质无线粒体、高尔基体等细胞器结构。细胞核大，直径约３９００ｎｍ。... 详细信息

本文用透射电镜观察了日本对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｊａｐｏｎｉｃｕｓ）眼柄内的胶质细胞，结果表明：这些胶质细胞呈圆形、椭圆形，直径４９００—５１００ｎｍ。细胞质无线粒体、高尔基体等细胞器结构。细胞核大，直径约３９００ｎｍ。电子致密的异染色质位于核边缘，连成块状。核周腔有明显的增宽现象，细胞膜外有由３—４层组成的片层结构，片层宽度约２０—３３ｎｍ，层距宽度约１５—５０ｎｍ。

关键词：日本对虾眼柄胶质细胞电镜观察

中国对虾PENAEUS CHINENSIS(O’SBECK)肌肉系统的研究 Ⅱ.眼柄及附肢肌肉的解剖3

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杭州大学学报（自然科学版） 1995年第1期22卷 76-82页

作者：卢建平陈宽智杭州大学生物科学与技术系杭州310028 青岛海洋大学海洋生物系

本文描述中国对虾附肢肌肉(第一步足、第五步足、第三游泳足)解剖学结构,所得结果与白对虾Penaeus setiferus作比较,其不同之处列于表1.

关键词：中国对虾附肢肌肉系统解剖眼柄

日本沼虾（Macrobrachium nipponense）卵黄蛋白及切除眼柄对其积累影响的研究

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日本沼虾（Macrobrachium nipponense）卵黄蛋白及切除眼柄对其积...

作者：穆淑梅河北大学

学位级别：硕士

卵黄蛋白是甲壳动物胚胎和幼体生长发育所需的能量和营养来源，因此，它的合成、积累、多寡等等对于胚胎和幼体来说是至关重要的。本文研究了卵黄蛋白的主要成分——卵黄磷蛋白的分离纯化、生化性质等，为最终揭示卵黄蛋白的合成机理奠... 详细信息

卵黄蛋白是甲壳动物胚胎和幼体生长发育所需的能量和营养来源，因此，它的合成、积累、多寡等等对于胚胎和幼体来说是至关重要的。本文研究了卵黄蛋白的主要成分——卵黄磷蛋白的分离纯化、生化性质等，为最终揭示卵黄蛋白的合成机理奠定基础。同时研究了切除单侧眼柄对于卵黄蛋白积累的影响，为探讨切除单侧眼柄对卵质的影响提供基础资料。 1．日本沼虾卵黄磷蛋白的研究利用聚丙烯酰胺凝胶电泳，采用不同的染色方法，从成熟日本沼虾卵巢中鉴定出一种卵黄磷蛋白，用电泳洗脱的方法对其进行了纯化，并对其部分生化性质进行了分析。研究发现，日本沼虾卵黄磷蛋白总分子量为458Ku，SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳分析它由三个多肽亚基组成，分子量分别为110Ku，96Ku，89Ku。同时发现，三亚基的过碘酸-Schiff试剂染色反应均呈阳性，说明三亚基上均有糖辅基的结合。样品缓冲液中β-巯基乙醇的有无并不影响亚基的分离，推测亚基间不存在二硫键。采用常规免疫方法，以纯化的卵黄磷蛋白作为抗原免疫家兔，制备卵黄磷蛋白的特异性抗血清。利用此抗血清，并结合双向免疫扩散和组织免疫学方法对日本沼虾的雌性特异蛋白进行了免疫学研究，发现：日本沼虾的卵黄磷蛋白为雌性特异蛋白;卵黄磷蛋白和卵黄蛋白原有相似的免疫原性;肝胰腺可能是其外源卵黄蛋白的合成场所。日本沼虾雌性特异蛋白与其他物种(罗氏沼虾、中国明对虾、凡纳滨对虾、中华绒螯蟹、斑马鱼)的雌性特异蛋白间没有免疫交叉反应。 2．切除单侧眼柄对卵黄蛋白积累的影响采用剪烫法去除日本沼虾单侧眼柄，对其卵巢发育、蛋白积累进行跟踪。发现切除眼柄可以加快卵巢发育，使其提早成熟。SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳比较不同时期切除眼柄的实验组与正常未切眼柄的对照组卵巢中可溶性蛋白组分摘要...................................曰................口..................................甲....................................的异同，发现切除眼柄三周后，实验组的蛋白组分发生了一些变化，比对照组多出一分子量约为93Ku的蛋白条带，推测切除眼柄对亲虾卵黄蛋白的积累有一定的影响。利用考马斯亮蓝法(Bradford法)比较实验组与对照组卵巢中总蛋白含量，利用免疫火箭电泳比较成熟卵巢中卵黄磷蛋白含量，发现成熟卵巢中无论是总蛋白含量还是卵黄磷蛋白含量，实验组的都要低于对照组的。可见，切除眼柄虽然可以加快卵巢发育，缩短产卵时间，但是成熟卵巢中总蛋白含量和卵黄磷蛋白含量降低，从而可能影响卵子质量以及幼体的成活率。

关键词：日本沼虾卵巢眼柄卵黄磷蛋白电泳免疫学

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调控拟穴青蟹卵巢发育的眼柄转录组学分析

调控拟穴青蟹卵巢发育的眼柄转录组学分析

作者：王晓伟集美大学

学位级别：硕士

拟穴青蟹(Scylla paramamosain)是我国重要的经济养殖蟹种之一。近年来,其性腺发育调控机制的研究越来越受到重视。眼柄是甲壳动物重要的内分泌器官,其X器官-窦腺复合体(X-organ-sinus gland,XO-SG)合成和分泌的CHH家族神经肽调节生殖... 详细信息

拟穴青蟹(Scylla paramamosain)是我国重要的经济养殖蟹种之一。近年来,其性腺发育调控机制的研究越来越受到重视。眼柄是甲壳动物重要的内分泌器官,其X器官-窦腺复合体(X-organ-sinus gland,XO-SG)合成和分泌的CHH家族神经肽调节生殖、蜕皮、摄食等多种生理过程。本研究通过454焦磷酸高通量测序技术,对青蟹雌雄眼柄转录组进行对比分析。在此基础上,筛选出与卵巢调控相关的ESTs,利用SMART-RACE等技术克隆获得甲壳动物高血糖激素3(crustacean hyperglycemic hormone-3,CHH3)、类卵黄发生抑制激素基因(vitellogenesis-inhibiting hormone-like,VIH-like)、G蛋白β1亚基(guanine nucleotide binding protein subunit beta-1,Gnb1)、酪氨酸3-加单氧酶/色氨酸5-加单氧酶激活蛋白ζ(14-3-3ζ)和MAP激酶活化蛋白激酶2(MAPK activated protein kinase 2,MK2)的cDNA序列全长。结果如下:1)通过454高通量测序技术获得了雌雄青蟹眼柄转录组,并进行了雌雄眼柄转录组的比较分析,获得雌性眼柄特异表达的转录子9897条,雄性眼柄特异表达的转录子21691条,雌雄眼柄共同表达的转录子6701条,其中4308条转录子差异表达。对部分转录子验证后,在雌雄眼柄中分别获得3条特异表达的转录子,11条转录子在雌性眼柄高表达,13条转录子在雄性眼柄高表达。2)本研究克隆获得青蟹卵巢发育调控相关的五个基因Sp-CHH3、Sp-VIH-like、Sp-Gnb1、Sp-14-3-3ζ及Sp-MK2的全长cDNA序列:Sp-CHH3的全长1671bp,其中开放阅读框(open reading frame,ORF)为375bp,编码124个氨基酸;Sp-VIH-like的全长479 bp,其中ORF为306 bp,编码102个氨基酸;Sp-Gnb1全长1487bp,其中ORF为1023bp,编码340个氨基酸;Sp-14-3-3ζ全长1092bp,其中ORF为747bp,编码248个氨基酸;Sp-MK2全长1899bp,其中ORF为1095bp,编码364个氨基酸。3)对Sp-VIH-like、Sp-Gnb1、Sp-14-3-3ζ、Sp-ERK2和Sp-MK2基因进行了实时荧光定量PCR分析,进一步了解它们在成熟期各组织的表达水平差异,以及在卵巢发育过程中它们在卵巢和眼柄中的表达量变化。结果显示,Sp-VIH-like基因在眼柄中呈特异性表达,在被检测的其他组织中未发现Sp-VIH-like基因。Sp-Gnb1和Sp-14-3-3ζ在卵巢的表达量显著高于其他组织。Sp-VIH-like基因在眼柄中的表达量从卵巢发育第Ⅲ期开始下降,直至第Ⅴ期;Sp-Gnb1、Sp-14-3-3ζ、Sp-ERK2及Sp-MK2基因在眼柄中的表达量均随卵巢的发育逐渐增加。Sp-14-3-3ζ和Sp-MK2基因在卵巢的表达量随卵巢的发育呈先升高后降低的趋势;Sp-Gnb1在卵巢发育过程中表达较为稳定,未出现显著变化。

关键词：拟穴青蟹 454焦磷酸测序眼柄 CHH家族 ERK信号通路卵巢发育 X器官-窦腺复合体

切除单侧、双侧眼柄对中华绒螯蟹生理生化代谢影响的初步研究

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切除单侧、双侧眼柄对中华绒螯蟹生理生化代谢影响的初步研究

作者：吴江立河北大学

学位级别：硕士

位于眼柄中的器官-窦腺复合体（XO-SG）是甲壳动物内分泌调控中心,它分泌和产生多种激素,包括性腺抑制激素（gonald-inhibiting hormone,GIH）、蜕皮抑制激素（molt-inhibiting hormone,MIH）、高血糖激素（crustacean hyperglycaemic hormone,CHH）、大颚器抑制激素（mandibular organ inhibiting hormone,MOIH）、红色素集聚激素（red pigment concentrating hormone,RPCH）、色素分散激素（pigment dispersing hormone,PDH）等,这几种激素与甲壳动物的生长,蜕皮,精巢和卵巢的发育,体表颜色的变化,血糖平衡等密不可分,它们统称为甲壳动物眼柄神经激素。以中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis,以下简称河蟹）,为实验材料,切除单侧和双侧眼柄后,分别在不同时期对其肝胰腺中蛋白浓度、消化酶的活力,以及血液中蛋白浓度、总脂和蜕皮激素的含量进行测定。 1切除了单侧和双侧眼柄的雄蟹,肝胰腺中蛋白的变化趋势相同,在最初的15天蛋白浓度上升,第20天下降,但是与对照组均没有显著差异,血液中蛋白质含量总体呈升高趋势,但在眼柄切除20天时,蛋白质含量又下降。雌蟹无论切除单侧眼柄还是双侧眼柄,肝胰腺蛋白浓度的变化趋势相同,在最初的15天升高,第20天时降低,与对照组差异显著。切除了单侧和双侧眼柄的雌蟹,血液中蛋白浓度都比对照组大,呈单峰形式变化,峰值出现在实验中期。 2切除眼柄对中华绒螯蟹肝胰腺中胃蛋白酶和胰蛋白酶活力没有明显影响,随着切除眼柄天数的增加,雄蟹的淀粉酶活力增大,雌蟹的淀粉酶活力虽然有变化,但是与对照组没有显著差异。 3对于雄蟹来说,血液中的脂类在切除眼柄最初的5天内,下降明显,随后又逐渐上升到与对照组没有显著差异的水平。切除雌蟹眼柄后,血液中的总脂含量均比对照组高,峰值出现在实验中期。 4切除了单侧眼柄的雄蟹和切除了双侧眼柄的雌蟹,血液中蜕皮激素的含量均比没有切除眼柄的高,呈单峰形式变化,峰值出现在实验中期。

关键词：中华绒螯蟹眼柄蛋白浓度消化酶总脂蜕皮激素